汪晨
- 作品数：12 被引量：34H指数：4
- 供职机构：南京工业大学生物与制药工程学院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划江苏省自然科学基金江苏省教育厅自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 代谢木糖重组谷氨酸棒杆菌的构建
- 2014年
- 为了使谷氨酸棒杆菌较好地利用木糖生产有机酸,将来自Escherichia coli K-12的木糖异构酶基因xylA构建到表达载体pXMJ19中,导入Corynebacterium glutamicum ATCC13032Δldh中,成功表达了该酶基因。结果表明:重组菌株在以木糖为唯一C源进行发酵时,木糖的消耗速率为0.54 g/(L·h),木糖异构酶比酶活约为0.54 U/mL;在以木糖和葡萄糖的混合糖为C源进行发酵时,菌株优先利用葡萄糖,在葡萄糖完全消耗后,菌株开始有效利用木糖;以木糖为唯一C源进行两阶段发酵时,琥珀酸的收率可达(0.62±0.003)g/g。
- 张恒丽蔡恒汪晨张凯周志惠
- 关键词：谷氨酸棒杆菌琥珀酸木糖异构酶基因木糖
- 利用固定化蔗糖异构酶基因工程菌高效生产异麦芽酮糖
- 本文以甘蔗糖蜜为碳源,采用中心复合实验设计分析法,对产蔗糖异构酶的重组大肠杆菌进行了发酵培养基的优化研究,优化后的蔗糖异构酶活力达到29.5 U/ml,相较于以LB培养基培养重组大肠杆菌(15U/ml),蔗糖异构酶活力提...
- Chen Wang汪晨Sha Li李莎Heng Cai蔡恒Hong Xu徐虹
- 关键词：异麦芽酮糖生产工艺基因工程菌
- 文献传递
- 一种蔗糖异构酶基因及其高效表达方法
- 本发明公开了一种蔗糖异构酶基因，pal I基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。本发明还公开了上述基因的编码蛋白质，SIase酶。本发明还公开了包含上述基因的表达载体及宿主细胞，以及该基因的高效表达方法。包含上...
- 徐虹李莎任贲蔡恒汪晨
- 文献传递
- 适用于野生型枯草芽孢杆菌转化有机溶剂方法的建立和优化被引量：4
- 2011年
- 用经典的spizizen方法将穿梭质粒pLJ导入Bacillus subtilis 168、Bacillus subtilisWB600、Bacillus subtilis WB800中,均能达到70多个转化子/μg DNA的较高转化效率,但用此方法将该质粒导入由本实验室筛选并保存的野生型Bacillus subtilis NX-2中,不能获得转化子。本研究对spizizen转化方法进行了改进,通过添加不同浓度的吐温-80,DMSO、丙酮、甲苯、乙醇等有机溶剂,均能获得转化子。同时,本研究对转化条件进行了优化,分别选取吐温-80、DMSO、甲苯等3种效果较好的添加剂设计正交实验。试验结果表明,在添加4%吐温-80、3%DMSO、1%甲苯的条件下得到了34个转化子/μg DNA的较高转化效率。还研究了质粒与感受态共培养时间和感受态稀释倍数对转化的影响,当质粒与感受态共培养时间为3 h,感受态稀释5倍时,转化效率较高。
- 魏艳张丹蔡恒徐虹李莎冯小海许宗奇汪晨
- 关键词：枯草芽孢杆菌有机溶剂
- 通过DNA改组技术定向进化赖氨酸脱羧酶基因cadA和ldc被引量：2
- 2015年
- 利用DNA改组技术对赖氨酸脱羧酶野生型基因ldc进行随机突变,在大肠杆菌Escherichia coli JM109中构建赖氨酸脱羧酶突变体库。从E.coli JM109和蜂房哈夫尼菌Hafnia alvei AS1.1009中分别克隆出赖氨酸脱羧酶基因cad A和ldc。查询NCBI数据库得知,二者的同源性为75%。分别构建重组质粒p Trc99a-cad A和p Trc99a-ldc,以此2种质粒为模板,经PCR扩增,获得目的基因片段,分析目的基因片段中存在的限制性酶切位点,用多种限制性内切酶碎片化2种基因,切割成不同大小的片段。这些小片段进行不同组合,突变体经过LBXL平板初筛和高效液相色谱(HPLC)复筛,获得1株酶活性提高的赖氨酸脱羧酶突变体,编号为LDC2-16,其比酶活为4 869.86 U/mg(以1 mg总蛋白计),与2种野生型赖氨酸脱羧酶基因表达的酶Cad A(1 652.63 U/mg)、Ldc(2 365.93 U/mg)相比,在最适温度37℃、p H 6.0时,突变体的比酶活分别是上述野生型酶的2.95和2.06倍。摇瓶发酵5 h后,目标产物1,5-戊二胺产量从46.9提高至63.9 g/L,提高了36%。
- 张凯蔡恒汪晨
- 关键词：DNA改组定向进化大肠杆菌
- 一种蔗糖异构酶基因及其高效表达方法
- 本发明公开了一种蔗糖异构酶基因，pal I基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。本发明还公开了上述基因的编码蛋白质，SIase酶。本发明还公开了包含上述基因的表达载体及宿主细胞，以及该基因的高效表达方法。包含上...
- 徐虹李莎任贲蔡恒汪晨
- 响应面法优化重组大肠杆菌产蔗糖异构酶发酵培养基被引量：4
- 2011年
- 通过碳氮源的不同浓度对重组大肠杆菌E.coil BL21(DE3)发酵产蔗糖异构酶(SIase)的影响,并借助于数学分析软件Design Expert,结合Plackett-Burman试验设计和中心复合试验设计分析法,对蔗糖异构酶的产生菌进行了发酵培养基的优化研究。实验表明,最佳培养基组分为甘蔗糖蜜10.65 g/L,玉米浆22.22 g/L,NaCl7.57 g/L,MgSO4.7H2O0.52 g/L,KH2PO44.46g/L,优化后的蔗糖异构酶活力达到29.1U/ml,比LB培养基培养重组大肠杆菌(15U/ml),蔗糖异构酶活力提高了94%,与原始菌大黄欧文菌NX-5相比提高了21.4倍(1.3U/ml)。
- 汪晨李莎徐虹魏艳蔡恒
- 关键词：响应面甘蔗糖蜜乳糖诱导
- 高产琥珀酸菌株的等离子体诱变选育被引量：12
- 2013年
- 以谷氨酸棒杆菌作为原始出发菌株,通过常压室温等离子体诱变技术,确定高产琥珀酸等离子体诱变的物理参数和最佳诱变条件,采用在培养基中添加溴甲酚紫作为酸碱指示剂的方法,测定发酵液前后在波长590 nm处的吸光值,高通量筛选出在该波长处吸光值变化较大的突变株。结果表明:在诱变菌株的存活率为8%的条件下获得的突变株的正突变率达到22%。用40 g/L的葡萄糖对突变株进行摇瓶分批发酵,筛选得到诱变菌E7产琥珀酸15.6 g/L,乳酸22.8 g/L,该菌具备良好的产琥珀酸与有机酸的能力。
- 汪晨蔡恒张恒丽张凯欧阳平凯
- 关键词：常压等离子体琥珀酸谷氨酸棒杆菌诱变
- 多杀菌素高产菌株的诱变选育被引量：4
- 2012年
- 新型微生物杀虫剂多杀菌素具有生物农药安全性和化学合成农药速效性,对影响经济的重要害虫有极高的活性,本文以刺糖多胞菌为出发菌株,通过自然选育得到出发菌株A6,在能量10keV、剂量1.4×1016ions/cm2的条件下进行氮离子束诱变,获得突变株AN-099;再通过照射距离为30cm的15W紫外灯照射30s进行紫外线复合诱变,获得突变菌株ANU-069,多杀菌素产量达到175.62μg/mL,比出发菌株A6提高了71.42%,比离子束诱变菌株AN-099提高了30.22%,并且此菌株具有良好的遗传稳定性,用于以后的发酵研究。
- 乔广军汪晨张凯张恒丽蔡恒
- 关键词：多杀菌素诱变菌株选育
- 生物法制备1,5-戊二胺的研究进展被引量：8
- 2012年
- 生物法制备1,5-戊二胺是一种创新且具有潜在竞争力的生产方法,从生物法制备1,5-戊二胺研究现状、赖氨酸脱羧酶性质、1,5-戊二胺的生产菌种及代谢途径分析几方面进行了综述,并对其应用前景进行了展望。
- 张凯蔡恒汪晨张恒丽
- 关键词：谷氨酸棒杆菌大肠杆菌代谢途径
