李立兰
- 作品数：6 被引量：15H指数：3
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- 新铂类药物双环铂对8种结肠癌耐药细胞的化疗敏感性分析被引量：3
- 2011年
- 目的用双环铂对8种耐奥沙利铂或伊立替康结肠癌耐药细胞及其原代细胞作化疗敏感性研究,为扩大该新药的临床应用范围,给耐药结肠癌患者提供更多化疗选择奠定基础。方法将8种耐奥沙利铂或伊立替康结肠癌耐药细胞系及其原代细胞系-COLO320与COLO320/OHP,COLO320与COLO320/CPT,SW620与SW620/OHP,SW620与SW620/CPT,SW480与SW480/OHP,SW480与SW480/CPT,LOVO与LOVO/OHP,LOVO与LOVO/CPT配对培养于96孔板。按从低到高的浓度加入双环铂作用一段时间后做3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)细胞毒性试验,计算各原代及耐药细胞的IC50、耐药指数及临床用药浓度下对各耐药细胞的抑制率,分析双环铂对上述耐药细胞的疗效。结果 8种结肠癌耐药细胞对双环铂的耐药指数均为1.10～2.46,而各细胞系原有耐药指数在10.16～25.87,且双环铂对8种中的7种耐药细胞均敏感,对其中1种细胞系具有高度化疗敏感性,3种中度敏感,3种低度敏感,1种不敏感。结论多数耐奥沙利铂/伊立替康的结肠癌耐药细胞(7/8)对双环铂具有不完全交叉耐药性,可以考虑将其作为临床耐药结肠癌患者的另一化疗选择。
- 魏雯刘桢陈曦李楠静李立兰毕锋
- 关键词：抗肿瘤联合化疗方案结肠肿瘤
- RhoE对cd44基因启动子的转录活性及大肠癌细胞系恶性生物学行为的影响被引量：2
- 2011年
- 目的研究RhoE对cd44基因启动子的转录调控,并探讨RhoE对裸鼠体内成瘤性的影响。方法采用PCR技术从人胚肾HEK293细胞中扩增出cd44启动子,并将其插入荧光素酶报告基因载体pGL3-Basic中,经测序确定所扩增的DNA序列,并将其转染入SW480及LoVo细胞中监测其活性。将pcDNA3.1-RhoE和pcDNA3.1分别与pGL3-CD44 promoter共转染大肠癌LoVo细胞和SW480细胞,双荧光素报告基因检测活性。另外将pcDNA3.1-RhoE和对照组分别稳定转染LoVo细胞和SW480细胞,并将筛选的稳定表达的细胞分别接种裸鼠,观察肿瘤的生长;用免疫组化的方法检测RhoE对肿瘤组织细胞形态及CD44分子表达的影响。结果测序结果表明,扩增的cd44启动子序列正确,双报告基因实验检测荧光素酶活力表明构建的报告基因具有启动子活性。含cd44启动子序列的报告基因在pcDNA3.1-RhoE阳性的LoVo细胞中表达受到抑制;HE染色显示pcDNA3.1-RhoE转染组较对照组肿瘤细胞明显变小,且大小和形态呈现一致性,已没有瘤巨细胞,相应的肿瘤细胞核的体积也变小。结论 RhoE通过抑制cd44基因启动子的活性部分逆转肿瘤的恶性生物学行为。为研究RhoE表达与cd44基因的关系及CD44蛋白表达与结直肠癌发生、发展及浸润转移的关系提供了良好的实验基础。
- 周海俊李立兰岳彩霞魏雯李楠静唐秋琳毕锋
- 关键词：RHOE荧光素酶报告基因体内成瘤
- 一个新的与12位密码子共存的K-ras基因突变位点
- 2009年
- 目的:检测大肠癌组织中K-ras基因的突变情况以指导临床治疗。方法:通过提取15例大肠癌石蜡组织中的DNA并进行PCR扩增,之后采用国际金标准方法-直接测序法进行检测获得突变信息。结果:15例大肠癌石蜡组织样本中K-ras有4例发生突变,突变率为26.6%。值得注意的是发现一个新的突变位点-密码子42,并且与密码子12突变共存。结论:密码子42的突变进一步证明K-ras突变不仅局限于密码子12,13,61,还有与密码子12共存的42位突变。
- 陈向征罗婷刘明郎楠朱亚杰唐秋琳李立兰毕锋
- 关键词：K-RAS基因大肠癌点突变
- 蛋白酶体抑制剂MG132对RhoA诱导的肿瘤血管生成的抑制作用的研究被引量：7
- 2011年
- 目的探讨RhoA对血管内皮生长因子(VEGF)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和微血管生成的影响以及蛋白酶体抑制剂MG132对RhoA调控作用的影响。方法将组成性激活的RhoA的真核表达质粒,在脂质体介导下转染胃癌细胞系MKN-45,经G418筛选出阳性单克隆并用Western blot检测是否稳定转染成功;应用ELISA检测不同细胞培养上清中VEGF的含量;建立组成性激活RhoA的荷瘤鼠模型,并用MG132治疗并观察治疗效果;用免疫组化染色方法检测RhoA及MG132对肿瘤细胞表达HIF-1α、VEGF及CD31的影响。结果组成性激活RhoA的稳定转染细胞株构建成功;组成性激活的RhoA促进VEGF的分泌,而MG132抑制VEGF的分泌;组成性激活的RhoA促进肿瘤的生长,差异有统计学意义(P<0.05),MG132抑制肿瘤的生长,差异有统计学意义(P<0.01);组成性激活的RhoA促进HIF-1α、VEGF及CD31的表达,MG132抑制HIF-1α、VEGF及CD31的表达,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 MG132通过抑制RhoA对HIF-1α、VEGF及CD31的上调来影响肿瘤血管的生成。
- 岳彩霞马骥周海俊唐秋琳李立兰毕锋薛妍
- 关键词：RHOA微血管密度缺氧诱导因子-1ΑMG132
- Rac1b小干扰RNA对结直肠癌细胞恶性生物学行为的影响
- 2011年
- 目的观察Rac1b小干扰RNA(Si-Rac1b)对结直肠癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响。方法 Si-Rac1b在lipofectamineTM2000介导下转染筛选出的Rac1b高表达的结直肠癌细胞SW1116,分别从RNA和蛋白水平检测转染细胞Rac1b的表达,采用细胞增殖实验,损伤刮擦实验,体外侵袭实验(Trans well小室)和hoechst方法分别检测Si-Rac1b转染细胞的增殖潜力,迁移与侵袭能力和凋亡的变化。结果成功转染Si-Rac1b的肿瘤细胞,Rac1b mRNA和蛋白表达都明显下调,而Rac1 mRNA和蛋白表达无明显变化;Si-Rac1b可明显抑制结直肠癌细胞SW1116的增殖、迁移和侵袭均并能促进SW1116细胞的凋亡。结论 Si-Rac1b能够部分逆转结直肠癌细胞SW1116的恶性生物学行为。
- 李立兰周海俊岳彩霞李楠静魏雯唐秋琳毕锋
- 小G蛋白Cdc42对人结肠癌奥沙利铂耐药细胞多药耐药性的影响被引量：3
- 2011年
- 目的研究细胞分裂周期蛋白(cell division cycle 42,Cdc42)对人结肠癌奥沙利铂耐药细胞系多药耐药性的影响。方法 Western blot检测人结肠癌SW480、Colo320细胞与已成功构建的奥沙利铂耐药细胞系SW480/L-OHP、Colo320/L-OHP细胞中Cdc42的表达,用LipofectamineTM2000介导重组质粒pDEST26-His-Cdc42转染入Cdc42表达相对较低的亲代细胞系,介导Cdc42 siRNA转染入Cdc42表达相对较高的耐药细胞系。Western blot和RT-PCR检测转染是否成功。利用Cell Counting Kit-8(CCK-8)检测各细胞系5氟尿嘧啶、顺铂、奥沙利铂,紫杉醇,依托泊苷,长春新碱,阿霉素等结直肠癌常用化疗药物的药物敏感性,计算出各种药物的半数致死浓度(IC50)。行Western blot检测不同细胞系P-gp、MRP1蛋白表达水平。结果在耐药细胞系中Cdc42的表达高于亲代细胞系。成功转染外源Cdc42基因的亲代细胞CCK-8(CCK-8)法检测对多种化疗药物的IC50以及P-gp、MRP1蛋白表达水平高于未转染细胞系。成功转染Cdc42 siRNA的耐药细胞CCK-8法检测对多种化疗药物的IC50显著低于耐药细胞系。结论 Cdc42与人结肠癌细胞耐药性形成有关,Cdc42可增强人结肠癌细胞的多药耐药性的形成。提示Cdc42可能成为降低结肠癌细胞多药耐药性的分子靶点。
- 李楠静刘桢张又岳彩霞魏雯李立兰唐秋琳毕锋
- 关键词：CDC42奥沙利铂多药耐药性结肠癌
