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雷天刚: 作品数：69 被引量：291H指数：9; 供职机构：西南大学更多>>; 发文基金：国家现代农业产业技术体系建设项目中央高校基本科研业务费专项资金国家高技术研究发展计划更多>>; 相关领域：农业科学生物学更多>>

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柑橘响应溃疡病菌转录因子基因CsAP2-09的克隆与功能分析被引量：2: 2017年; 对柑橘中AP2转录因子进行注释,并克隆柑橘溃疡病相关的Cs AP2-09,研究外源水杨酸、茉莉酸甲酯、乙烯利、机械损伤以及溃疡病菌对该基因的诱导表达,确定其表达模式。从柑橘全基因组公共数据库一共注释出12个AP2成员,据系统发育和结构可以将其分为4个亚类;可能与抗、感溃疡病相关的Cs AP2-09基因全长4 159 bp,开放阅读框1 467 bp,编码488个氨基酸,具有典型的AP2结构,同时也具有一些结构特殊性;该基因在细胞核中优势表达,与定位信号预测结果吻合;上游启动子元件含多个与植物逆境或激素应答相关的顺式作用元件,如BOX-W1、CGTCA-motif、TCA-element、WUN-motif等;诱导结果表明Cs AP2-09对外源水杨酸、茉莉酸甲酯、乙烯利及机械损伤均有响应;柑橘溃疡病菌侵染可诱导抗病品种四季橘中此基因明显上调表达,而在感病品种纽荷尔中变化趋势不显著。上述研究表明Cs AP2-09是一个响应溃疡病菌侵染的,可作为研究柑橘抗溃疡病的候选基因。目前已将其在锦橙中超表达,共筛选出8个转基因植株,后期将对其进行抗病性评价以确定其分子育种价值。; 贾瑞瑞胡安华陈善春邹修平彭爱红许兰珍雷天刚姚利晓白晓晶何永睿李强; 关键词：柑橘柑橘溃疡病转录因子亚细胞定位

贵州部分柑橘地方品种遗传背景的SSR分析被引量：6: 2015年; 利用SSR分子标记技术对5个贵州柑橘地方品种的遗传背景进行分析．结果表明，24对SSR引物在5个地方品种和参与D N A指纹比对的14个栽培品种中共检测到92个等位基因，每个位点的等位基因数变幅为2～7个，平均为3.8个；多态性信息含量（PIC）变化范围在0.36～0.78之间，平均为0.49．经过DNA指纹比对，发现其中5对引物扩增的8条特征谱带可作为地方品种鉴别的参考性标记．利用NTSYS软件进行相似性系数计算，采用 UP‐GM A法聚类，结果显示，相似性系数为0.80，可将5个地方品种划分在不同的亚组中；地方品种米柑和牛肉红金橘均单独成组，其遗传背景独特；土柑与皱皮柑的亲缘关系较近；大果型冰糖橙与冰糖橙的遗传背景相同；红香柚与强德勒柚的遗传背景基本一致．; 雷天刚何永睿彭爱红许兰珍邹修平姚利晓李金强陈善春; 关键词：柑橘 SSR标记

CRISPR/Cas9介导柑橘CsLOB1基因启动子的多位点编辑被引量：13: 2019年; 为了获得CsLOB1启动子较大片段删除的突变体,利用CRISPR/Cas9技术对CsLOB1启动子进行多位点编辑。通过在CsLOB1启动子的EBEPthA4区域及其上、下游设计不同的靶标位点,构建了2个植物表达载体pCas9CsLOB1:2sites和pCas9CsLOB1:3sites,分别对CsLOB1启动子同时进行2个位点和3个位点的编辑。测序结果表明pCas9CsLOB1:2sites和pCas9CsLOB1:3sites的基因编辑效率分别为64.7%和80.0%,突变体植株在2个sgRNA之间发生了DNA片段的删除。进一步的分析发现,不同的sgRNA具有不同的突变效率,其差异是由于不同的sgRNA对CsLOB1-识别和结合能力的差异造成的。本结果表明对CsLOB1启动子进行多位点编辑可以获得删除较大DNA片段的突变体。; 邹修平范迪彭爱红何永睿许兰珍雷天刚姚利晓李强罗克明陈善春; 关键词：柑橘

GST pull-down联合LC-MS/MS筛选柑橘抗溃疡病转录因子CsBZIP40的互作蛋白被引量：4: 2019年; 【目的】CsBZIP40是一个与溃疡病抗性相关的转录因子,本研究旨在筛选转录因子CsBZIP40在响应柑橘溃疡病菌(Xanthomonas citri subsp. citri,Xcc)侵染过程中的互作蛋白,对CsBZIP40的互作网络进行分析,为柑橘抗溃疡病的分子育种提供理论依据。【方法】采用GST pull-down技术筛选柑橘在溃疡病菌侵染过程中CsBZIP40的互作蛋白。首先,构建带有GST标签的CsBZIP40蛋白融合表达载体,经IPTG(异丙基硫代半乳糖苷)诱导表达、纯化后获得GST-CsBZIP40融合蛋白作为诱饵蛋白;然后,将GST-CsBZIP40融合蛋白固定在谷胱甘肽亲和磁珠上,用固定在亲和磁珠的GST-CsBZIP40诱饵蛋白与接种溃疡病菌或LB培养基后柑橘叶片总蛋白进行孵育,与GST-CsBZIP40诱饵蛋白结合的蛋白复合物洗脱收集后进行SDS-PAGE凝胶电泳验证。将验证成功的样品洗脱液进行液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)检测,鉴定出未侵染和侵染状态下CsBZIP40的互作蛋白,将检测到的蛋白利用甜橙基因组数据库进行注释,筛选出在溃疡病菌侵染过程中与CsBZIP40特异结合的蛋白,并进行GO、KEGG和互作网络分析。【结果】过表达CsBZIP40的转基因植株表型正常,与对照植株无明显差异。过表达CsBZIP40的转基因植株溃疡病抗性评价中病斑面积、病情指数均显著小于野生型植株,分别为野生型的45%和54%。以该转基因植株为材料成功提取出侵染溃疡病菌后和未接种溃疡病菌状态下的柑橘叶片总蛋白。成功构建出GST-CsBZIP40诱饵蛋白表达载体,诱导表达纯化出GST-BZIP40诱饵蛋白。利用GST-CsBZIP40诱饵蛋白从侵染溃疡病菌后柑橘总蛋白和未接菌柑橘总蛋白中成功钓取蛋白,并用LC-MS/MS检测。经过比对、注释和筛选,在柑橘溃疡病菌侵染过程中与GST-BZIP40特异结合的蛋白有53个,这些蛋白参与多个分子功能和通路。在这53个蛋白中,有6个蛋白(Cs1g02310、Cs3g05280、Cs3g23950、Cs6g13880、Cs7g1213; 窦万福祁静静胡安华陈善春彭爱红许兰珍雷天刚姚利晓何永睿李强; 关键词：柑橘柑橘溃疡病柑橘溃疡病菌 BZIP

枳早期结瘤素样基因PtBCP1的克隆和分析: 2012年; [目的]克隆枳早期结瘤素样基因PtBCP1并对其序列进行分析。[方法]以枳消减文库中的C28 EST为种子序列进行电子克隆,据此设计引物进行PCR,以获得枳早期结瘤素样基因PtBCP1的全长cDNA和DNA序列,并对获得的序列进行生物信息学分析。[结果]PtBCP1基因由2个外显子和1个内含子组成,在枳幼苗根中的表达量是叶中的140倍,该基因编码的蛋白含131个氨基酸残基,预测分子量为14.0 kD,理论等电点为8.75,具有N端信号肽和PCLD(PFMD:PF02298)功能域,但无完整的铜离子结合位点,属于早期结瘤素样蛋白。[结论]为进一步研究PtBCP1基因的生物学功能奠定了基础。; 姚利晓马园园马园园许兰珍李凤龙彭爱红许兰珍陈善春; 关键词：克隆

CRISPR/Cas9介导的基因编辑技术制备柑橘纯合突变体的方法: 本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种基于CRISPR/Cas9介导的基因编辑技术获得柑橘纯合突变体的方法。所述方法包括以下步骤：将柑橘上胚轴茎段与农杆菌共培养，随即对上胚轴茎段进行热处理，然后将上胚轴茎段转入添加1 ...; 彭爱红邹修平何永睿陈善春许兰珍雷天刚; 文献传递

转基因锦橙中甲型肝炎病毒衣壳蛋白融合基因的遗传和表达稳定性研究被引量：1: 2013年; 为考察甲型肝炎病毒衣壳蛋白融合基因在转基因锦橙株系及其无性繁殖后代中的遗传和表达稳定性,以2个单拷贝的转基因锦橙株系为试材,通过嫁接的方式无性繁殖2代,应用PCR技术、Southern blot杂交、Real-time PCR技术进行研究,结果表明:2个转基因锦橙株系在无性繁殖过程中,甲型肝炎病毒衣壳蛋白融合基因都能稳定遗传;甲型肝炎病毒衣壳蛋白融合基因在转基因锦橙株系JTH1及其无性繁殖后代之间能够稳定的表达,而在转基因锦橙株系JTH2及其无性繁殖后代之间不能稳定的表达,T0代中目的基因的相对表达量显著高于T2代.; 彭爱红雷天刚许兰珍刘小丰何永睿姚利晓陈善春

受黄龙病菌和脱落酸诱导的植物启动子及其应用: 本发明公开了一种受黄龙病菌和脱落酸诱导的植物启动子及其应用，该启动子的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，其具有明显的黄龙病菌和脱落酸诱导启动活性，能使细胞在受到黄龙病菌感染和脱落酸诱导时启动外源基因的表达，可用于柑...; 姚利晓陈善春何永睿张庆雯王兆昊邹修平雷天刚彭爱红许兰珍李强龙琴

CRISPR/Cas9介导的基因编辑技术制备柑橘纯合突变体的方法: 本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种基于CRISPR/Cas9介导的基因编辑技术获得柑橘纯合突变体的方法。所述方法包括以下步骤：将柑橘上胚轴茎段与农杆菌共培养，随即对上胚轴茎段进行热处理，然后将上胚轴茎段转入添加1 ...; 彭爱红邹修平何永睿陈善春许兰珍雷天刚

分泌型CecropinB抗菌肽基因转化血橙提高其抗溃疡病水平被引量：9: 2014年; 为了利用Cecropin B(CB)抗菌肽基因提高柑橘对溃疡病的抗性,人工合成了两个含有信号肽的Cecropin B抗菌肽基因PR1aCB和AATCB。洋葱表皮瞬时表达分析表明,与非分泌型CB抗菌肽相比,PR1aCB和AATCB抗菌肽在细胞间隙中优势积累。进一步构建了CaMV 35S调控PR1aCB和AATCB基因的植物表达载体,转化塔罗科血橙(Citrus sinensis Osbeck)上胚轴,获得转基因植株。GUS组织化学染色、PCR和Southern blot分析表明外源基因已成功整合入柑橘基因组。Real-time PCR定量分析表明,抗菌肽基因在转基因植株中成功表达。柑橘叶片离体抗性分析表明,转PR1aCB和AATCB基因植株的抗性显著强于非转基因植株,其抗性水平与高抗品种‘南丰蜜橘’(C.succosa Hort.Ex Tan)和‘四季橘’(C.madurensis)相当。; 邹修平彭爱红刘琦琦何永睿王军政许兰珍雷天刚姚利晓陈善春; 关键词：柑橘抗菌肽柑橘溃疡病

雷天刚

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