刘红涛
- 作品数：82 被引量：281H指数：9
- 供职机构：郑州大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部“211”工程河南省医学科技攻关计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学文化科学更多>>
- 一种孔板划线实验装置
- 本实用新型涉及一种孔板划线实验装置，包括支撑台，所述支撑台上固定有盒体，盒体中央开设有六孔板固定槽，支撑台上于盒体两端对称固定有长度方向与盒体长度方向相垂直的滑轨，两个滑轨上均安装有滑块，两个滑块上均固定有竖向布置的伸缩...
- 马珊珊刘腾飞关方霞张彦婷刘红涛周建康刘雯雯黄团结邢衢王亚苹周馨魁
- 文献传递
- Notch1信号途径在食管鳞癌细胞中的激活及对细胞周期的影响被引量：2
- 2009年
- 目的观察Notch1信号途径在食管鳞癌EC9706细胞中的激活状态及其对细胞周期的影响。方法通过免疫细胞化学检测Notch1基因在食管鳞癌细胞株EC9706细胞中的表达,并通过免疫荧光方法研究Notch1基因在EC9706细胞中的激活状态。并且利用CCK-8试剂检测食管癌细胞的增殖状态。此外,采用RT-PCR和Western blot技术检测与细胞周期相关基因的表达,最后通过流式细胞仪进一步探索激活的Notch1信号途径对细胞周期的影响。结果转染pcNICD后的食管鳞癌细胞株中发现Notch1基因的表达。免疫荧光结果显示,转染pcNICD后的食管鳞癌细胞株中Notch1信号途径处于激活状态。与未处理和转染pcDNA3.1的EC9706细胞相比,稳定表达NICD的EC9706细胞的生长速率明显受到抑制(P<0.01)。此外,与未处理的和转染pcD-NA3.1的EC9706细胞相比,稳定表达NICD的EC9706细胞的CDK2,cyclin D1和E基因的mRNA和蛋白的表达明显下调(P<0.05)。转染pcNICD的EC9706细胞在G0/G1期的比率高达74.5%,而未处理的和转染pcDNA3.1的EC9706细胞在G0/G1期的比率分别为59.1%和59.0%。细胞周期分析显示瞬时表达NICD的EC9706细胞在G0/G1期比率的增加,提示激活的Notch1信号途径能够诱导细胞静止在G0/G1期。结论Notch1信号途径的激活引起食管鳞癌细胞的细胞周期静止,提示Notch1基因有可能成为治疗食管鳞癌的新靶点。
- 许培荣范天黎刘冲鲁照明刘红涛巩天晓薛乐勋
- 关键词：细胞周期EC9706细胞
- 中药双向调控肿瘤免疫治疗癌症的机制研究
- 2024年
- 中医药在改善肿瘤常见症状、缓解放化疗不适、提高患者生存质量等方面具有显著优势。中药及其活性成分具有广泛的药理作用,不仅能够增强机体免疫反应,发挥抗肿瘤作用,还能通过上调Treg等免疫抑制细胞及相关因子改善免疫系统的过度激活,进而发挥肿瘤免疫的双向调节作用,治疗肿瘤。但目前研究仍有下列不足:中药调控肿瘤免疫的具体作用机制及免疫治疗靶点尚未明确;中医基础理论与现代药理作用结合不足;中药调节B淋巴细胞治疗肿瘤的相关研究有待深入探究;中药双向调控肿瘤免疫的研究多基于单个靶点或单个方向,缺乏机制串联研究,需加强多靶点、多通路研究。今后可进一步探索中药调节免疫治疗肿瘤相关机制,基于免疫学技术深化中医药免疫基础研究,同时协同化疗药物治疗恶性肿瘤,发挥中药减毒增效的作用,为中西医结合防治肿瘤提供新思路。
- 林丽丽周怡刘红涛仝李丹柳聪艳史攀博郝义彬
- 关键词：癌症中药肿瘤免疫
- 一种蓝藻病毒(噬藻体)的分离及其若干生物学特性的研究初报
- ＜正＞ 从武汉市某污水处理场采集的水样,经过0.45um的滤膜过滤后,接种到混有若干种蓝藻的液体培养物中培养一周,后经10％的氯仿处理,将上清液分别感染若干种蓝藻的液体和固体培养物,发现对鲍氏织线藻（IU594）有明显的...
- 赵以军程凯许敏刘红涛卢蒙
- 文献传递
- 杜氏盐藻核基质附着区结合蛋白基因的克隆及原核表达被引量：1
- 2008年
- 目的:构建杜氏盐藻核基质附着区(MAR)结合蛋白的原核表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),表达并纯化融合蛋白。方法:根据GenBank上杜氏盐藻MAR结合蛋白的cDNA全长序列设计出含有特定酶切位点的引物,PCR法获得MAR结合蛋白基因序列全长,将其克隆至载体pMD18-T中。酶切连接到pET-28a(+)上构建原核表达载体pET-MBP,转化感受态大肠杆菌BL21(DE3),异丙基硫代-β-半乳糖苷(IPTG)诱导其表达,Western blotting检验其表达结果。结果:重组质粒经酶切、PCR、测序鉴定,成功构建了原核表达载体pET-MBP,对表达的融合蛋白的Western blotting分析结果表明表达的蛋白质为目的蛋白。Ni2+亲和层析法纯化蛋白质,纯化后目的蛋白在总蛋白中的含量约为70%。结论:成功地克隆杜氏盐藻MAR结合蛋白基因的全长并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,且纯化了MAR结合蛋白的融合蛋白。
- 冯英才王天云王鹏举刘红涛刘兰琦薛乐勋
- 关键词：杜氏盐藻核基质附着区原核表达
- 杜氏盐藻光系统Ⅱ反应中心蛋白D1基因的克隆及序列分析被引量：2
- 2008年
- 目的:克隆杜氏盐藻光系统Ⅱ反应中心蛋白D1(psbA)基因cDNA片段。方法:根据莱茵衣藻、稻以及普通小球藻等真核生物psbA基因的氨基酸高度保守序列,设计一对简并引物,利用Trizol试剂提取杜氏盐藻细胞总RNA,通过RT-PCR获得杜氏盐藻psbA cDNA,PCR产物连接T载体转化大肠杆菌JM109,随机挑取数个菌落,筛选鉴定并测序,测序结果进行Blast比对分析和密码子偏爱性分析。结果:获得的cDNA片段长度为999 bp,编码333个氨基酸。其氨基酸序列与其他物种进行Blast比对,同源性分别为:衣藻89%、椭圆小球藻89%、莱茵衣藻89%、普通小球藻88%和玉米87%。psbA基因存在明显的密码子偏爱性,其(A+T)含量明显高于(G+C)含量。另外,所克隆的psbA序列编码赖氨酸残基的数量为1个。结论:所克隆的序列为杜氏盐藻psbA基因cDNA片段。
- 刘红涛范天黎鲁照明王鹏举陈涛薛乐勋
- 关键词：杜氏盐藻密码子偏爱性
- siRNA阻断NF-κB信号通路抑制宫颈癌HeLa229细胞的增殖及侵袭被引量：5
- 2008年
- 目的通过RNA干扰阻断宫颈癌HeLa229细胞中NF-κB信号通路,研究其与肿瘤细胞增殖、耐药和侵袭力的关系。方法利用RNAi技术,将HeLa229分为转染组和对照组,MTT法检测细胞增殖,Boyden chamber体外侵袭实验检测细胞体外侵袭力。结果MTT实验表明,转染组细胞存活率比对照组明显下降,联合应用化疗药,转染组和对照组细胞的存活率均随着5-Fu浓度的增加而下降,但在同一浓度,siRNA与5-Fu联合应用可明显提高HeLa229细胞对化疗药的敏感性。体外侵袭实验结果表明,和对照组相比,转染P65siRNA组穿越Matrigel胶的细胞数明显减少(P<0.05)。结论应用RNAi技术可有效阻断NF-κB信号通路,抑制宫颈癌细胞的增殖和体外侵袭力,增强对5-Fu的敏感性。因此,可将NF-κB信号通路作为宫颈癌基因治疗的靶点。
- 田卫红田芳许培荣刘红涛薛乐勋
- 关键词：宫颈癌NF-KAPPABSIRNA
- Notch1-NICD胞内结构域真核表达载体的构建及其初步功能分析被引量：2
- 2009年
- 目的:构建包含Notch1胞内结构域的Notch1-NICD真核表达载体及绿色荧光蛋白载体并转染食管鳞状细胞癌细胞株EC9706及Eca109,并对Notch1-NICD1在食管鳞状细胞癌中的功能进行初步探索。方法:根据GenBank上的Notch1-NICD序列设计扩增引物,由RT-PCR扩增NICD片段,测序鉴定,并通过Blast进行序列比对,然后回收目的片段并与真核表达载体pcDNA3.1(+)相连,构建Notch1-NICD真核表达载体pNotch1-NICD1,同时将扩增的NICD与pEGFP-C1载体相连构建绿色荧光蛋白表达载体pENotch1-NICD1,并转染EC9706及Eca109,观察Notch1在细胞中的定位及其途径的激活状态。同时将pNotch1-NICD1真核表达载体转染EC9706及Eca109,用MTT法分别在24h、48h、72h、96h及120h观察外源性Notch1片段的导入对EC9706及Eca109细胞增殖的影响。结果:通过RT-PCR获得1个Notch1胞内区片段,并成功构建了包含Notch1胞内区结构域的绿色荧光蛋白载体及真核表达载体。转染pENotch1-NICD1后,Notch1在胞质和胞核内均有表达,表明Notch1信号通路被激活。此外,MTT结果表明转染Notch1-NICD1片段的食管鳞状细胞癌细胞的增殖受到明显抑制(P<0.05)。结论:成功构建了Notch1绿色荧光蛋白表达载体及pcDNA3.1(+)真核表达载体。外源Notch1片段的引入能够明显抑制食管鳞状细胞癌细胞的增殖,提示Notch1基因有可能成为治疗食管鳞状细胞癌的一个潜在的分子靶点。
- 巩天晓刘红涛鲁照明许培荣薛乐勋
- 关键词：真核表达载体
- 杜氏盐藻RuBisCO小亚基基因的克隆和分析被引量：5
- 2008年
- 根据莱茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii)、团藻(Volvox carteri)、伞藻(Acetabularia cliftonii)等生物的1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(RuBisCO)的小亚基rbcS基因氨基酸的高度保守序列,设计一对简并引物,进行RT-PCR.209bp的PCR产物经测序分析及进行氨基酸序列同源性比对,表明克隆的序列为盐藻rbcS基因的cDNA片段.根据该序列信息,采用RACE(rapid amplification of cDNA ends)的方法扩增其5′上游未知区和3′下游未知区.5′RACE得到的cDNA长度为约300bp,3′RACE得到的长度约380bp.三段序列拼接后cDNA全长为878bp,其中开放读码框包括190个氨基酸.此cDNA序列,推导成氨基酸序列与已知物种的rbcS基因相比对,同源性分别为V.carteri78%,C.reinhardtii75%,A.cliftonii67%,据此可推断所克隆的序列为盐藻RuBisCO的小亚基cDNA序列,GenBank收录号为AY739272.
- 柴玉荣刘国红刘红涛李杰薛乐勋
- 关键词：盐藻1,5-二磷酸核酮糖羧化酶加氧酶RBCS
- 姜黄素阻断NF-κB信号通路促进食管鳞癌细胞凋亡的体外研究被引量：18
- 2008年
- 背景与目的:活化的核转录因子-kappa B(nuclear factor-kappa B,NF-κB)信号通路参与调控多种与炎症、抗凋亡、肿瘤形成和转化有关的基因表达。但在食管鳞癌中的作用尚不清楚。姜黄素具有抗感染、抗氧化等多种药理作用。本研究将探讨姜黄素是否能够通过阻断NF-κB信号通路对食管鳞癌细胞增殖、抗凋亡产生影响。方法:Western blot法检测EC9706和Eca109细胞中加入姜黄素(50μmol/L)培养不同时间后,pIκBα和抗凋亡蛋白Bcl-2的表达情况。在EC9706和Eca109细胞中加入姜黄素培养72h,流式细胞仪检测凋亡细胞情况。MTT法检测姜黄素单独或与5-FU联合对细胞增殖的影响。结果:Western blot的结果显示,在姜黄素作用下EC9706和Eca109细胞中pIκBα和Bcl-2蛋白的表达水平随着时间的延长逐渐下降。在单独使用姜黄素后,就可促进EC9706和Eca109细胞的凋亡(P<0.05);当与5-FU联合使用时,可明显提高EC9706和Eca109细胞对化疗药物的敏感性,凋亡细胞显著增加(P<0.05)。姜黄素与5-FU联合应用48h和72h,可明显抑制EC9706和Eca109细胞的增殖,与单独使用姜黄素或5-FU组相比,细胞存活率显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:姜黄素可以通过抑制IκBα的磷酸化阻断NF-κB信号通路,促进细胞凋亡,抑制细胞增殖,增加细胞对5-FU的敏感性。
- 田芳宋敏许培荣刘红涛薛乐勋
- 关键词：EC9706细胞ECA109细胞姜黄素NF-ΚB信号通路IΚBΑ
