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利用昆虫杆状病毒表达系统表达人KCTD9蛋白: 2010年; 目的应用杆状病毒表达系统在昆虫细胞(sf9细胞)中表达人KCTD9蛋白,以进行其功能学研究。方法从pMD18-T-hKCTD9质粒中扩增hKCTD9全长基因片段,连接至pENTR/D-TOPO载体,将pENTR/D-TOPO-hKCTD9质粒与线形杆状病毒DNA在体外重组后,转染易感细胞系昆虫sf9细胞。采用免疫共聚焦和WesternBlot法分析融合蛋白的表达;在电子显微镜下观察病毒颗粒的形成。结果凝胶电泳分析hKCTD9基因存在于各载体中;激光免疫共聚焦显微镜证实感染重组杆状病毒的sf9细胞核内可见绿色荧光,提示目的基因表达正确;WesternBlot进一步显示hKCTD9蛋白大小约为55KD;透射电子显微镜观察发现被感染的sf9细胞核涨大、透亮,核内清晰可见大量的杆状病毒颗粒。结论 hKCTD9在昆虫杆状病毒表达系统中被成功表达,为进一步功能学研究奠定了基础。; 徐莉杨道锋陈韬苏凯宁琴; 关键词：重组杆状病毒 SF9细胞融合蛋白

纤维介素与肿瘤转移的关系: 目的探讨人肝癌裸鼠模型肿瘤组织中鼠纤维介素/[mouse fibrinogen2 like protein2/(mfg12/)／fibroleukin/]的表达及调控机制。方法用不同转移潜能肝癌细胞株建立裸鼠...; 苏凯; 关键词：纤维介素凝血酶血管新生裸鼠 IFN-Γ IL-2; 文献传递

恶性肿瘤组织中人纤维介素的表达及作用被引量：11: 2006年; 目的研究恶性肿瘤患者病理组织中人纤维介素(human fibrinogen-like protein 2,hfgl 2)的表达及与纤维蛋白沉积的关系。方法采用免疫组化方法检测了11例结肠癌、15例宫颈癌、10例乳腺癌、9例食管癌、12例肺癌、16例胃癌患者的病理组织切片中hfgl 2及纤维蛋白的表达,分析二者的组织学关系,用RT-PCR方法检测了部分肿瘤组织与肿瘤细胞系中的hfgl 2 mRNA。结果免疫组化显示hfgl 2在上述肿瘤中均有表达,主要分布于间质浸润细胞、肿瘤实质细胞、肿瘤血管内皮细胞及细胞外基质,且在邻近有明显的纤维蛋白沉积。通过RT-PCR,在体外培养的数种肿瘤细胞系中未检出hfgl 2 mRNA,但在肿瘤组织中检出hfgl 2 mRNA表达明显高于正常组织。结论恶性肿瘤时存在hfgl 2的高表达,并且可能与肿瘤高凝状态的形成及肿瘤的演进有关。; 陈芳宁琴孙汉英苏凯严伟明习东罗小平刘文励; 关键词：肿瘤凝血酶纤维蛋白

人纤维介素蛋白2在昆虫杆状病毒系统中的表达及活性检测被引量：1: 2009年; 目的:利用杆状病毒表达系统在昆虫细胞(Sf9细胞)中表达人纤维介素蛋白2(hfgl2)凝血酶原酶并检测其蛋白活性。方法:首先将PCR扩增的目的基因hfgl2和pENTR/D-TOPO载体连接,再将pENTR/D-TOPO-hfgl2质粒与BaculoDirectTM线性DNA进行体外基因重组,采用脂质体转染法将重组DNA转染到生长良好的Sf9细胞中进行病毒包装,经过对重组杆状病毒三轮扩增后,用RT-PCR和Western blotting从基因和蛋白水平检测hfgl2表达情况,一期凝固试验检测其蛋白活性。结果:重组杆状病毒感染后,Sf9细胞停止生长,体积变大,细胞开始悬浮,破裂,呈现颗粒样外观。RT-PCR扩增和Western blotting从基因和蛋白水平证实Sf9细胞能够表达hfgl2,蛋白分子量约为63kDa。同时,在细胞上清液中检测到了可溶性hfgl2的表达,蛋白分子量约为50kDa。一期凝固试验证明表达的跨膜型hfgl2具有凝血活性。结论:hfgl2在昆虫杆状病毒表达系统中成功表达并具有生物学活性,为进一步研究hfgl2跨膜型以及可溶性蛋白功能提供了工具,亦可应用于开发重型肝炎蛋白芯片或ELISA诊断试剂盒。; 苏凯徐莉杨道锋宁琴; 关键词：杆状病毒表达系统

O2/H2O气氛下CH4与CO掺氢混合燃料的火焰特性模拟研究: 化石燃料燃烧造成的环境问题非常严峻，开发高效低排放的新型燃烧技术以及清洁燃料已成为燃烧领域的热点话题。O2/H2O燃烧技术因具有较低的运行成本和极低的NOx排放等优点而具有广阔的研究前景。但是从目前来看，人们在研究O2/...; 苏凯; 关键词：气体燃料; 文献传递

IFN-γ,IL-2诱导人脐静脉内皮细胞及单核细胞hfgl2表达的研究被引量：1: 2006年; 目的探讨肿瘤微环境中的一些细胞因子(IFN-γ、IL-2等)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)和人单核细胞(THP-1)hfgl2表达的影响。方法分别用免疫组化,RT-PCR方法检测HUVEC和THP-1在静息和细胞因子作用下人纤维介素(hfgl2)蛋白和mRNA水平的表达,并对细胞因子刺激前后细胞的促凝功能做了检测。结果IFN-γ、IL-2均可明显增强hfgl2蛋白和mRNA的表达。并且刺激后的细胞出现明显升高的促凝活性(PCA),刺激后细胞的PCA产生于Ⅹ因子的下游,与Ⅱ因子密切相关。结论IFN-γ、IL-2增强hfgl2蛋白和mRNA的表达,hfgl2能直接催化凝血酶原转化为凝血酶,进而通过凝血酶的凝血依赖及非依赖途径促进肿瘤血管新生和转移。; 苏凯陈芳罗小平宁琴; 关键词：癌症凝血酶 IFN-Γ IL-2

螺旋桨五轴数控加工参数优化与能耗计算: 船用螺旋桨是船舶动力系统的重要部件，其设计与制造对于提高船舶推进系统性能有着重要作用。螺旋桨叶片是一种典型的自由曲面零件，其直径大且曲面形状复杂，相邻叶片间区域狭窄，易发生干涉碰撞。螺旋桨生产周期长，切削参数的优化是影响...; 苏凯; 关键词：螺旋桨船舶推进系统五轴数控加工能耗计算

慢性病毒性肝炎小鼠动物模型的建立及其特征分析被引量：13: 2006年; 慢性病毒型肝炎是一种严重危害人类健康的常见病,多发病,目前尚缺乏理想的实验动物模型来阐明其具体的发病机制,从而使得对其防治的研究受到限制。本研究采用纯化的3型鼠肝炎病毒(MHV-3)经腹腔注入近交系C3H/HeJ小鼠体内,小鼠感染MHV-3后,约63%存活,存活的小鼠一般情况较正常对照组差,肝脏组织呈现持续炎性改变,血清ALT、AST升高而TP、ALB有所下降,与人类慢性病毒性肝炎的发生发展极为相似,可作为研究慢性病毒性肝炎的比较理想动物模型。; 覃小敏张江国苏凯杨超严伟明宁琴; 关键词：MHV-3 慢性病毒性肝炎动物模型

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苏凯