韩香萍 作品数:6 被引量:18 H指数:2 供职机构: 南开大学生命科学学院 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
构建单纯疱疹病毒易感的鼠黑色素瘤细胞系B16R^HSV 2012年 目的构建溶瘤性单纯疱疹病毒(oHSV)易感的C57/BL小鼠黑色素瘤细胞系B16R^HSV,同时仍保留其在小鼠体内诱导肿瘤生长的能力。方法以人黑色素瘤细胞系A375的基因组DNA为模板,采用聚合酶链反应(PCR)扩增出疱疹病毒侵入介体(HVEM),将扩增产物克隆到pGEM—TEasy载体中并测序。将测序正确的HVEM基因克隆入pcDNA3质粒载体,产生pcDNA3-HVEM。以pcDNA3-HVEM质粒载体转染C57/BL小鼠黑色素瘤细胞系B16-F10,使用含有G418的完全培养基筛选可能的阳性克隆,并通过免疫磁珠筛选出表达HVEM的细胞,命名为B16R^HSV。用表达绿色荧光蛋白(GFP)的oHSV(oHSV^GFP)与B16R^HSV细胞体外共培养,观察细胞病变效应和GFP的表达情况。分别以相同剂量的B16-F10和B16R^HSV细胞接种于C57/BL小鼠右侧背部皮下,观察这两种细胞诱导小鼠体内形成肿瘤的能力。结果在荧光显微镜下可观察到B16R^HSV细胞表达绿色荧光并出现细胞病变效应,证明B16R””细胞能够被oHSV感染并在细胞内繁殖,而其亲代细胞B16-F10则不能。B16R^HSV和B16-FI0细胞接种于小鼠5d后,两组小鼠均可观察到肿瘤生长,且肿瘤生长情况基本一致。用oHSV^GFP治疗两种细胞的荷瘤鼠,仅在B16R^HSV细胞荷瘤的小鼠体内显示出明显的溶瘤效应。结论构建的B16R^HSV是对oHSV易感、保持体内成瘤性的小鼠黑色素瘤细胞系。 庄秀芬 周爱萍 施桂兰 韩香萍 李洁 张郁 张友会 张叔人 刘滨磊关键词:单纯疱疹病毒属 黑色素瘤 小鼠 弥漫性大B细胞淋巴瘤研究进展 被引量:2 2011年 弥漫性大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-celllymphoma,DLBCL)占临床所有B细胞淋巴瘤的50%左右,占非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin's lympho-mas,NHL)的30%~40%,是NHL中最常见的一个亚型。1994年首次定义了DLBCL分类,2001年WHO淋巴组织肿瘤分类方案中又补充了新的亚型; 韩香萍 汪洋关键词:弥漫性大B细胞淋巴瘤 淋巴组织肿瘤 DLBCL WHO NHL 新型溶瘤病毒oHSV2^hGM-CSF的构建及其抗肿瘤作用 被引量:11 2012年 目的构建表达人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(hGM-CSF)的2型溶瘤单纯疱疹病毒(oHSV2^hGM-CSF),初步验证其体外溶瘤效果及其对小鼠B16R黑色素瘤模型的体内疗效。方法采用PCR、分子克隆及同源重组技术,从HG52野生病毒株的基因组中剔除ICP34.5和ICP47基因,并插入hGM.CSF表达序列,构建oHSV2^hGM-CSF。将HeLa、Eca.109和PG等16种肿瘤细胞分别接种到24孔板,用1型溶瘤单纯疱疹病毒(oHSV2^hGM-CSF)或oHSV2^hGM-CSF”(感染复数=1)感染24、48h后,显微镜下观察细胞病变。以表达HSV感染受体的C57BL/6小鼠黑色素瘤细胞B16R为动物模型,当肿瘤生长至7-8mm’时,瘤内分别注射2.3×10^6PFU的oHSV2^hGM-CSF和oHSV2^hGM-CSF,共3次,每次间隔3d,同时测量肿瘤大小,并观察生存期。结果PCR检测和DNA序列分析结果证实,各目的基因已被剔除,hGM-CSF表达盒插入到ICP34.5的基因位点。oHSV2^hGM-CSF和oHSV2^hGM-CSF感染肿瘤细胞24h后,即能观察到细胞病变,且溶瘤谱较广,oHSV2^hGM-CSF感染的肿瘤细胞合胞体现象多于oHSV2^hGM-CSF感染者;感染48h后,oHSV2^hGM-CSF对HeLa、HepG2、SK-Mel-28、B16R、U87-MG细胞的溶瘤效果优于oHSV2^hGM-CSF。动物实验显示,肿瘤接种后第15天,PBS组、oHSV2^hGM-CSF’治疗组和oHSV2^hGM-CSF。”治疗组小鼠的肿瘤体积分别为(374.74-128.24)mm’、(128.23±45.32)mm。和(10.06±5.10)mm3,oHSV2^hGM-CSF明显延缓了荷瘤小鼠肿瘤的生长。PBS组小鼠在接种B16R细胞22d后全部死亡;oHSV2^hGM-CSF治疗组和oHSV2^hGM-CSF治疗组小鼠在接种B16R细胞110d时,存活率分别为60%和80%(P〉0.05)。与PBS组相比,oHSV2^hGM-CSF治疗组和oHSV2^hGM-CSF治疗组小鼠的生存期明显延长(P〈0.01)。结论oHSV2^hGM-CSF对人肿瘤细胞溶瘤谱较广,对荷B16R黑色素瘤瘤内注射有较好的抗肿瘤神府目.右掂砰的开学前景. 施桂兰 庄秀芬 韩香萍 李洁 张郁 张叔人 刘滨磊关键词:溶瘤病毒 疱疹病毒2型 表达绿色荧光蛋白的单纯疱疹病毒检测循环肿瘤细胞 被引量:4 2012年 目的以表达绿色荧光蛋白(GFP)的单纯疱疹病毒(HSV^GFP)建立一种快速检测循环肿瘤细胞(CTCs)的方法,并与常规细胞学检测方法的检测结果进行比较。方法将HSV^GFP与7个不同的肿瘤细胞系共培养,用荧光显微镜观察表达荧光的细胞。将10、100、1000和10000个人肺癌PG细胞加入到2ml全血中,以淋巴细胞分离液清除红细胞,同时富集肿瘤细胞。以HSV^GFP感染收集到的细胞,用荧光显微镜确定荧光细胞数量,分析HSV^GFP检测方法的敏感性。以HSV^CFP法检测70例肿瘤患者临床样本中的CSCs,并与其中15例有细胞学报告者的检测结果进行比较。结果HSV^GFP感染的7个肿瘤细胞系均表达绿色荧光。应用HSV^GFP检测方法,可以在仅加入了10个肿瘤细胞的2ml全血中检测出阳性结果。对70例临床样本采用HSV^GFP法进行检测的结果显示,有40例样本呈阳性反应。在15例有细胞学检测结果的临床样本中,细胞学检测阳性仅有4例,而HSV^GFP方法检测阳性有11例;其中细胞学检测阳性的4例样本,HSV^GFP检测均为阳性。结论以HSV^GFP检测患者体内CTCs的方法简便,且具有较高的敏感性。 韩香萍 施桂兰 王成锋 李洁 张建伟 张郁 张叔人 刘滨磊关键词:单纯疱疹病毒属 绿色荧光蛋白质类 循环肿瘤细胞 溶瘤性单纯疱疹病毒的生产、纯化条件探索及其在诊断和治疗中的应用 本文的研究工作主要围绕重组溶瘤病毒(重组单纯疱疹病毒Ⅰ型和Ⅱ型)在诊断和治疗方面的应用研究,实验涉及分子克隆、细胞培养、实验动物荷瘤及治疗、病毒的生产纯化等技术。发现带有GM-CSF的HSV病毒与化疗药物联合应用治疗肿瘤... 韩香萍关键词:循环肿瘤细胞 动物模型 肿瘤细胞 文献传递 人淋巴瘤细胞株OCI-Ly19生物学特性研究和小鼠模型建立 被引量:1 2012年 目的弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)是成人淋巴瘤中最常见的病理类型。DLBCL分型对指导疾病的治疗和预后有较大的意义,但各型DLBCL的发病机制及治疗、预后尚还有待深入研究。文中探索DLBCL细胞株OCI-Ly19的体外培养条件和生物学特性,肿瘤相关分子的表达及DLBCL动物模型的建立方法。方法观察OCI-Ly19细胞生长形态及生物学特性,分析比较不同实验条件对细胞生长的影响,用流式细胞术分析相关抗原表达,将OCI-Ly19细胞皮下接种SCID小鼠,观察肿瘤生长状况及组织学形态。结果 OCI-Ly19细胞在适当培养条件下生长良好,多数重要的B细胞和肿瘤相关标记物均有不同程度的表达;未经照射的SCID小鼠皮下接种107个OCI-Ly19细胞,成瘤率75%,组织学特征符合人类DLBCL的特点。结论获得了OCI-Ly19细胞株体外培养的最佳条件及相关免疫标志物表达情况。成功构建了人DLBCL的小鼠模型,为进一步进行相关研究提供了实验基础。 南英 韩香萍 路玲玲 向荣 汪洋关键词:弥漫大B细胞淋巴瘤 细胞株