陈鹏
- 作品数：3 被引量：6H指数：2
- 供职机构：大连理工大学生命科学与技术学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中国博士后科学基金中央高校基本科研业务费专项资金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程更多>>
- 亚洲玉米螟两种漆酶基因OfLac1和OfLac2 cDNA的克隆及基因表达被引量：4
- 2014年
- 【目的】克隆亚洲玉米螟(Ostrinia furnacalis)漆酶-1(OfLac1)和漆酶-2(OfLac2)基因;研究OfLac1和OfLac2在亚洲玉米螟不同发育阶段和不同组织中的表达特异性;分析蜕皮激素处理亚洲玉米螟后OfLac1和OfLac2基因表达量的变化;比较OfLac1和OfLac2表达模式的差别,推测其生理功能。【方法】根据已知的其他昆虫中Lac-1和Lac-2的保守氨基酸序列分别设计引物,以亚洲玉米螟白蛹时期提取的RNA反转录合成的cDNA为模板,通过PCR扩增OfLac1和OfLac2的保守区。然后根据所得的保守区片段分别设计基因特异性引物,采用RACE方法分别克隆OfLac1和OfLac2的3'和5'端序列,通过拼接获得OfLac1和OfLac2的基因全长。收集5龄第4天亚洲玉米螟的表皮、中肠、脂肪体、丝腺、气管、马氏管、精巢7种不同组织材料,通过半定量PCR分析OfLac1和OfLac2在不同组织中的基因表达模式。收集从卵到成虫29个不同生长发育时期的亚洲玉米螟作为材料,采用实时荧光定量PCR分析OfLac1和OfLac2在不同发育时期的基因表达水平。选取5龄第2天亚洲玉米螟幼虫进行蜕皮激素注射,分别在1、4、8、12和24 h后取样,利用实时荧光定量PCR研究OfLac1和OfLac2在蜕皮激素诱导下的基因表达水平。【结果】克隆获得亚洲玉米螟OfLac1和OfLac2的cDNA序列。OfLac1全长3 065 bp,其中5'非编码区222 bp,3'非编码区440 bp,开放阅读框2 403 bp,共编码800个氨基酸,其编码的蛋白分子质量约为90.6 kD,理论等电点pI为5.34;OfLac2全长3 405 bp,其中5'非编码区162 bp,3'非编码区960 bp,开放阅读框2 283bp,共编码760个氨基酸,其编码的蛋白分子质量约为84.0 kD,理论等电点pI为6.43。通过SignalP分析发现,OfLac1在N端包含一个长为22个氨基酸的信号肽,OfLac2在N端包含一个长为23个氨基酸的信号肽,均为分泌蛋白质。基因表达模式分析表明,在发育过程中,OfLac1主要在成虫中表达,在其他发育时期表达量较低;O
- 陈鹏屈明博杨君杨青
- 关键词：亚洲玉米螟漆酶基因克隆
- 白眉蝮蛇降纤酶的同源模建及B细胞抗原表位预测被引量：2
- 2013年
- 白眉蝮蛇降纤酶是我国在临床上用来治疗血栓栓塞性疾病的国家基本药物。但该酶来源于蛇毒,是异源蛋白,且是大分子蛋白质,不可避免的存在免疫原性问题。另外该蛋白药物在我国使用规模很大,因此由免疫原性导致的安全性问题不容忽视。首先通过DNAStar软件和ABCpred、BCPREDS等服务器预测得到肽端AA27~35、44~50、66~72、79~98、101~109、117~127、134~142、151~164、179~188、194~206、221~233、247~260区域为白眉蝮蛇降纤酶的B细胞线性表位优势区域。然后以蝮蛇毒蛋白C激活剂蛋白的晶体结构为模板,利用MODELLER 9.10软件中的Pythonwin程序进行白眉蝮蛇降纤酶的同源模建,并利用PROCHECK、ERRAT及PROSA程序进行同源模建的合理化评价。根据白眉蝮蛇降纤酶的模建三维结构并结合DiscoTope和cons PPISP网络数据库预测B细胞构象型抗原表位。得到蛋白的N端45~51、81~90、95~106、134~141、153~159、177~182、225~232、251~257区段为白眉蝮蛇降纤酶的B细胞构象型表位区域。本项目的预期成果将为降纤酶药物的安全化应用提供新思路,为蛋白质药物免疫原性机制研究提供技术基础。
- 贾秋磊王林陈鹏杨青姜秀萍
- 关键词：降纤酶同源模建
- 长白山白眉蝮蛇降纤酶的同源模建及B细胞抗原表位预测
- 长白山白眉蝮蛇降纤酶是我国在临床上用来治疗血栓栓塞性疾病的国家基本药物。但该酶来源于蛇毒，是异源蛋白，且是大分子蛋白质，不可避免的存在免疫原性问题。另外该蛋白药物在我国使用规模很大，因此由免疫原性导致的安全性问题不容忽视...
- 贾秋磊王林陈鹏杨青姜秀萍
- 关键词：降纤酶免疫原性同源模建
