魏取好 作品数:69 被引量:209 H指数:9 供职机构: 上海交通大学附属第六人民医院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 浙江省自然科学基金 浙江省医学重点学科基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 电子电信 农业科学 自动化与计算机技术 更多>>
建立高分辨率熔解曲线法筛选含VEB-3型基因菌株 被引量:1 2010年 目的 建立高分辨率熔解曲线法筛选含VEB-3型基因菌株.方法 不重复收集2003年1-12月革兰阴性杆菌产超广谱β-内酰胺酶(ESBL)菌株292株,用酚-氯仿法抽提基因组DNA;首先以基因组DNA为模板,PCR扩增VEB基因;挑选阳性菌株34株再PCR扩增包含168位点的一段约110 bp的基因片段,高分辨率熔解曲线(high resolution melt,HRM)分析后测序验证.结果 VEB-3亚型与其他亚型基因通过HRM分析具有显著的差别;测序结果与HRM分型结果一致.结论 应用HRM技术可以准确快速筛选含VEB-3型基因菌株. 李刚 魏取好 倪瑛乔 王艳艳 杜昕 蒋晓飞关键词:超广谱Β-内酰胺酶 临床分离变形杆菌不典型第1类整合子结构分析 被引量:5 2018年 目的确定临床分离变形杆菌中不典型第1类整合子的结构。方法在26株第1类整合酶基因阳性可变区扩增失败的变形杆菌临床分离株中,选取6株通过反向PCR扩增第1类整合酶基因周围DNA片段,PCR产物测序结果通过BLAST进行比对分析,确定同源目标序列后,查看GenBank该提取码对应序列文件靶序列周围序列,再根据周围序列设计合成引物进行重叠PCR并测序验证。结果通过反向PCR及重叠PCR测序分析,26株变形杆菌临床分离株中,25株细菌第1类整合子可变区结构全部或部分确定,其中22株细菌第1类整合子可变区结构为estX-psp-aadA2-cmlA1-aadA1a-qacI-tnpA-sul3,另3株第1类整合子可变区分别为estX-psp-aadA2-cmlA1、dfrA14、IS26,均缺失3′保守区。结论反向PCR可用于临床菌株中不典型第1类整合子结构分析,在临床分离变形杆菌中首次检出基因盒psp及基因盒组合estX-psp-aadA2-cmlA1-aadA1a-qacI-tnpA-sul3、estX-psp-aadA2-cmlA1。 魏取好 魏取好 胡庆丰 胡庆丰 刘维薇关键词:整合子 基因盒 反向PCR 耐药性 变形杆菌 miR-34b调控去泛素化酶USP22在急性髓细胞白血病细胞HL60中的生物学作用 被引量:5 2019年 目的研究miR-34b调控其靶基因USP22分子机制及其在急性髓细胞白血病细胞HL60中的生物学效应。方法荧光定量PCR (qPCR)检测miR-34b、USP22转录水平;蛋白免疫印迹(Western blotting)检测USP22、Bax、Bcl-2蛋白表达水平;急性髓细胞白血病HL60细胞中过表达、抑制miR-34b或干扰USP22后,CCK-8及AnneximV分别检测细胞增殖活性及凋亡变化。双荧光素酶报告基因系统证实miR-34b与USP22的3,非编码区(3-UTR)相互作用。结果 miR-34b在白血病细胞HL60中表达下调,为外周血健康对照单个核细胞的0. 46 ±0. 07倍(P<0.01)。与对照细胞相比,在HL60细胞中过表达miR-34b或抑制miR-34b后,细胞相对活性分别出现减低或增强现象(P<0.01)。miR-34b在HL60中过表达后,凋亡细胞(29.91 ±1. 14)%较对照细胞(8.77 ±0. 23)%增加了 2.41倍(P<0.01), Western印迹检测证实了促凋亡分子Bax及抑制凋亡分子Bcl-2在miR-34b过表达后分别出现了上调及下调现象。利用在线预测软件预测USP22可能是miR-34b直接调控基因。在HL60细胞中过表达或抑制miR-34b后,USP22转录水平及蛋白表达水平均不同程度上调及下调(P<0.01)。双荧光素酶报告基因系统证实miR-34b过表达后,USP22野生型的3-UTR较对照组显著下调(P<0.01),而突变型无显著改变。进一步敲减USP22后HL60细胞增殖活性减低,并诱导细胞凋亡。结论 miR-34b对白血病细胞HL60的抑癌活性可部分通过抑制USP22得以实现;同时过表达miR-34b或抑制USP22表达有望成为急性髓细胞白血病的诊治靶点。 朱斌 刘娟娟 潘韶英 丁志勇 赵文理 肖林林 魏取好 彭攸 王素丽关键词:急性髓细胞白血病 增殖 凋亡 褪色沙雷菌医院感染现状及耐药性分析 2015年 目的了解褪色沙雷菌的临床感染特点及耐药现状,为临床治疗和医院感染控制提供帮助。方法回顾性分析2008-2012年临床分离的300株褪色沙雷菌临床分布及其耐药谱变化,比较ICU与非ICU不同病区之间耐药性差异。结果 5年医院感染褪色沙雷菌的临床分离率逐年递增,从2008年的0.8%上升至2012年的5.3%;其主要分布在ICU、外科、内科、呼吸科,分别占44.7%、17.3%、16.0%、7.7%,标本来源以痰液最多占85.6%;褪色沙雷菌对头孢哌酮/舒巴坦、头孢他啶、头孢曲松、亚胺培南及庆大霉素耐药性呈递增趋势(P<0.05),至2012年该菌对头孢哌酮/舒巴坦的耐药率达24.7%、头孢曲松59.2%、亚胺培南24.3%、庆大霉素24.9%;对阿米卡星、妥布霉素、左氧氟沙星比较敏感,耐药率分别为1.2%、3.6%、5.9%;ICU褪色沙雷菌对复合制剂、头孢菌素及碳青霉烯类的耐药率明显高于非ICU,而对氨基糖苷类及喹诺酮类抗菌药物的敏感性高于非ICU。结论褪色沙雷菌导致的感染呈增高趋势,且耐药率逐年升高,临床应根据药敏试验结果合理选用抗菌药物,防止耐药菌株的产生和医院感染的扩散。 方叶青 胡庆丰 魏取好 吕火烊关键词:耐药性 重症监护病房 MS—HRM检测结直肠癌患者外周血AKAP12基因及其临床意义 被引量:4 2010年 目的 探讨MS-HRM法定量检测结直肠癌患者外周血中AKAP12基因甲基化程度及其临床意义.方法 采用MS-HRM法定量检测80例结直肠癌患者和20名健康人外周血中AKAP12基因的甲基化水平,并分析评价其与病理分期分级的关系.同时对MS-HRM法的重复性和与传统MSP法检测的灵敏度和检出率进行比较.结果 MS-HRM法从80例结直肠癌患者中检测到38例(47.5%)AKAP12基因启动子区域不同程度的甲基化患者(甲基化1%~20%的24例,20%~60%的12例,60%~100%的2例),20名健康人中仅检测到甲基化〈10%的2名.MS-HRM法检测AKAP12基因甲基化的灵敏度(1%)优于传统的MSP法(10%).AKAP12基因甲基化水平与结直肠癌患者的年龄、性别的差异无统计学意义(x2分别为3.13、1.70,P均〉0.05),但与结直肠癌的Dukes分期和分化程度的差异均有统计学意义(x2分别为5.93、8.41,P均=0.01).结论 外周血MS-HRM定量检测AKAP12基因甲基化程度的方法比传统MSP法灵敏度更高,AKAP12基因甲基化有望成为结直肠癌进展评估的分子指标. 刘维薇 关明 李骥 胡婷婷 李敏 刘春芳 林勇 魏取好 吕元关键词:甲基化 结直肠肿瘤 临床常见病原菌耐药性监测及其耐药机制和快速检测法的研究 周永列 吕火烊 魏取好 胡庆丰 邱莲女 王欢 朱永泽 葛玉梅 沈蓓琼 沈燕 该项目运用分子生物学及流式等技术对该省临床常见病原菌(包括几何,真菌)耐药性及变迁进行监测,选择性的探索了某些耐药菌分子机制,尝试建立快速实用的耐用性检测方法,主要研究成果如下:对临床常见病原菌细菌耐药性进行了近十年连续...关键词:关键词:病原菌监测 抗真菌药物 第1类整合子不同可变区启动子对其下游基因盒表达水平的影响 目的:整合子可通过位点特异性重组捕获与表达外源基因盒,与细菌耐药基因的水平转移密切相关。第1类整合子中绝大多数耐药基因盒的表达依赖上游可变区启动子,而耐药基因的表达水平直接关系到宿主菌的耐药表型,因此本研究对第1类整合子... 魏取好 蒋晓飞 李敏 吕元医学实验室认可进程中分析前过程的流程优化与监控 被引量:6 2018年 目的探讨医学实验室认可进程中分析前过程的流程优化方式和监控对策,以提升管理效率,确保检验质量。方法依据CNAS-CL02:2012《医学实验室质量和能力认可准则》(ISO 15189:2012),充分利用实验室内审机制,逐一对分析前过程的各个环节进行分析,找出问题,分析问题,采取有效措施整改并评估优化效果。结果分析前过程各环节进行技术优化和管理优化后,与其相关的关键质量指标均有明显改善,医生和患者满意度均有所提升。结论 ISO 15189:2012认可进程中结合认可体系对分析前过程进行流程优化和流程监控,有助于提升医学实验室的管理效率,保障检验质量,提高医患满意度。 肖林林 杜颖 刘维薇 魏取好 冯景致尿路感染大肠埃希菌中第1类整合子可变区启动子的分布 目的:了解致尿路感染大肠埃希菌中第1类整合子可变区启动子的分布,并分析不同可变区启动子与细菌耐药表型的关系.方法:选取132株非重复分离自尿液标本的大肠埃希菌,聚合酶链反应(PCR)检测第1类整合酶基因,对第1类整合酶阳... 魏取好 胡庆丰 吕火烊 陈国强 周永列关键词:整合子 启动子 基因盒 耐碳青霉烯酶类肺炎克雷伯菌中整合子及相关基因盒的分布 被引量:3 2012年 目的了解耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌整合子及相关基因盒的分布,分析整合子与耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌多药耐药的关系。方法采用革兰阴性杆菌药敏卡检测耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌对抗菌药物的敏感性,聚合酶链反应(PCR)法检测Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ类整合酶基因(intⅠ1、intⅡ2、intⅢ3)及Ⅰ类整合子可变区基因盒,并分析可变区上游启动子的类型。结果 74株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌中有67株检测到Ⅰ类整合酶基因,检出率为90.5%,2株检测到Ⅱ类整合酶基因,检出率为2.7%,未检测到Ⅲ类整合酶基因阳性菌株;55株(74.3%)成功扩增出Ⅰ类整合子可变区,主要携带甲氧苄啶及早期使用的氨基糖苷类抗菌药物耐药基因,可变区启动子大多为弱启动子;携带Ⅰ类整合子菌株对常用抗菌药物的耐药率与Ⅰ类整合子阴性菌株之间的差异无统计学意义。结论Ⅰ类整合子及相关基因盒在耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌中分布广泛,所携带的整合子具有非常强的从周围环境中捕获耐药性基因盒的能力。 吴秀萍 魏取好 胡庆丰 吕火祥 周永列关键词:肺炎克雷伯菌 整合子 基因盒 启动子