王方金
- 作品数：22 被引量：106H指数：7
- 供职机构：中山大学达安基因诊断中心更多>>
- 发文基金：广东省科技攻关计划博士科研启动基金广东省科委资助项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学轻工技术与工程自然科学总论更多>>
- STAT3特异性小干扰RNA表达载体的构建及其对STAT3表达的抑制被引量：8
- 2005年
- 目的 构建特异性抑制信号转导与转录激活因子3(STAT3)的小干扰RNA(siRNA)表达载体并检测其对STAT3表达及PC 3细胞增殖的抑制作用。方法 设计、合成STAT3特异性的短链寡核苷酸,经退火形成双链DNA片段,克隆到pSilencerTM2.1 U6载体中,构建STAT3特异siRNA的表达载体,HindIII和BamHI双酶切及测序鉴定重组体,并转染PC 3细胞,G418筛选出稳定表达细胞株,半定量反转录聚合酶链反应(RT PCR)方法和免疫印迹法检测STAT3mRNA和蛋白的表达水平,四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测细胞增殖活性。结果 经双酶切与测序鉴定成功构建STAT3 siRNA表达载体,转染前列腺癌细胞株PC 3可显著抑制细胞中STAT3mRNA和蛋白的表达水平(抑制率分别为52.4% 及50.5% ),且细胞增殖活性亦较未转染PC 3细胞显著降低(p<0.05)。结论 运用pSilencerTM2.1 U6载体构建的STAT3 siRNA表达载体可有效抑制STAT3的表达及前列腺癌细胞的增殖。
- 吴健王方金何蕴韶
- 关键词：转录激活因子3PC-3细胞
- 食品中副溶血弧菌FQ-PCR快速检测方法的研究被引量：7
- 2005年
- 目的利用荧光定量PCR技术,研制适合各层次实验室使用的,快速、准确地检测鉴定食品中副溶血弧菌污染的定性、定量方法。方法根据副溶血弧菌gyrase基因序列,设计并合成特异性引物和荧光标记探针,将扩增后的特异片断制成阳性模板,绘制标准曲线。以副溶血弧菌菌株8株及同源、非同源参考菌株24株,做特异性检测;将阳性污染菌按梯度加入阴性样品为模拟样本,做敏感性检测。同时使用PE7000型定量PCR仪和国产DA620微量荧光检测仪检测。结果该方法有良好的特异性:8株副溶血弧菌结果均为阳性,而其它24株菌株均为阴性(其中8株是弧菌科,16株分别来自不同的菌属);该方法有良好的敏感性:阳性模板浓度与定量曲线循环阈值之间相关系数达到0.9871。在纯培养的条件下,其检测低限为10cfuml。对32个模拟样本直接进行定量检测,则检测低限在102cfug;经过24小时增菌培养,检测低限可达2cfug。结论该方法特异性强、敏感性高,操作简便快速,能避免常规PCR方法易污染的缺陷,在国产仪器上测试同样取得较好的敏感性和特异性,便于基层实验室使用,具有很好的推广应用前景。
- 焦红翁文川王方金程刚王伟毅谢钧宪
- 关键词：定量检测试剂盒
- 食品中副溶血弧菌荧光定量PCR方法快速检测被引量：31
- 2005年
- 目的利用荧光定量PCR技术,建立食品中副溶血弧菌污染的快速、准确的定量检测方法。方法根据副溶血弧菌gyrase基因序列设计合成副溶血弧菌FQ-PCR诊断试剂盒,研究其灵敏度、特异性,并应用于模拟食品样本检测。结果在31株不同菌株的检测中,8株副溶血弧菌结果均为阳性,而其他23株弧菌科及其他菌属的菌株均为阴性;纯菌条件下定量检测低限10 cfu/ml;对模拟样本直接进行,检测低限为103cfu/g,经培养增菌后,检测低限则达到2 cfu/g。结论该方法特异性强、敏感性高,操作简便快速,检验周期仅需36 h,扩增与检测在封闭单管进行,可避免常规PCR方法易污染缺陷,具有很好的推广应用前景。
- 翁文川焦红王方金程刚王伟毅谢钧宪
- 关键词：荧光定量PCR副溶血弧菌
- 实时荧光定量PCR技术在食品致病菌等领域中的快速检测应用
- 焦红何蕴韶翁文川王方金徐海聂高东微朱道中林志雄许龙岩钟国强程钢邓中平黄捷王伟毅谢钧宪陈胤瑜
- 该项目针对进口试剂盒的昂贵及国内基因检测试剂市场几乎空白的特点，在具有我国自主知识产权的合成平台上，使用国产原材料，将国际先进的实时荧光定量PCR技术引入国内食品致病菌、动物禽流感、植物松材线虫、人类乙型肝炎病毒的检测领...
- 关键词：
- 关键词：荧光定量PCR食品致病菌
- siRNA抑制K562细胞中内源性c-Myc与hTERT基因表达的研究
- RNA干扰((RNAi)是一种首先在线虫中发现的序列特异性的转录后基因沉默现象(PTGS)，由双链RNA(double-strandedRNA，dsRNA)启动，导致具有同源序列的目的mRNA降解。RNAi技术能抑制显性...
- 王方金
- 关键词：双链RNAHTERT基因C-MYC基因肿瘤细胞凋亡
- 文献传递
- 套式荧光实时RT-PCR检测结直肠癌患者外周血中CRD-BPmRNA被引量：4
- 2005年
- 目的 研究结直肠癌患者外周血中CRD BPmRNA的表达,探讨其作为结直肠癌标志物的可行性。方法 用套式荧光实时PCR对 64例结直肠癌患者、20例胃肠道良性疾病患者和 25例健康成人进行外周血CRD -BPmRNA的检测,并对阳性PCR产物进行克隆、测序。结果 结直癌患者中, 28(43 8% )例检测到CRD BPmRNA表达,在良性病和健康人均无表达,两组差异显著(χ2 =26. 493,P<0. 001)。CRD -BPmRNA的表达与结直肠癌的Dukes分期有显著相关性(χ2 =8. 195,P<0. 05)。结论 在结直肠癌患者的外周血中,能够检测到CRD- BPmRNA的表达,CRD- BPmRNA可作为外周血中结直肠癌细胞的肿瘤标志物用于临床诊断。
- 王方金何蕴韶张常华何裕隆程钢
- 关键词：结直肠癌外周血良性疾病PCR产物荧光
- 双重实时荧光PCR检测在宫颈癌筛查中的应用被引量：1
- 2012年
- 目的评价实时荧光PCR检测方法在宫颈癌筛查中的应用价值及临床意义。方法利用实时荧光PCR技术对310例妇科疑似人乳头瘤病毒(HPV)感染患者进行高危型HPV检测,同时利用低密度基因芯片对310例样本进行HPV基因分型。结果在310例样本中,使用实时荧光PCR技术和低密度基因芯片方法分别检出HPV高危型145例(46.8%)和132例(42.6%),两种方法检测符合率为94.5%(293/310)。基因分型结果:感染率最高的为16型(25%),其次为52型(16%)、58型(15.2%)、56型(7.5%)和31型(7.5%)等。结论实时荧光PCR技术能有效地检测常见高危型HPV的感染,与细胞学检测方法相结合,对宫颈筛查有很重要的指导意义。
- 卢妙莲王方金王建兵李明
- 关键词：人乳头瘤病毒实时荧光PCR基因分型
- 多发性结直肠癌中抑癌基因p53的表达与突变被引量：13
- 2005年
- 目的探讨抑癌基因p53与多发性结直肠癌的关系。方法实验组为同时多发性结直肠癌19个癌灶和结直肠再发癌12个癌灶,对照组为散发性结直肠癌17个癌灶。分别采用免疫组织化学抗生物素蛋白生物素过氧化物酶复合物(ABC)方法和单链DNA构像多态性(PCRSSCP)方法对癌组织和癌旁正常组织进行p53蛋白以及p53基因第5、7、8外显子突变的检测,比较各组蛋白表达和基因突变的不同。结果在同时多发癌组、再发癌组以及对照组中p53蛋白阳性表达率分别为73.7%、75%、35.3%,3组比较差异有统计学意义(χ2=6.952,P<0.05);突变率3组分别为52.6%、41.7%、29.4%,差异均无统计学意义。癌旁正常组织均未检出突变;但蛋白表达在同时性三发性癌患者中为阳性。结论多发性结直肠癌中p53基因突变率和蛋白表达高于散发性结直肠癌。p53过度表达的结直肠癌患者要警惕多发癌的发生。
- 张常华何裕隆詹文华王方金汪建平蔡世荣黄美近
- 关键词：多发性结直肠癌抑癌基因P53突变多发癌单链DNA
- 低密度基因芯片技术检测人乳头瘤病毒基因型被引量：3
- 2006年
- 【目的】利用低密度基因芯片方法对人乳头瘤病毒(HPV)进行分型检测,建立一种经济实用的临床HPV感染的基因型检测方法。【方法】利用低密度基因芯片方法对145例阴道镜门诊病人的宫颈拭子标本进行HPV-DNA检测并分型。【结果】被检人群中共检测出57例HPV阳性,88例HPV阴性,HPV的感染率为39.3%,阳性标本中检测出12种高危型别,2种低危型别。其中单型感染51例(89%),混合感染6例(11%),16,31,18,58型检出率较高。【结论】低密度基因芯片是一种快速、简便、特异性强、灵敏度高的检测方法,在HPV和宫颈癌的筛查与诊断中有很大的应用价值。
- 王敏王方金吴健王伟毅何蕴韶
- 关键词：人乳头瘤病毒基因分型
- 用FQ-PCR方法快速检测水产品中副溶血弧菌被引量：7
- 2004年
- 〔目的〕采用荧光定量PCR技术 ,研制适合各层次实验室使用的 ,快速、准确地检测与鉴定食品中副溶血弧菌污染的定性、定量检测试剂盒。〔方法〕根据副溶血弧菌gyrase基因序列 ,设计并合成特异性引物和荧光标记探针 ,将扩增后的特异片断制成阳性模板 ,绘制标准曲线。以副溶血弧菌菌株 8株及同源及非同源参考菌株 2 4株 ,做特异性检测 ;将阳性污染菌按梯度加入阴性样品为模拟样本 ,做敏感性检测。同时使用PE70 0 0型定量PCR仪和国产DA6 2 0微量荧光检测仪检测。〔结果〕该方法有良好的特异性 :8株副溶血弧菌结果均为阳性 ,而其他 2 4株菌株均为阴性 (其中 8株是弧菌科 ,其它 15株分别来自不同的菌属 ) ;该方法有良好的敏感性 :阳性模板浓度与定量曲线循环阈值之间具有良好的线性关系 ,相关系数达到 0 .9871。直接进行定量检测 ,则检测低限在 10 2cfu/g;经过 2 4小时增菌培养 ,检测低限可达 2cfu/g。〔结论〕该方法特异性强、敏感性高 ,操作简便快速 ,能避免常规PCR方法易污染的缺陷 ,在国产仪器上测试同样取得较好的敏感性和特异性 ,便于基层实验室使用 ,具有很好的推广应用前景。
- 焦红王方金程刚翁文川王伟毅谢钧宪
- 关键词：水产品副溶血弧菌食品标准
