汤兆明
- 作品数：14 被引量：26H指数：3
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金中央高校基本科研业务费专项资金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 驱动蛋白家族成员4A对乙肝病毒复制影响的研究
- 2013年
- 目的探讨驱动蛋白家族成员4A(KIF4A)对乙肝病毒(HBV)复制的影响及其调节机制。方法将不同质量的KIF4A真核表达载体Flag2B-KIF4A转染HepG2.2.15细胞后,采用ELISA法对细胞上清液中的HBsAg和HBeAg进行定量检测;荧光定量PCR法检测细胞闭合环状DNA(cccDNA)的水平;将不同质量的Flag2B-KIF4A与HBV感染性克隆pHBV1.3、启动子pHBV-Luc共转染HepG2细胞后,采用荧光检测仪检测HBV启动子活性。结果 KIF4A能够上调细胞上清液中HBsAg、HBeAg和cccDNA的水平,并上调HBV启动子活性,且调节作用呈剂量依赖效应。结论 KIF4A在HepG2细胞可以促进HBV的复制。
- 祝成亮李艳叶芳丽汤兆明
- 关键词：驱动蛋白酶联免疫吸附测定转染
- 用噬菌体展示随机7肽库筛选血型A抗原模拟肽
- 2013年
- 目的:通过血型A单克隆抗体从噬菌体展示随机7肽库中筛选血型A抗原的模拟多肽。方法:通过对噬菌体随机7肽库进行3轮亲和筛选,从第三轮筛选后获得的洗脱物中挑选多个噬菌体克隆,采用ELISA方法鉴定阳性克隆,测序并推导噬菌体展示短肽的氨基酸序列,化学合成短肽、红细胞凝集抑制试验鉴定短肽模拟A抗原的能力。结果:三轮筛选后特异性噬菌体被富集了200多倍,对ELISA鉴定信号较强的16个噬菌体克隆DNA测序并推导氨基酸序列的结果显示两个克隆展示相同的序列FSYLPSH。化学合成肽能抑制A型红细胞与抗A的凝集作用。结论:肽FSYLPSH具有模拟血型A抗原表位的作用,具有代替天然血型A抗原在临床中应用的潜能。
- 汤兆明容宇胡丽华
- 关键词：肽库抗原表位
- 血型A抗原模拟多肽的初步研究
- 第一部分血型A抗原模拟多肽的筛选
目的:
筛选血型A抗原的模拟多肽。
方法:
用血型A抗体NaM87-1F6对噬菌体随机12肽库进行三轮筛选,随机挑选32个噬菌体克隆,经噬菌体酶联...
- 汤兆明
- 关键词：噬菌体展示模拟表位模拟多肽融合蛋白ELISA多肽血型抗体
- 文献传递
- 血型A抗原模拟肽表位分析
- 2013年
- 目的:通过计算机辅助的氨基酸定点突变及分子对接研究血型A抗原模拟多肽(EYWYCGMNRTGC)中关键的氨基酸残基。方法:通过在线服务器PEP-FOLD构建丙氨酸突变后多肽的三维结构,通过软件Autodock Vina将多肽与血型A抗体(PDB:1jv5)进行对接,计算亲和力,通过分析亲和力的变化确定模拟多肽中的关键氨基酸残基。结果:肽EYWYCGMNRTGC与1jv5的对接最小自由能为-6.3kcal/mol,其中E1、W3、T10、C12经丙氨酸替换后与1jv5的亲和自由能分别增加为-6.1kcal/mol、-5.4kcal/mol、-6.0kcal/mol、-6.1kcal/mol。结论:血型A抗原模拟肽EYWYCGMNRTGC中的关键氨基酸可能是E1、W3、T10、C12。
- 曹奎杰汤兆明方敏胡丽华
- 关键词：模拟多肽
- p21对肝癌细胞中survivin转录的影响及调控机制的探讨被引量：4
- 2008年
- 目的研究细胞周期依赖性激酶抑制蛋白p21对人肝癌细胞survivin转录抑制的调控作用，并探讨其相应机制。方法使用多柔比星处理人肝癌细胞株HepG2，采用脂质体法将质粒pEGFP-C2-p21导入HepG2细胞，用G418筛选转染后的HepG2-p21和HepG2-pEGFP细胞；采用实时定量聚合酶链反应（RQ—PCR）检测p21、p53和survivin的mRNA表达；采用流式细胞仪分析转染后细胞周期的变化；采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测转染后E2F-1和p300的mRNA表达。结果经多柔比星处理后、HepG2细胞中p21和p53 mRNA的表达先增高，然后逐渐降低；survivin mRNA的表达则相反。转染后，HepG2-p21细胞中p21 mRNA的表达明显增高，分别为HepG2和HepG2-p EGFP细胞的2100．1倍和980．9倍；surivin mRNA的表达却明显降低，分别为HepG2和HepG2-pEGFP细胞的0．5％和0．6％；p53 mRNA的表达差异无统计学意义？流式细胞仪检测显示，HepG2-p21细胞的细胞周期明显阻滞在G0／G1期。HepG2-p21细胞中E2F-1和p300 mRNA的表达水平分别为0．75±0．04和0．18±0．06，与HepG2和HepG2-pEGFP细胞比较，含量均明显减低（P〈0．05）。结论p21可能通过抑制survivin的转录调控因子E2F-1和p300 mRNA的表达，从而抑制细胞中survivin的表达，并导致细胞出现G0／G1期阻滞.
- 熊娟李一荣汤兆明窦丽芳王琳胡丽华
- 关键词：P21SURVIVIN肝肿瘤基因表达调控
- 噬菌体展示技术在病毒研究中的应用被引量：3
- 2005年
- 噬菌体展示技术是近些年发展起来的一项新技术。在蛋白质 ,小分子活性物质以及抗原抗体间相互作用的研究中应用广泛。本文就噬菌体展示技术在病毒研究中的应用现状作一综述。
- 汤兆明郭永建
- 关键词：噬菌体展示技术病毒研究抗原抗体小分子活性物质相互作用
- A抗原表位模拟多肽融合表达载体的构建及鉴定被引量：3
- 2007年
- 目的:构建血型A抗原模拟多肽融合表达载体,初步鉴定融合表达蛋白结合抗A抗体的能力。方法:PCR扩增血型A抗原模拟多肽(P17)和谷胱苷肽S-转移酶(GST)编码基因,并连接成P17-GST。双酶切后克隆入原核表达质粒pET28b,酶切、测序鉴定。以BL21(DE3)为表达菌,在IPTG诱导下表达P17-GST融合蛋白,Ni-NTA柱纯化蛋白。红细胞凝集抑制实验分析融合蛋白模拟血型A抗原的能力。结果:成功构建P17基因和GST基因融合的原核表达质粒pET28b-P17-GST,目的基因可以高效表达,纯化的融合蛋白以浓度依赖的方式抑制A型红细胞的凝集作用。结论:血型A抗原的模拟多肽序列与GST的融合表达蛋白可特异性结合抗A抗体,具有替代血型A多糖抗原潜能,为发展新型的抗A抗体滤除材料提供了依据。
- 胡丽华汤兆明李一荣王琳窦丽芳熊娟
- 关键词：模拟多肽融合蛋白
- 血型A抗原的模拟多肽的表达及功能研究
- 2008年
- 目的融合表达血型A抗原的模拟多肽,初步鉴定融合蛋白结合抗A抗体的能力。方法PCR克隆扩增血型A抗原模拟多肽(P5)和谷胱苷肽S-转移酶(GST)编码基因,并连接成P5-GST。双酶切后克隆入原核表达质粒pET28b,经E.coli DH5a扩增后纯化并酶切、测序鉴定。以BL21(DE3)为表达菌,在IPTG诱导下表达P5-GST融合蛋白,Ni-NTA柱纯化蛋白。红细胞凝集抑制实验分析融合蛋白模拟血型A抗原的能力。ABO-ELISA初步分析P5-GST融合蛋白检测血型抗体的效能。结果成功构建P5基因和GST基因融合的原核表达质粒pET28b-P5-GST,目的基因可以高效表达,纯化的融合蛋白具有良好的模拟血型A抗原的能力。基于P5-GST融合蛋白的ABO-ELISA具有一定的检测血浆抗A抗体的能力。结论血型A抗原的模拟多肽序列与GST的融合表达蛋白具有特异性结合抗A抗体的特性,本融合蛋白具有替代血型A多糖抗原潜能,为发展新型的抗A抗体检测方法提供依据。
- 汤兆明胡丽华李一荣窦丽芳熊娟
- 关键词：模拟多肽融合蛋白
- 用噬菌体随机肽库筛选丙型肝炎病毒抗原表位
- 目的:筛选噬菌体展示随机12肽库中可以与HCV抗体阳性的血清特异性结合的序列，在HCV表达的蛋白分子上找到这个抗原表位，分析其序列、结构特点与功能的关系。同时检验用阴性血清逆向筛选是否能提高筛选效率。从而探讨用噬菌体展示...
- 汤兆明
- 关键词：丙型肝炎病毒噬菌体展示肽库B细胞表位
- 文献传递
- 用噬菌体展示随机12肽库筛选HCV B细胞抗原表位被引量：11
- 2005年
- 目的用患者血清中抗丙型肝炎病毒(HCV)抗体从噬菌体展示随机12肽库筛选HCV抗原表位.方法用硫酸铵粗提HCV患者血清中Ig后用DEAE-Sephadex A50层析纯化并作为筛选的配基;对噬菌体展示随机12肽库采用配基亲和富集、阴性血清吸收的方法进行生物淘洗;ELISA鉴定筛选克隆的结合特性;测定阳性克隆所携带DNA序列并进行计算机辅助分析.结果三轮生物淘洗后特异性克隆得到了富集.用第3轮淘洗出的26个克隆进行结合实验,其中有3个克隆与HCV患者血清结合力较高而与正常人血清结合能力较弱;序列分析发现2个序列与HCV蛋白第1 082～1 093和1 954～1 965位(1082YHGAGTRTIASP 1093和1954TQLLRRLHQWIS 1965)氨基酸有较高的同源性;计算机辅助分析提示这两个位点具有形成表位的性质.结论获得了两个HCV抗原表位,在HCV感染的检测中具有潜在的应用价值.
- 汤兆明郭永建卓孝福苏东辉王长青
- 关键词：丙型肝炎病毒噬菌体展示肽库B细胞表位
