陈天姬
- 作品数：6 被引量：5H指数：2
- 供职机构：中南大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划中央高校基本科研业务费专项资金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 小鼠Dppa2基因shRNA载体的构建及干扰效果的检测被引量：1
- 2010年
- 目的:构建有效的针对小鼠Dppa2基因的shRNA(short hairpin RNA)干扰载体。方法:设计合成2对针对小鼠Dppa2基因的shRNA序列以及1对与哺乳动物基因组无同源性的shRNA序列作为对照,构建pSUPER.Retro.puro干扰载体并进行PCR,酶切和测序验证。进一步将各干扰载体分别转染小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs),RT-PCR检测干扰效率。结果:PCR,酶切和测序验证均表明各shRNA载体构建成功。将空载体及各重组载体分别转染小鼠ESCs发现,干扰组Dppa2基因表达水平相对于空载体对照组和阴性shRNA载体对照组明显下调。结论:成功构建了有效的针对小鼠Dppa2基因的shRNA干扰载体,为进一步研究Dppa2基因在维持小鼠ESCs不分化过程中的作用提供了基础。
- 陈天姬杜娟卢光琇
- 小鼠胚胎干细胞转染条件的优化被引量：2
- 2010年
- 【目的】对小鼠胚胎干细胞(mESCs)转染条件进行优化。【方法】分别将0.5×105,1×105,2×105,4×105个细胞接种24孔板(各细胞量均接种2孔),培养48h在其细胞融合度分别为30%,50%,70%,90%左右时,分别设置相同的(0.8μgDNA/2μL脂质体)和不同的DNA/脂质体用量(DNA量(μg)/Lipo量(μL)分别为0.4/1,0.8/2,1.6/4,3.2/8),采用脂质体(LipofectamineTM2000)转染法,将pEGFP-N1报告基因载体转染到mESCs中,48h后通过荧光观察和流式分析检测各组EGFP荧光强度,比较转染效率。【结果】在质粒及脂质体用量相同(0.8μgDNA/2.0μL脂质体)的条件下,随着细胞融合度的增加,EGFP荧光强度逐渐减弱,在细胞融合度为30%,50%,70%,90%左右时转染,各组EGFP阳性细胞率分别为56.4%,51.8%,40.8%和23.3%。提高转染质粒及脂质体量可在一定程度上提高转染效率,但脂质体的细胞毒性也随之增加,不利于细胞生长。【结论】低融合度(30%～50%)条件下,使用0.8μgDNA/2.0μL脂质体对mESCs进行转染,可获得较高的转染效率(>50%),同时可维持良好的细胞状态。
- 陈天姬杜娟卢光琇
- 关键词：小鼠胚胎干细胞脂质体法PEGFP-N1转染效率
- 人类胚胎干细胞分化过程中DPPA2基因的表达情况分析(英文)被引量：3
- 2010年
- DPPA2(Developmental Pluripotency-Associated gene2)是近年来发现的在多能性细胞中特异表达的一个基因,它被认为参与维持干细胞的"干性".但目前为止,并没有关于该基因在人类胚胎干细胞(human embryonic stem cells,hESCs)分化过程中的表达情况的报道,其功能也尚不清楚.通过Real-time PCR对DPPA2基因在hESCs分化过程中的表达情况进行分析,此外还对其在异常核型hESCs,人类胚胎癌细胞(human embryonic carcinoma cells,hECCs)NTERA-2以及其它5种癌细胞中的表达情况进行检测.结果表明DPPA2基因在hESCs中特异表达,其表达水平随着hESCs的分化而显著下调.该基因在异常核型hESCs和NTERA-2细胞中也有表达,但在其它肿瘤细胞中未检测到该基因的表达.此外,以EGFP-N1系统为基础的亚细胞信号定位结果表明,DPPA2是一个核蛋白.这些结果提示,DPPA2基因可能在维持hESCs特性的过程中发挥着重要的作用.
- 陈天姬杜娟杜丽丽欧阳琦卢光琇
- 关键词：人类胚胎干细胞干性核蛋白
- Dppa2基因启动子区Oct4结合位点突变对其活性的影响
- 2015年
- 目的:探讨Dppa2基因5'端启动子区Oct4结合位点突变对Dppa2基因启动子活性的影响。方法:PCR扩增包括Oct4结合位点的Dppa2基因5'端转录起始点上游-2439^+293 bp的启动子序列,片段长度为2732 bp。将该片段连接到p GL3-Basic载体,构建野生型p GL3-2439表达载体。采用定点突变法,将-1959^-1957位碱基的GCA突变成TAG,构建Oct4结合位点突变型p GL3-mo2439表达载体。用上述两种表达载体、PGL3-basic载体和Oct4表达载体分别瞬时转染HEK 293细胞。细胞培养48 h后,利用双荧光素酶报告系统测定各组细胞表达的荧光素酶的相对活性。结果:经琼脂糖凝胶电泳及测序鉴定,证实野生型(p GL3-2439)和突变型(p GL3-mo2439)载体构建成功。荧光素酶活性测定结果显示,转染Dapp2基因启动子野生型p GL3-2439表达载体的细胞组荧光素酶的相对活性为16.307,突变型p GL3-mo2439表达载体的细胞组荧光素酶的相对活性为10.634。Oct4结合位点突变后,Dppa2基因启动子区转录活性较野生型降低了35%。结论:Dppa2基因5'端启动子区-1959^-1957位的Oct4结合位点突变可能导致Dppa2基因启动子活性下降。
- 马娜陈天姬李珑陈婧杜娟
- 关键词：荧光素酶
- Dppa2基因在维持小鼠胚胎干细胞不分化过程中的功能研究及其启动子的克隆与转录调控分析
- Dppa2 /(Developmental pluripotency-associated 2/)是近年发现的在多能性细胞中特异表达的新基因。目前关于DPPA2/(人/)Dppa2/(小鼠/)基因的相关信息主要包括两方面...
- 陈天姬
- 关键词：小鼠胚胎干细胞RNA干扰启动子转录调控
- 文献传递
- 小鼠Oct4基因真核表达载体的构建及表达鉴定
- 2010年
- 目的:构建小鼠Oct4基因真核表达载体并对其表达进行鉴定。方法:以小鼠胚胎干细胞(mouse embryonic stem cells,mESCs)cDNA为模板克隆Oct4基因编码区序列,将其通过定向克隆插入pcDNA3.1(+)载体多克隆酶切位点(multiple cloning sites,MCS)中,形成pcDNA3.1(+)/Oct4重组载体。将pcDNA3.1(+)空载体和pcDNA3.1(+)/Oct4重组载体分别转染293T细胞,通过Western Blotting检测Oct4蛋白的表达。结果:成功检测到Oct4蛋白的表达。结论:成功构建了小鼠Oct4基因真核表达载体。
- 陈天姬杜娟卢光琇
- 关键词：小鼠胚胎干细胞
