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过表达Olig2和Nkx2.2人胚胎干细胞系的建立: 2015年; 目的:建立过表达Olig2和Nkx2.2的人胚胎干细胞(hESCs)系.方法:利用RT-PCR从鼠N2A细胞克隆出Olig2和Nkx2.2的ORF片段,将Olig2和Nkx2.2基因编码序列分别和带有HA及Flag的载体连接,构建Olig2-HA和Nkx2.2-Flag重组载体.将构建的载体分别与2种病毒辅助包装原件载体质粒共转染293T细胞,制备并浓缩Olig2-HA和Nkx2.2-Flag慢病毒颗粒,感染hESCs,嘌呤霉素筛选的阳性克隆传代培养10代后鉴定细胞内Olig2和Nkx2.2的表达.结果:PCR扩增得到含Olig2和Nkx2.2基因编码序列的特异性条带;携带有Olig2和Nkx2.2基因的慢病毒能够同时感染hESCs,表达Olig2-HA和Nkx2.2-Flag融合蛋白,并稳定遗传.结论:成功构建了同时过表达Olig2和Nkx2.2的人胚胎干细胞系.; 杨丽华王婷马丽罗梦娇曲学彬武秀香姚瑞芹; 关键词：OLIG2 过表达人胚胎干细胞克隆

稳定过表达Olig2的小鼠胚胎干细胞系的建立: 2014年; 目的:建立稳定过表达Olig2的小鼠胚胎干细胞(mESCs)系。方法:从含有Olig2的质粒中利用PCR技术克隆Olig2基因编码序列,酶切连接入GV218载体,形成Olig2-GV218重组载体。将构建好的Olig2-GV218载体与两种病毒辅助包装原件载体质粒共转染293T细胞,制备并浓缩慢病毒颗粒,侵染mESCs,嘌呤霉素筛选的阳性克隆传代培养10代后鉴定细胞内Olig2的表达。结果:PCR扩增得到含Olig2基因编码序列的特异性条带。重组的Olig2-GV218载体中Olig2编码序列与目标序列几乎一致。携带有Olig2-GV218载体的慢病毒能够正常感染mESCs,表达Olig2-GFP融合蛋白,并稳定遗传。结论:成功建立了稳定过表达Olig2的小鼠胚胎干细胞系。; 王贝罗梦娇郭瑞董富兴陈彦王会平曲学彬姚瑞芹; 关键词：小鼠胚胎干细胞 OLIG2 过表达

Olig2对胚胎干细胞向神经前体细胞分化过程中Nestin蛋白表达的影响被引量：3: 2015年; 目的:探讨碱性螺旋-环-螺旋家族的少突胶质细胞转录因子2(Olig2)对小鼠胚胎干细胞(mESCs)向神经前体细胞(NPCs)分化过程中巢蛋白(Nestin)表达的影响。方法:将mESCs分为正常组、空载体组和Olig2转染组,用含有RA、Purmorphamine、bF GF和PDGF-AA的培养基将其诱导分化为NPCs;分别在诱导分化的第11 d和14 d,用免疫细胞化学荧光染色和蛋白免疫印迹法检测其神经前体细胞特异性标记物巢蛋白(Nestin)的表达情况。结果:经Olig2-GV218慢病毒转染后的mE SCs,Olig2蛋白的表达较正常组和空载体组明显增强;诱导分化后11 d,三组细胞Nestin蛋白表达无明显区别;14 d时,正常组和空载体组仍能检测到较高的Nestin蛋白表达,而Olig2转染组Nestin蛋白的表达明显减弱。结论:mESCs向NPCs分化过程,过表达Olig2可降低Nestin蛋白的表达。; 罗梦娇王贝郭瑞曲学彬王会平张强董富兴任传路姚瑞芹; 关键词：小鼠胚胎干细胞神经前体细胞巢蛋白

溴化乙锭诱导的脱髓鞘模型大鼠胼胝体内MCT1表达的形态学观察: 2015年; 目的:观察单羧酸转运体-1(monocarboxylate transporter-1,MCT1)在溴化乙锭(Ethidium Bromide,EB)诱导的脱髓鞘模型大鼠胼胝体(corpus callosum,CC)内的表达变化。方法:选用正常成年SD大鼠,随机分为正常组、溶剂组和EB组,将0.05%的EB注射到大鼠胼胝体制作脱髓鞘模型,Luxol Fast Blue(LFB)染色观察胼胝体中的髓鞘是否脱失,免疫荧光组织化学染色技术检测注射位点MCT1的表达情况。结果:与正常组相比,注射EB14 d后注射部位胼胝体的LFB染色极浅且不均匀;通过MCT1分别与环核苷酸磷酸二酯酶(cyclic nucleotide phosphodiesterase,CNPase)和GFAP免疫荧光双标可以看出,在正常大鼠胼胝体中,大部分表达MCT1的细胞为CNPase+的少突胶质细胞(oligodendrocytes,OLs),少部分表达MCT1的细胞是GFAP+细胞;注射EB14 d后,EB注射部位胼胝体中CNPase的表达明显减弱,且CNPase+细胞中MCT1的表达也减弱,而GFAP的表达则增强,且所有GFAP+细胞都表达MCT1。结论:在正常SD大鼠胼胝体中,MCT1主要在少突胶质细胞中表达,EB诱导胼胝体脱髓鞘后,MCT1主要在星形胶质细胞中表达。; 郭瑞董富兴罗梦娇张振中曲学彬王会平张强姚瑞芹; 关键词：溴化乙锭胼胝体脱髓鞘

过表达少突胶质细胞转录因子2加速小鼠胚胎干细胞分化为神经元-胶质细胞抗原2阳性少突胶质祖细胞样细胞被引量：1: 2014年; 目的：观察少突胶质细胞转录因子2（O1ig2）过表达对小鼠胚胎干细胞（mESCs）向少突胶质祖细胞（OPCs）分化的影响.方法：将体外培养的mESCs分为空载体感染和Olig2-GFP慢病毒感染组,免疫荧光显色检测Olig2的表达.感染后9、14、21 d和28 d神经元-胶质细胞抗原2（NG2）免疫荧光显色观察mESCs向OPCs的分化情况.结果：Olig2-GFP慢病毒感染组mESCs经筛选后均为Olig2＋/GFP＋,而空载体感染组mESCs无Olig2表达.感染后9d,两组细胞均无NG2表达;感染后14d,Olig2-GFP慢病毒感染组NG2高表达,空载体感染组仅有少数细胞为NG2弱阳性;感染后21d与14 d相比,两组均无明显变化;感染后28d,两组细胞均有较强的NG2表达,组间无差异.结论：过表达Olig2能够加速mESCs分化为NG2＋的OPCs样细胞.; 曲学彬王贝罗梦娇郭瑞王会平张强于红丽姚瑞芹; 关键词：基因过表达小鼠胚胎干细胞

小鼠脑组织Luxol Fast Blue染色的几种不同处理条件的比较被引量：4: 2014年; 髓鞘是包裹在神经细胞轴突外面的管状鞘,由髓鞘磷脂构成,成节段性.髓鞘染色是一种用来观察正常和病理情况下髓鞘是否完整、有无变性、坏死及修复情况的方法[1],在神经组织的病理诊断和研究中具有重要的应用价值.髓鞘染色方法有多种,基于不同的原理,可利用媒染剂、油溶性染料或锇酸与类脂质的特殊反应[2].Luxol Fast Blue(LFB)是一种油溶性染料,是国际上认可的髓鞘染色剂,经LFB染色,髓磷脂被染成蓝色,据此观察染色阳性纤维的深浅和多少,还可用来定量分析脱髓鞘病变及髓鞘再生等有关髓鞘改变情况[3].但目前已报道的LFB染色的操作步骤不完全一致,有的步骤多且烦琐,有的实验周期较长.为此,我们通过比较不同的处理条件摸索了一种更为简便、有效、节时的LFB染色方法.; 郭瑞董富兴王贝罗梦娇曲学彬于红丽姚瑞芹

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罗梦娇