冷希岗
- 作品数：148 被引量：230H指数：8
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院生物医学工程研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金天津市自然科学基金天津市应用基础与前沿技术研究计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学一般工业技术理学更多>>
- 壳聚糖纳米粒子介导TFPI基因转染的实验研究
- 2007年
- 目的:评价壳聚糖纳米粒子携带组织因子途径抑制因子(tissuefactorpathwayinhibitor,TFPI)基因转染的效率及其细胞毒性。方法:制备壳聚糖纳米粒子-TFPI基因复合物,检测其粒度,zeta电位,包埋效率。以Lipofectamine2000为对照,观察血管平滑肌细胞系A10对壳聚糖TFPI基因纳米复合物的摄入速度和数量;利用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测体外转染效果;应用噻唑蓝(MTT)评价壳聚糖纳米粒子的体外细胞毒性。结果:壳聚糖TFPI基因纳米复合物的平均粒径约为141nm,zeta电位为6.8mV;其DNA包埋效率和DNA含量分别为(98.8±3.4)%和(38.1±2.3)%。A10细胞的摄入和转染实验显示其效率与商品化的细胞转染试剂Lipofectamine2000相近,但是其毒性远低于Lipofectamine2000。结论:壳聚糖纳米粒子可高效携带TFPI基因转染平滑肌细胞,而且对细胞基本无毒性。
- 张海玲朱敦皖李大伟冷希岗
- 关键词：壳多糖富勒烯转染
- 表达OVA和GFP的MC38细胞株构建及其肿瘤免疫评价初探
- 2019年
- 目的构建过表达肿瘤模式抗原——鸡卵白蛋白(OVA)和绿色荧光蛋白(GFP)的结肠癌细胞系OVA-GMC38及荷瘤小鼠模型,初步探索其在肿瘤免疫评价的应用。方法采用携带OVA和GFP双基因的慢病毒感染结肠癌细胞系MC38细胞,分别用荧光显微镜和流式细胞仪观察MC38细胞感染后GFP表达水平,并用定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western blot方法检测OVA表达水平。将6～8周雌性C57BL/6小鼠随机分为2组(MC38组、OVAGMC38组),每组9只,分别种植MC38和OVA-GMC38细胞观察致瘤率,评价基因转染对致瘤率的影响。6～8周雌性C57BL/6小鼠种植OVA-GMC38细胞,小鼠根据肿瘤大小平均分为2组[磷酸盐缓冲溶液(PBS)组、OVA免疫组],每组6只,荷瘤小鼠3周内用OVA免疫3次,记录各小鼠体质量、肿瘤体积变化及免疫后肿瘤的质量,评价OVA-GMC38荷瘤小鼠模型的肿瘤免疫效果;流式细胞仪检测被免疫的荷瘤小鼠脾脏中T细胞的比例,评价肿瘤模式抗原免疫对体内T细胞的影响。结果荧光显微镜和流式细胞仪观察结果表明,慢病毒成功感染95.1%MC38细胞。qRT-PCR结果显示OVA-GMC38细胞表达OVA mRNA水平显著高于MC38细胞。Western blot结果表明OVA-GMC38细胞有OVA表达(阳性对照光密度比值为0.71,OVA-GMC38光密度比值为1.11),而MC38细胞不表达。小鼠种植肿瘤结果表明OVAGMC38细胞与MC38相比,致瘤能力不受影响。荷瘤小鼠OVA免疫后肿瘤更小(t=3.590,P=0.004 9),说明免疫后肿瘤生长延缓。另外,PBS组与OVA免疫组小鼠体质量均无明显变化(t=1.796,P=0.102 7);OVA免疫组脾脏中CD8^+(t=7.218,P<0.000 1)和CD4^+(t=4.685,P<0.000 1)T细胞比例明显高于PBS组,差异有显著统计学意义。结论成功建立稳定表达OVA和GFP的OVA-GMC38细胞株,能够作为肿瘤特异抗原细胞模型来进行肿瘤免疫评价的研究。
- 王宁杨影田欣欣庞丽云张海玲冷希岗
- 关键词：免疫疗法肿瘤模型
- 壳聚糖载基因纳米粒子荧光标记的优化研究被引量：3
- 2008年
- 目的研究荧光素异硫氰酸酯(FITC)与壳聚糖反应的主要影响因素,观察荧光标记对纳米粒子表征和转染效率的影响,以期建立一种快速、稳定并且适宜壳聚糖纳米载体示踪的荧光标记方法。方法FITC与壳聚糖在不同反应物比例、溶液pH及温度条件下反应,纯化并收获产物,计算其标记效率。采用复凝聚法制备荧光标记的壳聚糖载基因纳米粒子,并检测其表征及对Hela细胞转染效率。结果在该实验中,标记效率随着pH增大而增加,弱碱性(pH7.5)时最佳;随着反应温度的升高,标记效率也随之上升;标记效率还随FITC添加的比例增大而升高。壳聚糖纳米粒子表征和转染效率实验显示最佳的壳聚糖标记条件是反应物壳聚糖与FITC的添加比例为25∶1,在pH7.5、室温25℃条件下反应4h。结论优化的壳聚糖荧光标记方案的标记率比以前文献报道的方法高近3倍,用标记的壳聚糖制备的基因纳米粒子粒径及细胞转染效率与未标记壳聚糖制备的纳米粒子相近,可以达到较好的示踪效果。
- 张海玲朱敦皖董霞刘兰霞冷希岗
- 关键词：壳聚糖荧光标记
- LHRH-MPG△NLS/CDK2-siRNA对HepG2细胞生长的抑制作用研究
- 2014年
- 目的 考察小干扰RNA（siRNA）载体促黄体激素释放激素-MPG△NLS（LHRH-MPGNLS）负载针对细胞周期素依赖性激酶2（CDK2）的siRNA所形成纳米粒的粒径和Zeta电位,观察不同溶剂对纳米粒粒径的影响,研究其对肝癌细胞HepG2的抑制效果.方法 将LHRH-MPG△NLS与CDK2-siRNA按氨磷比（N/P）为10/1、20/1、40/1混合,通过自组装形成纳米粒,用动态光散射仪检测纳米粒的粒径和Zeta电位,考察焦碳酸二乙酯（DEPC）处理水、质量分数为10％葡萄糖溶液和生理盐水对纳米粒粒径的影响,用CCK8试剂盒测试纳米粒对HepG2细胞生长的抑制作用.结果 LHRH-MPG△NLS/CDK2-siRNA纳米粒的平均粒径均在200 nm以下,N/P为10/1、20/1、40/1时的Zeta电位分别为（70±5）、（120±5）、（130±5） mV.生理盐水中纳米粒粒径明显增大,说明强电解质对纳米粒粒径产生较大影响.纳米粒终浓度为200 nmol/L时,N/P为10/1的纳米粒对HepG2细胞的生长具有明显抑制作用.结论 LHRH-MPG△NLS/CDK2-siRNA纳米粒的平均粒径在200 nm以下,容易被细胞摄取,Zeta电位显示纳米粒可以在水溶液中稳定存在,但强电解质会影响纳米粒的稳定性,使其粒径增大.纳米粒终浓度为200 nmol/L时,N/P为10/1的纳米粒对HepG2细胞生长的抑制效果显著.
- 乔鑫潇邵楠董霞刘兰霞朱敦皖冷希岗
- 关键词：小干扰RNA纳米粒肝癌细胞
- 载壳聚糖基因纳米粒子血管支架局部基因释放的研究
- 朱敦皖金旭宋存先冷希岗
- 以离子液体为介质的3D打印壳聚糖材料及其制备方法
- 本发明涉及以离子液体为介质的3D打印壳聚糖材料及其制备方法和应用，所述介质至少包括离子液体，所述离子液体至少为1‑烯丙基‑3‑甲基咪唑溴盐，1‑烯丙基‑3‑甲基咪唑氯盐，1‑乙基‑3‑甲基咪唑氯盐，1‑丁基‑3‑甲基咪唑...
- 李博轩冷希岗王志红
- 文献传递
- 含人组织因子途径抑制因子和GFP的真核双表达载体及构建方法
- 本发明公开了含人组织因子途径抑制因子和GFP的真核双表达载体及构建方法，载体是用下述方法制成：以序列表SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3所述序列为PCR引物，以pIRES-TFPI为模板，扩增出人组织因子途径...
- 冷希岗楼莎宋丽萍朱敦皖董霞刘兰霞
- 文献传递
- TAT-LHRH-壳聚糖/siRNA纳米复合物与巨噬细胞的相互作用被引量：1
- 2015年
- 目的评价反式转录激活因子短肽-促黄体生成激素释放激素(TAT-LHRH)修饰的低分子质量壳聚糖(LMWC)作为siRNA载体的生物安全性。方法利用琥珀亚酰胺基-3-2-硫代吡啶-丙酸酯(SPDP)共价连接TAT-LHRH双功能肽及LMWC(相对分子质量5 000~8 000;脱乙酰化程度90%),合成TAT-LHRH-壳聚糖(TLC)载体,并与未修饰的LMWC分别和非编码siRNA(序列5′-UUCUCCGAACGUGUCACGUTTACGUGACACGUUCGGAGAATT-3′)混合,合成TLC/siRNA纳米复合物和LMWC/siRNA纳米复合物。利用凝胶阻滞及光散射实验观察纳米粒的表征,并通过酶联免疫吸附分析(ELISA)、流式细胞术及体内巨噬细胞吞噬实验分析纳米复合物诱导小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7所引起的细胞因子白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-12(IL-12)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-10(IL-10)的变化,以及对人巨噬细胞吞噬活性的影响。结果与未进行任何修饰的壳聚糖相比,TLC具有更好的siRNA结合能力(N/P比分别为1∶2、1∶1、2∶1、5∶1和10∶1)。以不同N/P(10∶1、20∶1)与siRNA形成纳米复合体后,其粒径分布于90~150 nm,zeta电位稳定在+2.7^+19.3 m V。含200 nmol/L siRNA的TLC/siRNA纳米复合物在24 h内未引起上述细胞因子的明显释放。体内与体外的巨噬细胞吞噬实验证明,相比未修饰壳聚糖/siRNA复合物而言,TLC/siRNA纳米复合物被巨噬细胞摄入量更高,但两者均未对吞噬活性和细胞因子生成产生明显影响。结论 TLC无明显免疫毒性,是一种有应用前景的siRNA载体。
- 邵楠董霞刘兰霞朱敦皖张海玲冷希岗
- 关键词：壳聚糖巨噬细胞
- 生物材料诱发血栓形成机制的研究进展被引量：16
- 1998年
- 本文对生物材料诱发血栓的机制进行了综述。着重介绍了材料通过影响血管内皮细胞、组织因子、血小板、基质蛋白和细胞因子等几方面进而引发血栓形成的机制，并对将来生物材料血液相容性的研究方法和从分子水平上设计新型生物材料进行了展望。
- 王传华冷希岗
- 关键词：生物材料血栓形成基质蛋白
- 一种迷你联合佐剂纳米颗粒及其制备方法和应用
- 本发明公开了一种以两亲性单体分子为基元通过自组装制备而成的联合佐剂纳米颗粒，所述两亲性单体分子为疏水性佐剂分子和亲水性佐剂分子反应得到。该联合佐剂纳米颗粒的刺激作用相对于游离状态下联合应用亲水性佐剂和疏水性佐剂产生的作用...
- 刘兰霞刘丹刘佳乐冷希岗
