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单极纺锤体蛋白激酶1(Mps1)与蛋白酶体α7亚基(PSMA7)相互作用研究: 2015年; 目的研究单极纺锤体蛋白激酶1(Mps1)与蛋白酶体α7亚基(PSMA7)是否存在蛋白间相互作用。方法以真核表达质粒p CMV-C-Myc-PSMA7为模板,p GEX-4T-1为载体,构建原核表达载体p GEX-4T-1-PSMA7(GSTPSMA7);并通过GST pull-down及免疫共沉淀实验检测Mps1与PSMA7之间是否存在相互作用。结果免疫印迹实验结果证实,构建的原核表达载体p GEX-4T-1-PSMA7(GST-PSMA7)能正确表达;GST pull-down及免疫共沉淀实验表明,Mps1与PSMA7之间存在蛋白质间相互作用。结论成功构建了原核表达载体p GEX-4T-1-PSMA7(GSTPSMA7),并在大肠杆菌中得到了表达;Mps1与PSMA7之间存在相互作用,为进一步研究两者之间的关系及Mps1功能的影响打下基础。; 张萍萍王鹏皓曹源魏从文何湘曹叶马胜利张艳红钟辉胡成进; 关键词：蛋白质相互作用

鼠疫耶尔森菌Ⅲ型分泌系统效应子YopT基因克隆及功能的初步研究被引量：1: 2014年; 目的构建鼠疫耶尔森菌(Yersinia pestis)Ⅲ型分泌系统效应子YopT真核表达载体,并初步探讨其对宿主天然免疫的影响。方法提取Y.pestis 91001株基因组DNA,并以此为模板,PCR扩增yopT基因,酶切并连接入pCMV-HA载体,转化后挑选阳性克隆送测序。测序正确的克隆进行质粒扩增后,转染HEK293T细胞,免疫印迹检测其表达。通过荧光素酶报告基因分析的方法检测YopT对IFN-β及NF-κB基因的影响。结果成功克隆了yopT基因,并在真核细胞中得到表达;yopT抑制IFN-β及NF-κB报道基因活性。结论初步研究表明,yopT抑制IFN-β和NF-κB基因表达,为进一步研究yopT的功能打下了基础。; 马胜利曹叶苏文莉刘京梅魏从文钟辉何湘; 关键词：先天性免疫

鼠疫耶尔森菌YopJ基因突变体构建、表达及其在RLR信号通路中生物活性的鉴定: 2014年; 目的构建和表达鼠疫耶尔森菌(Yersinia pestis)效应蛋白YopJ C172A、F177L、K206E突变真核表达载体,并检测其在RIGⅠ样受体(RLR)信号通路中的生物活性。方法通过PCR和测序检测pCMV-Myc-YopJ的准确性,将重组PCR技术获得的3种突变体的突变片段定向克隆到pCMV-Myc载体中,在HEK293细胞中瞬时表达,并利用荧光素酶报告基因技术检测YopJ及其3种突变体对环二鸟苷酸(c-di-GMP)激活干扰素-β(IFN-β)转录活性的影响。结果成功构建3种突变的真核表达质粒,在c-di-GMP刺激情况下,YopJ F177L、YopJ K206E与YopJ相比,对IFN-β转录活性的抑制作用没有显著差异,而YopJ C172A与YopJ有极显著差异,对IFN-β的抑制作用明显降低。结论 YopJ 172位是其抑制RLR信号通路的酶活性位点,与文献报道一致,而177位或206位则没有这种作用,这为进一步探究YopJ参与Y.pestis致病性的作用靶点和机制打下了良好基础。; 曹叶马胜利何湘钟辉魏从文; 关键词：突变体真核表达荧光素酶报告基因

雌激素受体α磷酸化位点突变体T224A和S559A的构建及其转录激活活性检测: 2015年; 目的:构建雌激素受体α(ERα)T224A和S559A磷酸化位点突变体载体,在HEK293T细胞中检测其表达及突变体生物活性的改变。方法:以pc DNA3-Flag-ERα为模板,通过重组PCR技术扩增目的基因片段并突变碱基,插入pc DNA3-Flag载体;将构建的质粒转染HEK293T细胞进行瞬时表达,通过Western印迹检测融合蛋白的表达,采用萤光素酶报告基因方法检测ERα突变体的活性改变。结果:T224A和S559A磷酸化位点突变体在HEK293T细胞中得到表达,相对分子质量为66×103。在无雌激素(E2)时,野生型ERα及T224A和S559A突变体的转录活性分别为空载体的1.94、1.49和1.84倍;在雌激素存在时,野生型ERα活性增强了1.57倍,T224A和S559A突变体活性分别增强了0.54和0.61倍。结论:224位Thr磷酸化修饰对ERα的活性起重要作用,且2个磷酸化位点突变体受雌激素调控减弱。; 陈伟周鹏宇朱永杰马胜利曹叶张萍萍何湘魏从文钟辉吴飞翔; 关键词：雌激素受体Α 磷酸化突变体雌激素转录激活活性

BPOZ抑制乳腺癌细胞系增殖的初步研究: 2016年; 目的研究BTB/POZ(broad complex,tramtrack and bric a brac/poxviruses and zinc finger)基因对乳腺癌细胞系增殖能力的影响。方法以人脾脏c DNA文库为模板,p CMV-HA-Vector为载体,构建真核表达载体p CMV-HA-BPOZ;免疫印迹实验鉴定重组蛋白p CMV-HA-BPOZ的表达;细胞生长实验检测BPOZ对细胞增殖能力的影响;平板克隆实验检测BPOZ对细胞生长能力的影响。结果免疫印迹实验结果证实,构建的真核表达载体p CMV-HA-BPOZ能正确表达;过表达HA-BPOZ可显著抑制MCF7和ZR-75-1细胞的增殖和生长。结论成功构建了真核表达载体p CMV-HA-BPOZ,并在细胞中成功表达;BPOZ可明显抑制MCF7和ZR-75-1细胞的增殖和生长能力,为进一步研究BPOZ在乳腺癌发生发展中的作用打下基础。; 王鹏皓张萍萍魏从文张艳红马胜利曹叶朱永杰何湘钟辉; 关键词：乳腺肿瘤细胞增殖

ERRα及其抑制剂在促进干扰素生成以及抑制病毒感染中的用途: 本发明提供一种ERRα及其抑制剂在促进干扰素生成以及抑制病毒感染中的用途，本发明证实了ERRα可以作为新的病毒药物研究用靶点，有着很好的应用前景。; 钟辉何湘魏从文马胜利张艳红郑子瑞管楷; 文献传递

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马胜利