李芸
- 作品数：9 被引量：49H指数：3
- 供职机构：山东大学附属省立医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金山东省自然科学基金国家临床重点专科建设项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 新生大鼠前扣带皮层神经元的原代培养被引量：2
- 2011年
- 目的建立新生大鼠前扣带皮层（ACC）神经元的体外培养方法,并进行纯度和生长状态检测。方法从新生鼠ACC分离出神经元,采用低浓度胰酶长时间消化、阿糖胞苷处理、差速培养等方法进行体外原代培养。在培养的第7天,应用兔抗大鼠微管相关蛋白2（MAP2）对培养的神经元进行纯度鉴定,利用微量滴定（MTT）法测定培养第712天ACC神经元的生长状态。结果从新生大鼠ACC分离的神经元,培养至第5天,可见多数细胞长出2个以上突起且呈多极形态并交织成网;第7天神经元有多种形式的接触,互相迁移靠拢,部分神经元聚集成团。MAP2细胞免疫荧光染色结果表明,ACC神经元阳性率大于80%,MTT结果显示,培养第79天的ACC神经元可保持较好的生长状态,之后细胞活性降低。结论新生大鼠ACC神经元可进行体外原代培养,纯度和活力检测表明,培养第79天的神经元可作为ACC神经元相关研究的体外细胞模型。
- 李芸王红王波许永广张孟元王公明
- 关键词：扣带回神经元免疫组织化学原代培养
- 慢病毒介导RNAi沉默大鼠脊髓神经元NF-κB p65基因的观察被引量：1
- 2014年
- 目的 构建NFκBp65基因RNA干扰（RNAi）慢病毒载体并转染体外培养的大鼠脊髓神经元,观察其沉默效率。方法 针对大鼠NFκBp65基因特异性序列,设计3条NFκBp65siRNA序列及1条阴性对照序列,合成包含各正反义靶序列的互补DNA链,退火形成双链DNA,插入到经BamHI和EcoRI酶切后的pFUGW慢病毒载体中,PCR筛选阳性克隆,DNA测序鉴定。与慢病毒包装质粒pHelper1.0、pHelper2.0通过lipofectamine2000共转染至包装细胞293T,经滴度测定后转染体外培养的大鼠脊髓神经元。实验分为5组：阴性对照组、LVNC组、LVshNFκBp651组、LVshNFκBp652组和LVshNFκBp653组,观察转染效率,Westernblotting法检测慢病毒表达载体对神经元NFκBp65基因的沉默效应。结果 测序结果证实合成的寡核苷酸链插入正确,重组载体构建成功,测定病毒滴度为108～9TU/mL,慢病毒重组体能够成功转染大鼠脊髓神经元,转染效率大于90%,与阴性对照组或LVNC组比较,LVshNFκBp651组和LVshNFκBp652组NFκBp65蛋白的表达明显下调（P均〈0.01）,而LVshNFκBp653组无明显下调（P〉0.05）。结论 成功构建了大鼠神经元NFκBp65基因的RNAi慢病毒载体,它可使大鼠脊髓神经元NFκBp65基因表达下调。
- 罗剑刚孙涛林小雯李芸赵菲苗贵申傅志俭
- 关键词：慢病毒神经元
- 臭氧治疗炎性痛的应用研究被引量：36
- 2016年
- 炎性痛广泛存在于各种疾病进程中,对患者的工作和生活影响较大,其治疗是世界医学难题之一,现有临床各类药物虽有一定疗效,但均因具有不同程度的不良反应而限制了其对疼痛的有效治疗,因此,寻求更为有效安全的治疗方法 ,就显得尤其重要。医用臭氧作为一种新型的治疗方式,具有抗炎镇痛、改善局部组织的缺氧情况和血液循环的作用,而且操作简单、费用较少、创伤小、安全性高,在治疗颈椎病、腰椎间盘突出症、骨性关节炎、口腔疾病、血液疾病、呼吸系统疾病、慢性感染性疾病等方面有明显优势,在临床上已广泛开展。对于医用臭氧治疗炎性痛的临床疗效及发挥作用的机制已有大量的文献报道。本文综述了臭氧在治疗脊柱相关性炎性痛、关节相关性炎性痛和软组织炎性痛等方面的临床疗效,为以后的临床炎性痛的治疗提供可行方向。
- 李芸傅志俭
- 关键词：臭氧炎性痛
- 神经病理性疼痛大鼠脊髓IL-33蛋白表达的变化被引量：4
- 2015年
- 目的：观察外周神经慢性压榨性损伤（chronic constrictive injury,CCI）大鼠脊髓白介素-33（interleukin-33,IL-33）表达的变化规律。方法：雄性Wistar大鼠60只,分为手术组和假手术组,每组30只,于CCI前1天、CCI后第1、4、7、14、21天各时间点测定机械痛阈及热痛阈后立即处死大鼠,每个时间点5只,取L4~6脊髓,采用Western blot方法测定IL-33的蛋白表达变化。结果：手术组大鼠术侧机械痛阈及热痛阈明显降低,脊髓IL-33水平表达增加,明显高于对侧和假手术组术侧;IL-33蛋白水平于CCI后第1天开始增加,第7天达到高峰（P〈0.01）,于CCI后第21天仍维持于较高水平（P〈0.05）。结论：CCI致大鼠脊髓IL-33活化,参与神经病理性疼痛的调控过程。
- 罗剑刚左玲许维澄林小雯李芸赵菲苗贵申孙涛傅志俭
- 关键词：神经病理性疼痛白介素-33
- 臭氧疗法的系列研究和临床应用-医用臭氧神经毒性分子机制的初步探讨
- 近年来,臭氧介入治疗己被广泛应用于颈腰间盘突出症、手术失败综合症、软组织病变和关节痛等疾病,并取得了良好的疗效.但在使用过程中发现,医用臭氧可能会对中枢神经系统产生毒性作用,而且医用臭氧神经毒性作用的分子机制尚不清楚.该...
- 李芸傅志俭
- N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基/RNAi慢病毒载体的构建及鉴定被引量：1
- 2012年
- 目的前扣带皮层(anterior cingulate cortex,ACC)神经元N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基(N-methyl-D-aspar-tate,NR2B)对晚期癌痛患者的恶性情绪体验形成具有重要作用。构建靶向NR2B基因的RNA干扰(RNA interference,RNAi)慢病毒表达载体,可为下调ACC神经元NR2B靶基因的表达提供有力工具。方法构建靶向目的基因NR2B的RNAi重组慢病毒表达载体并酶切鉴定,再以NR2B/RNAi慢病毒表达载体和NR2B的基因表达质粒共转染293T工具细胞,以Westernblot方法检测其对目的基因NR2B的敲减效率。结果酶切鉴定NR2B/RNAi慢病毒表达载体Ⅰ、Ⅱ及Ⅲ构建成功。West-ern blot结果显示,NR2B/RNAi慢病毒表达载体Ⅰ、Ⅱ及Ⅲ均对NR2B靶基因有敲减效果,但以NR2B/RNAi慢病毒表达载体Ⅲ效率最高。结论成功构建可高效沉默NR2B靶基因的NR2B/RNAi慢病毒表达载体,为下调ACC神经元NR2B的基因表达治疗晚期癌痛患者的恶性情绪体验提供了有力工具。
- 李芸王红牛新环张立功王公明张孟元
- 关键词：RNAI慢病毒载体基因敲除
- 臭氧疗法的系列研究和临床应用——医用臭氧神经毒性分子机制的初步探讨
- ＜正＞近年来,臭氧介入治疗已被广泛应用于颈腰间盘突出症、手术失败综合症、软组织病变和关节痛等疾病,并取得了良好的疗效。但在使用过程中发现,医用臭氧可能会对中枢神经系统产生毒性作用,而且医用臭氧神经毒性作用的分子机制尚不清...
- 李芸傅志俭
- 文献传递
- 臭氧对骨性关节炎大鼠关节软骨Wnt/β-catenin信号通路的影响被引量：5
- 2016年
- 目的 探讨臭氧对骨性关节炎大鼠关节软骨Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）信号通路的影响.方法 健康雄性SPF级Wistar大鼠18只,3月龄,体重200～ 250 g,采用随机数字表法分为3组（n=6）：正常对照组（C组）、骨性关节炎组（OA组）和臭氧组（O组）.采用膝关节腔内注射含3mg碘乙酸钠水溶液50 μl的方法制备骨性关节炎模型.注药后7d,O组右后肢膝关节腔注射25μg/ml臭氧1 ml,每周1次,连续3周.造模后观察大鼠行为学改变.于造模前1d、造模后1、4、7、14、21和28 d时测定机械缩足反应阈.造模后28 d时,截取整个膝关节,行HE染色,光镜下观察软骨病理学结果,采用免疫组化法测定膝关节软骨β-catenin和基质金属蛋白酶-13（MMP-13）的表达水平.结果 大鼠造模后出现跛行、膝关节肿胀、关节活动降低等关节炎的表现,以及舐足等痛觉过敏表现.与C组比较,其余2组造模后各时点机械缩足反应阈降低,膝关节软骨β-catenin和MMP-13表达上调（P＜0.05）;与OA组比较,O组造模后7-28 d时机械缩足反应阈升高,膝关节软骨β-catenin和MMP-13表达下调（P＜0.05）.O组膝关节软骨病理学损伤较OA组减轻.结论 臭氧减轻大鼠骨性关节炎的机制可能与抑制关节软骨Wnt/β-catenin信号通路激活有关.
- 姜鹏李芸王珺楠林小雯谢珺田傅志俭
- 关键词：臭氧WNT蛋白质类Β连环素
- 臭氧治疗炎性痛的应用研究
- 炎性痛广泛存在于各种疾病进程中,对患者的工作和生活影响较大,其治疗是世界医学难题之一,现有临床各类药物虽有一定疗效,但均因具有不同程度的不良反应而限制了其对疼痛的有效治疗,因此,寻求更为有效安全的治疗方法,就显得尤其重要...
- 李芸傅志俭
- 关键词：炎性痛臭氧治疗疗效评价生活质量
