武辉
- 作品数：9 被引量：35H指数：2
- 供职机构：华西医科大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金卫生部科学研究基金四川省卫生厅科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 强直性肌营养不良症DMPK基因CTG重复序列与Alu±1kb单倍型研究被引量：1
- 2000年
- 强直性肌营养不良(myotonicdystrophy,DM)是由于DMPK基因3′非翻译区CTG重复序列异常扩展所致的、主要累及神经肌肉系统的常染色体显性遗传病。在该基因的第8内含子中还存在一个Alu重复序列的1kb插入/缺失多态性,即Alu±1kb多态性。为了帮助阐明汉族人群中DM突变的起源,并为解释DM在不同群体中发病率的差异提供更多依据 ,本文从300例已知CTG拷贝数的正常汉族群体中随机挑选60例,首先通过PCR扩增确定其Alu±1kb多态性 ,然后对Alu±1kb和CTG双杂合的标本,采用长PCR方法先行扩增含Alu±1kb和CTG重复序列的DNA片段,再分别对含Alu( +)和Alu( -)的DNA片段中的CTG拷贝数进行常规PCR分析,以确定二位点的单倍型。结果表明60例正常人中二位点间呈连锁不平衡。其单倍型为:(CTG) 5 均与Alu( +)连锁 ;多数(CTG)11～14与Alu( -)连锁 ;在两个(CTG)≥19的等位基因中一个与Alu( +)连锁 ,另一个与Alu( -)连锁。各民族相关资料的比较提示 ,汉族人群中(CTG)11～14与非洲黑人的起源可能不同;(CTG)19～30/Alu-1kb在汉族人群中的频率远比欧洲人群的高 ;(CTG)19～30/Alu-1kb与(CTG)19～30/Alu +1kb在汉族人群中是以一定比例共存的 ;(CTG)19～30在不同民族间的起源不尽相同 ;如果从(CTG)5 到(CTG)19～30的假设成立的话 ,则很可能?
- 肖翠英武辉潘阿根张思仲
- 关键词：DM
- 中国羌族人群强直性肌营养不良症基因CTG重复序列多态性研究被引量：1
- 1998年
- 强直性肌营养不良症是由于ＭＴ－ＰＫ基因３′非编码区ＣＴＧ三核苷酸重复序列的过度扩展所致。正常人群中ＣＴＧ的拷贝数为５～３０，而患者在５０以上，且具民族差异。目前尚无我国羌族人群的有关资料。为了解中国羌族人群该基因３′ＵＴＲＣＴＧ三核苷重复序列的分布情况，作者采用ＰＣＲ、聚丙烯酰胺凝胶电泳、银染和测序等技术，对６０例正常羌族人的ＣＴＧ重复序列进行了分析。共发现８种等位基因，其中ＣＴＧ拷贝数为５的等位基因最为常见，占３０８３％，其余依次为１３拷贝（２２５％）、１２（１９１７％）、１１（１５８３％）、１４（５８３％）和１５（４１７％）；拷贝数大于１５的等位基因极少，仅检测到一例，为２７拷贝；ＣＴＧ拷贝数在６～１０之间的等位基因也很少，仅发现一例为９拷贝，而该等位基因在其它人群尚无报道。６０名个体中共发现纯合子１８例，其中９例为５／５，２例为１１／１１，２例为１２／１２，４例１３／１３和１例为１５／１５，杂合率为７０％。本系统的多态信息量（ＰＩＣ）为０７７。羌族和汉族人群该位点的多态性无显著差异。
- 敬慧娥张思仲肖翠英武辉
- 关键词：羌族强直性肌营养不良DNA多态性
- 三核苷酸重复序列PCR扩增中影子带的产生及其消除的方法被引量：22
- 1998年
- 目的为了消除ＰＣＲ扩增三核苷酸重复序列时产生的影子带。方法以人类强直性肌营养不良致病基因－肌张力蛋白激酶基因（ｍｙｏｔｏｎｉｎｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅｇｅｎｅ，ＭＴ－ＰＫ）３′端非翻译区中的ＣＴＧ重复序列为例，主要比较了ＰＣＲ反应中单独使用ＴａｑＤＮＡ聚合酶和使用Ｔａｑ＋Ｐｗｏ混合的ＤＮＡ聚合酶对影子带产生的影响。结果实验表明ＰＣＲ反应中单独使用ＴａｑＤＮＡ聚合酶时，其ＰＣＲ产物经ＰＡＧＥ电泳，银染显色后常有影子带形成，而向ＴａｑＤＮＡ聚合酶中加入具有３′－５′外切酶活性的ＰｗｏＤＮＡ聚合酶则可完全消除影子带。结论本实验结果表明影子带产生于ＰＣＲ过程本身，而比ＴａｑＤＮＡ聚合酶具有更高加工性的组合酶则有可能消除或减弱影子带。
- 武辉张思仲肖翠英
- 关键词：三核苷酸PCR肌营养不良症
- Beaglf犬选择素E基因组DNA的克隆、序列分析及同源性比较被引量：2
- 2001年
- 目的 选择素是细胞粘附分子大家族中的一大类成员 ,在炎性反应及血管生成等诸多方面发挥重要作用。本研究对 BEAGL E犬选择素 E基因组 DNA进行克隆、序列分析及同源性比较。方法 采用分段 PCR的方法 ,经过 PCR扩增、T载体克隆、序列分析、基因拼接及同源性比较等实验步骤。结果 首次获得了具有完整开放阅读框架的 Beagle犬 E- selectin基因组序列 ,通过对其基因结构和同源性比较分析 ,证明该基因在人、猪、犬各种间具有高度的同源性。结论 由于验证了选择素 E基因在种间的高度同源性 。
- 郑立新石应康董力张戈武辉李幼平程述森
- 关键词：选择素E基因组DNAPCR克隆
- 双链引物聚合酶链反应
- 1999年
- 目的 建立一种操作简单、不仅能够在反应开始之前发挥预防和降低非特异性扩增，而且能够在整个反应过程中都发挥这种作用的 Ｄ Ｎ Ａ 体外扩增技术。方法 人工合成脆性 Ｘ 智力低下１ 号基因（ Ｆ Ｍ Ｒ１）５′非翻译区序列特异单链引物和与其互补的引物，并将后者的３′末端进行修饰，使其失去延伸能力；最后将它们混合并退火成双链引物，再将双链引物加入 Ｐ Ｃ Ｒ 反应体系中进行热循环扩增。结果 在１５ 个标本的双链引物 Ｐ Ｃ Ｒ 反应中都得到了较使用常规 Ｐ Ｃ Ｒ 特异性更高的扩增产物。结论 双链引物 Ｐ Ｃ Ｒ 是一种特异性更好的 Ｄ Ｎ Ａ 体外扩增技术。
- 夏庆杰张思仲丁兰武辉
- 关键词：聚合酶链反应特异性基因诊断
- 全文增补中
- UT-PCR——一种扩增未知序列微量 DNA 片段的方法被引量：6
- 1997年
- ＵＴ－ＰＣＲ——一种扩增未知序列微量ＤＮＡ片段的方法夏庆杰张思仲肖翠英武辉在致病基因的突变分析、分离克隆等医学分子生物学研究中，常常遇到这样的问题：虽然已经获得感兴趣的某ＤＮＡ片段，但由于量太微而难以继续进行克隆、测序、探针制备等操作。我们介绍一种能...
- 夏庆杰张思仲肖翠英武辉
- 关键词：扩增DNA片断
- 全文增补中
- 用长PCR方法检测含有较大缺失或插入的DNA大片段被引量：2
- 1998年
- 选择位于１９ｑ１３３上的人类肌张力蛋白激酶基因（ｍｙｏｔｏｎｉｎｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅｇｅｎｅ，ＭＴ－ＰＫ）为靶基因（基因全长为１４ｋｂ），以Ｇ＋Ｃ含量较高且含有１ｋｂ缺失或插入，由基因第８内含子中的Ａｌｕ±１ｋｂ的５＇端至第１５外显子３＇非编码区中的ＣＴＧ重复序列３＇端，即两者间的距离为５３ｋｂ的ＤＮＡ片段为待扩增靶序列，通过优化ＤＮＡ聚合酶的组合和反应缓冲体系，重点考查了含有Ａｌｕ－１ｋｂ和Ａｌｕ＋１ｋｂ缺失或插入的ＭＴ－ＰＫ等位基因片段共扩增的长ＰＣＲ方法。本方法可有效地同步扩增６５ｋｂ和５５ｋｂ两个等位基因片段，对６５ｋｂ和５５ｋｂ纯合等位片段则达到了更有效的扩增。
- 武辉张思仲
- 关键词：长PCR等位基因扩增
- 人类乳腺癌的遗传学研究进展被引量：2
- 1998年
- 本文综述了近年来在乳腺癌的遗传学研究方面的进展，着重介绍了ＢＲＣＡ１和ＢＲＣＡ２基因的分离、突变以及乳腺癌的遗传咨询。
- 肖翠英武辉
- 关键词：乳腺癌遗传学
- PCR产物末端性质的分析研究
- 2000年
- 利用PCR、UT PCR、克隆及测序等技术 ,对强直性肌营养不良基因 (MT PK) 3′ 非翻译区分别用Taq ,Taq +PwoDNA聚合酶进行了扩增、克隆和测序 ,研究了PCR产物末端组成情况 ,并比较了上述两种DNA聚合酶对PCR产物末端的影响 .结果在用TaqDNA聚合酶扩增的PCR产物主要得到 3′端突出 1个A (占 6 7 3% ,35 /5 2 ) ;在Taq +PwoDNA聚合酶扩增的PCR产物末端中得到 3′端 +A的仅占 17 4% ,而 - 1的占 34 8% ,与前者显著不同 .
- 夏庆杰张思仲武辉肖翠英
- 关键词：多样性
