黄红亮
- 作品数：8 被引量：18H指数：2
- 供职机构：暨南大学更多>>
- 发文基金：中国博士后科学基金广州市科技计划项目教育部科学技术研究重点项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- bFGF反义硫代寡核苷酸增强人喉鳞癌Hep2细胞的化疗敏感性
- 2007年
- 目的:研究bFGF反义硫代寡核苷酸增强人喉鳞癌Hep2细胞对多柔比星、氟脲嘧啶及顺铂的敏感性。方法:设计、合成bFGF反义脱氧寡核苷酸(AS),用聚乙烯亚胺(jetPEI)介导bFGF反义脱氧寡核苷酸转染入Hep2细胞;半定量RT- PCR测定bFGF反义硫代寡核苷酸转染后细胞中bFGF mRNA水平;免疫细胞化学法检测Hep2细胞转染前后bEGF的表达水平;FACS分析bFGF反义硫代寡核苷酸诱导细胞的凋亡;MTT法检测bEGF反义硫代寡核苷酸及其与化疗药物联合处理后的细胞增殖。结果:bFGF反义硫代寡核苷酸呈剂量与时间依赖抑制Hep2细胞增殖,最高抑制率为25.5%;被转染细胞bFGF mRNA和蛋白的表达分别降低52.0%和41.1%,细胞凋亡率为20.5%;bFGF反义硫代寡核苷酸协同多柔比星、氟脲嘧啶及顺铂作用Hep2,使3种药物的IC_(50)分别降低75.5%、83.5%及65.4%。结论:bFGF反义硫代寡核苷酸协同化疗药物增强Hep2细胞对化疗药物敏感性,将为人喉鳞癌的生物和化学药物治疗增添新途径。
- 黄红亮王宏向军俭唐勇邓宁杨红宇
- 关键词：碱性成纤维细胞生长因子喉鳞癌反义硫代寡核苷酸化疗敏感性
- 抗重组人bFGF单克隆抗体可变区基因克隆及单链抗体的构建和表达被引量：4
- 2007年
- 目的:从分泌抗重组人碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)单克隆抗体(mAb)杂交瘤细胞株B2F3中克隆抗体可变区(V)基因,构建bFGF单链抗体(scFv),并进行可溶性表达。方法:从分泌bFGF mAb杂交瘤细胞株B2F3提取总RNA,用RT-PCR方法扩增抗体重链可变区基因(VH)和轻链的可变区基因(VL);再通过重叠延伸拼接(SOE)PCR方法,在VH和VL基因之间引入linker(Gly4Ser)3,构建bFGFscFv。将测序正确的scFv基因克隆到表达载体pCANTAB5E中,选择非抑制型菌株E.coli HB2151进行可溶性表达;经SDS-PAGE检测抗体表达水平,ELISA鉴定其抗原结合活性。结果:测序分析结果显示,VH基因序列全长375碱基对,编码125个氨基酸,VL基因序列全长399碱基对,编码133个氨基酸,二者均符合小鼠免疫球蛋白可变区基因特征,含有4个框架区(FR)、3个抗原互补决定区(CDR)及抗体特征性的2个半胱氨酸残基;构建的scFv全长789碱基对,编码263个氨基酸,连接结构为VH-linker-VL。SDS-PAGE分析表明scFv基因在大肠杆菌为可溶性表达,表达产物主要位于周质腔中,表达产物的Mr为27000,与理论预期值相符;间接ELISA检测结果显示原核表达的scFv具有与bFGF特异性结合的活性。结论:成功地克隆bFGF mAb可变区基因,并构建表达bFGF scFv,为下一步研究bFGF抗体人源化改造奠定实验基础。
- 王宏陈丹邓宁向军俭靳英杰黄红亮唐勇杨红宇
- 关键词：BFGF单克隆抗体可变区基因单链抗体
- 抗土霉素单克隆抗体的制备及其特性分析
- 2007年
- 目的:制备抗土霉素(OTC)的单克隆抗体(mAb),对其特异性和竞争ELISA的实用性进行分析。方法:通过碳二亚胺法和羰基二咪唑法分别将OTC与载体蛋白(BSA、OVA)偶联制备免疫原和检测抗原,用杂交瘤技术制备mAb,鉴定mAb的特异性并用于竞争ELISA效果分析。结果:获得1株能稳定分泌抗OTC的mAb杂交瘤细胞株,mAb腹水的ELISA效价为3×104,土霉素竞争ELISA检测下限为1mg/L。结论:抗OTC的mAb具有抗原结合特异性,可用于OTC竞争ELISA免疫学检测。
- 向军俭陈越唐勇杨金蓉杨红宇王宏黄红亮
- 关键词：土霉素单克隆抗体竞争ELISA
- bFGF反义寡核苷酸增强鼠黑色素瘤B16细胞化疗药物敏感性研究
- 2007年
- 目的:研究bFGF反义硫代寡核苷酸增强肿瘤细胞对化疗药物敏感性作用。方法:设计、合成bFGF寡核苷酸,用聚乙烯亚胺(polyemyleneimine,PEI)介导bFGF反义硫代寡核苷酸转染入黑色素瘤B16细胞,MTT法检测bFGF反义硫代寡核苷酸及其与化疗药物联合处理后的细胞增殖率;半定量RT-PCR测定bFGF反义硫代寡核苷酸转染后细胞中bFGF mRNA水平;流式细胞仪分析bFGF反义硫代寡核苷酸诱导的细胞凋亡。结果:bFGF反义硫代寡核苷酸对B16细胞增殖的抑制率为64.8%,且呈剂量依赖效应。B16细胞中bFGF mRNA被bFGF反义硫代寡核苷酸显著降低,为对照细胞的57.9%,且bFGF反义硫代寡核苷酸诱导B16细胞凋亡,凋亡率为41.8%。bFGF反义硫代寡核苷酸转染能显著增强B16细胞对阿霉素、5-氟脲嘧啶及顺铂的敏感性,非特异性硫代寡核苷酸不影响阿霉素、5-氟脲嘧啶及顺铂抑制B16细胞增殖。结论:bFGF反义硫代寡核苷酸显著增强B16细胞的化疗敏感性,表明其可协同化疗药物用于治疗肿瘤。
- 黄红亮王宏唐勇邓宁杨红宇向军俭
- 关键词：BFGF肿瘤反义寡核苷酸药物敏感性
- 硫代bFGF寡核苷酸抑制HepG2和Hep2细胞的增殖被引量：2
- 2008年
- 目的探讨硫代修饰对bFGF寡核苷酸抑制HepG2和Hep2细胞增殖的影响。方法设计、合成bFGF寡核苷酸,聚乙烯亚胺(jetPEI)介导其转染入HepG2和Hep2细胞,荧光显微镜观察其在细胞中的定位,流式细胞仪分析转染效率,MTT法检测细胞增殖。结果bFGF反/正义硫代寡核苷酸被jetPEI介导高效转染入细胞内,主要位于细胞核。反/正义硫代寡核苷酸均呈剂量时间依赖地抑制细胞增殖,相同剂量时正硫代寡核苷酸的抑制效率高于反义硫代寡核苷酸。相应非修饰反义寡核苷酸较其互补正义链能更有效抑制两种细胞增殖。核苷酸突变明显降低反义硫代寡核苷酸对细胞抑制,并不影响正义硫代寡核苷酸的细胞抑制率。反义硫代寡核苷酸明显降低细胞中bFGF表达。结论硫代修饰bFGF反义寡核苷酸在细胞内特异性结合核酸以反义机制抑制肿瘤细胞增殖,正义寡核苷酸则因硫代修饰于细胞内以非核酸特异性机制抑制肿瘤细胞增殖。
- 黄红亮向军俭唐勇王宏邓宁靳英杰
- 关键词：BFGF
- 重组人bFGF单克隆抗体的特性分析
- 本文对重组人bFGF单克隆抗体的特性进行了分析。结果显示，MabF2、MabF6和MabF7均能导致HEP-2及HEPG-2细胞死亡,而MabF11、MabF15仅分别对HEPG-2、HEP-2起作用，说明bFGF的活性...
- 向军俭黄红亮靳英杰唐勇邓宁王宏
- 关键词：纤维细胞单克隆抗体细胞特异性
- 文献传递
- 硫代修饰bFGF寡核苷酸对B16细胞和L1210细胞增殖的影响
- 2008年
- 目的研究bFGF寡核苷酸被硫代修饰后对肿瘤细胞增殖的影响。方法设计、合成bFGF寡核苷酸,用聚乙烯亚胺(jetPEI)介导bFGF寡核苷酸转染入黑色素瘤B16细胞和白血病L1210细胞,MTT法检测细胞增殖;微分干涉荧光显微镜观察硫代寡核苷酸在细胞中的定位;流式细胞仪分析寡核苷酸转染效率。结果正/反义硫代寡核苷酸被jetPEI介导成功转染入B16细胞和L1210细胞,在B16细胞均主要分布于细胞核,在L1210细胞分别主要分布于细胞核和细胞质。反义硫代寡核苷酸呈剂量依赖地抑制B16与L1210细胞增殖,且核苷酸突变能降低其对2种肿瘤细胞的增殖抑制。相应非修饰反义寡核苷酸也能显著抑制2种细胞增殖。正义硫代寡核苷酸能呈剂量依赖效应显著影响B16细胞增殖,显著高于非修饰正义寡核苷酸,且其抑制作用并未因核苷酸突变而降低。正义硫代寡核苷酸并不显著L1210细胞增殖,与非修饰正义寡核苷酸的效应基本一致。结论硫代修饰并未明显影响bFGF反义寡核苷酸在细胞内特异性结合核酸的性质,硫代反义寡核苷酸仍能以反义机制抑制肿瘤细胞增殖,但硫代修饰可能改变了bFGF正义寡核苷酸的某些性质,致使其于细胞内以一种非核酸特异性机制影响肿瘤细胞增殖。
- 黄红亮王宏唐勇邓宁杨红宇向军俭
- 关键词：碱性成纤维细胞生长因子
- 人bFGF单克隆抗体的制备及MabF7对黑色素瘤B16的体外抗瘤效应被引量：12
- 2008年
- 目的:制备抗人碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)单克隆抗体,并探讨其体外对黑色素瘤细胞B16的抗肿瘤效应。方法:以rhbFGF免疫Balb/C小鼠,用杂交瘤技术制备单克隆抗体;间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞株,测定腹水型单抗的效价及其Ig亚类;用RT-PCR、细胞免疫组化和双抗体夹心等方法检测黑色素瘤B16细胞中bFGF的表达;用MTT法检测单抗MabF7对B16细胞的体外抑瘤效应;用流式细胞术及DNA琼脂糖电泳技术检测细胞凋亡。结果:共获得19株稳定分泌抗bFGF单抗的杂交瘤细胞株;ELISA效价>105;除MabF8、MabF9为IgG2a外,其余为IgG1;黑色素瘤细胞B16中有bFGFmRNA及其蛋白的表达,且可在细胞培养液中检测到bFGF;经蛋白A纯化的MabF7对B16细胞的抑制作用呈剂量及时间累计效应,抑制率为(39±4.12)%,P<0.01。流式细胞术结果显示,随抗体浓度增加及作用时间延长,肿瘤细胞在G1期前出现明显的亚二倍体期;DNA电泳结果显示,抗体作用后的细胞DNA呈明显的梯度条带。结论:MabF7具有体外抑制黑色素瘤B16细胞增殖作用,其机制与诱导细胞凋亡有关。
- 向军俭靳英杰黄红亮王宏杨红宇唐勇
- 关键词：成纤维细胞生长因子碱性抗体单克隆黑色素瘤
