李武
- 作品数：18 被引量：26H指数：3
- 供职机构：宁夏大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金宁夏回族自治区自然科学基金国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学文化科学更多>>
- 产肠毒素大肠埃希菌STa-K99融合蛋白重组腺病毒载体的构建及表达被引量：2
- 2013年
- 为构建产肠毒素大肠埃希菌(ETEC)STa-K99融合蛋白重组腺病毒载体Ad STa-K99,通过PCR技术分别克隆了STa及K99基因,并与腺病毒穿梭质粒连接构建了穿梭质粒pAd5 STa-K99,将pAd5STa-K99和骨架质粒(含GFP基因)分别用PacⅠ酶切线性化,利用LipofectamineTM LTX&PLUS共转染293细胞进行同源重组包装重组腺病毒,通过PCR及Western blot对重组腺病毒进行鉴定。结果显示,重组腺病毒Ad5STa-K99构建正确并表达融合蛋白,且表达的融合蛋白能够被抗体所识别,为研制由ETEC引起的新生动物腹泻重组腺病毒载体疫苗奠定了基础。
- 邓光存包少文杨继辉曾瑾李武刘晓明
- 关键词：黏附素重组腺病毒载体
- 炎性小体的激活机制及其在机体抗结核分枝杆菌中的作用研究进展被引量：1
- 2020年
- 由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)感染引起的结核病(tuberculosis,TB)是目前危害人类健康的一个重要的公共卫生问题。据估计,目前全球大约有23%的人被Mtb所感染。虽然多数Mtb感染者最终不发病,表现为潜伏期感染(latent TB infection,LTBI),但全球每年仍有数百万人死于结核病。因此,结核病是一个持续的热门研究领域,研究者试图从不同的角度去揭示Mtb的致病机制,以期最终战胜结核病。炎性小体(inflammasome)是一种聚集在受感染或受损细胞细胞质中的多蛋白复合物,其可识别病原相关分子模式(pathogen-associated molecular patterns,PAMPs)或者宿主来源的危险信号分子(host-derived danger signaling molecules,也称损伤相关分子模式,damage-associated molecular patterns,DAMPs),在多种感染性疾病中发挥着重要作用。本文将对Mtb感染过程中炎性小体的激活机制及其在机体抗Mtb感染中的作用相关研究进展进行综述。
- 王健宏徐兆坤李武
- 关键词：结核病结核分枝杆菌
- 宁夏银川地区奶牛养殖场环境病原微生物群落分布规律研究
- <正>引言宁夏回族自治区是农业部'全国奶牛优势区域布局规划'的重点区域,奶牛养殖业是其支柱性产业[1]。随着奶牛养殖量的增加,所产生的粪污量也随之增加。据统计,目前宁夏奶牛存栏已达到57.6万头,每年粪便排量达3千万吨之...
- 张雯李武马臣杰张嘉美吴晓玲邓光存
- 文献传递
- BCG诱导RAW264.7细胞脂肪酸氧化对细胞自噬和促炎因子表达的调控作用被引量：1
- 2021年
- 旨在探究脂肪酸氧化(fatty acid oxidation,FAO)对BCG介导的RAW264.7细胞自噬和促炎因子表达的调控作用。用BODIPY染色和游离脂肪酸定量试剂盒检测BCG感染后RAW264.7细胞中脂滴聚集情况以及脂肪酸含量;Western blot检测BCG感染对肉毒碱棕榈酰基转移酶1A(CPT-1A)表达的影响;Etomoxir(100μmol·L^(-1))预处理细胞2 h后,BCG感染细胞6 h,检测RAW264.7细胞中BCG存留量,并用Western blot方法检测自噬相关蛋白(Beclin1、LC3-II)和溶酶体蛋白(Rab7)的表达情况;用免疫荧光方法和mRFP-GFP-LC3荧光双标腺病毒分别检测自噬小体聚集和自噬流;荧光定量PCR和ELISA分别检测促炎因子IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA表达情况以及在细胞培养上清中的含量。结果显示,BCG感染促进RAW264.7细胞中脂滴聚集和CPT-1A的表达,而游离脂肪酸含量降低;Etomoxir预处理抑制了细胞中BCG存活,并上调了Beclin1、LC3-II和Rab7表达,且细胞中出现大量自噬小体聚集,自噬流增强,却抑制了促炎因子IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA表达与分泌。综上表明,抑制FAO可促进BCG感染诱导的RAW264.7细胞自噬,并抑制BCG感染引起的炎症反应。
- 骆佳徐金瑞徐金瑞王玉炯
- 关键词：BCGRAW264.7巨噬细胞细胞自噬
- 元基因组文库分析技术研究进展被引量：6
- 2007年
- 随着新的分析技术的不断出现和成熟,促进了微生物分子生态学及相关学科的诞生和迅速发展。其中,元基因组文库分析技术即是近年来微生物分子生态学研究领域兴起的一种新的分析技术。就元基因组分析技术诞生的背景及该技术的原理进行了讨论,着重阐述了元基因组文库分析技术在寻找新基因、开发新的生物活性物质、研究群落中微生物多样性、人类元基因组测序等方面的应用。另外,归纳总结了目前国际上常用的诸如PCR为基础的筛选、荧光原位杂交(fluorescent in situhy bridization,FISH)、底物诱导的基因表达筛选(substrate induced gene expression screening,SIGEX)、基因芯片等元基因组文库筛选方法,并就不同方法的优缺点进行了分析和讨论,指出了目前元基因组文库分析技术存在的主要问题并对今后该技术的发展进行了展望。
- 李武赵勇王玉炯
- 关键词：微生物分子生态学
- 外泌体在机体抗结核分枝杆菌感染中的作用及其应用被引量：4
- 2018年
- 结核病(tuberculosis)是由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)感染引起的严重危害人类健康的主要传染病之一,全球每年都会有数百万人死于结核病,但目前结核病的预防和治疗仍然未取得重大突破。外泌体(exosomes)是一种多种细胞均可分泌的囊泡结构,其内含有多种成分,它在细胞间的信息传递、机体免疫等生理过程中发挥着重要的作用。近年来的研究发现,外泌体与结核病的发生发展有密切的联系,外泌体与结核病的研究已经成为当前的研究热点之一,其在结核病的诊断和治疗中的潜在价值也越来越受到人们的关注。本文就外泌体在机体抗结核分枝杆菌感染中的作用及其应用的相关研究进展进行综述。
- 徐兆坤李武李武
- 关键词：结核病结核分枝杆菌外泌体疫苗
- 重组结核分枝杆菌CFP10蛋白对A549细胞TLR信号途径介导的炎症反应的影响被引量：1
- 2020年
- 本研究旨在检测重组结核分枝杆菌10 ku培养滤液蛋白(culture filtrate protein 10, CFP10)对肺泡Ⅱ型上皮细胞系A549细胞Toll样受体(TLRs)信号途径及其介导的炎症反应的影响。PCR扩增cfp10目的基因片段,构建重组质粒载体pCzn1-CFP10。将重组质粒pCzn1-CFP10转入BL21(DE3)大肠杆菌感受态细胞,IPTG诱导表达重组蛋白CFP10(rCFP10)并鉴定,纯化rCFP10,去除内毒素及脱盐备用。设置对照组,利用MTT检测rCFP10对A549细胞的存活率的影响;通过qRT-PCR、Western blot及ELISA等技术,分别在转录和翻译水平检测rCFP10对A549细胞TLRs信号途径关键分子及其下游炎症因子表达的影响。结果显示,成功构建重组表达载体pCzn1-CFP10并表达纯化出高纯度的rCFP10。MTT结果显示,随着rCFP10浓度增加和处理时间延长,A549细胞存活率显著降低。与空白对照组相比,rCFP10分别从转录和翻译水平显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)上调A549细胞中TLRs途径关键分子TLR2、TLR4、MyD88、TRAF6和NF-κB p65及下游炎症因子IL-6、TNF-α的表达水平。rCFP10蛋白可以通过激活A549细胞TLRs受体信号途径促进细胞炎症因子的分泌,这将为进一步加深理解结核病发病机制提供理论依据。
- 徐兆坤王健宏李武李武
- 关键词：A549细胞
- 重组CFP10-ESAT6蛋白通过TLR信号介导A549细胞抗BCG感染
- 2021年
- 本研究旨在探究重组CFP10-ESAT6蛋白在结核分支杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)感染肺泡上皮细胞过程中对肺泡上皮细胞TLR信号途径及其介导的炎症反应的影响。利用原核表达系统表达纯化Mtb重组蛋白CFP10-ESAT6,使用重组蛋白处理A549细胞,利用CCK-8试剂盒检测重组CFP10-ESAT6对细胞活性的影响;使用重组CFP10-ESAT6和减毒牛分支杆菌BCG处理细胞并设置相应组别,提取细胞总RNA和总蛋白,利用qRT-PCR技术、Western-blot及ELISA方法分别从转录和翻译水平检测A549细胞中TLR信号途径关键分子及其下游炎症因子的表达变化。结果显示,成功获得高纯度的重组CFP10-ESAT6,并且重组CFP10-ESAT6在一定浓度范围和处理时间条件下能够降低A549细胞的存活率。当BCG或重组CFP10-ESAT6单独处理A549细胞时,细胞中TLR2、TLR4、My D88、TRAF6和NF-κB p65及下游炎症因子IL-6和TNF-α的表达水平显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)上调,重组CFP10-ESAT6与BCG共处理时,重组CFP10-ESAT6显著(P<0.05)降低了由BCG刺激所导致的TLR途径关键分子TLR2、TLR4、My D88、TRAF6、NF-κB p65、IL-6及TNF-α等炎症因子的表达水平。上述结果表明,重组CFP10-ESAT6可以减轻A549细胞在抗Mtb感染过程中由TLR信号介导的炎症因子的分泌,这将为进一步加深理解结核病发病机制提供理论依据。
- 刘占有徐兆坤王健宏李武
- 关键词：结核分支杆菌肺泡上皮细胞
- 结核分枝杆菌Ag85A和Ag85B基因真核共表达载体的构建与表达(英文)
- 2013年
- 目的 Ag85A和Ag85B是结核分枝杆菌的主要优势保护抗原,为提高编码Ag85A和Ag85BDNA疫苗的免疫性和免疫效果,特构建真核共表达Ag85A和Ag85B抗原的真核表达载体pcDNA-Ag85A-IRES-Ag85B,并利用293T细胞其表达进行检测。方法 PCR扩增Ag85A和Ag85B基因,逐步将Ag85A和Ag85B基因定向插入至质粒pcDNA3.1(+)克隆位点CMV启动子与加A信号BGH poly(A)之间,并将Ag85A和Ag85B基因以内部核糖体进入位点(internal riboome entry site,IRES)序列连接,酶切和测序验证后将重组质粒转染至293T细胞中进行真核表达,48h后提取细胞总蛋白,达产物经SDS-PAGE分离和Western blot分析。结果限制性内切酶酶切及测序结果表明,重组质粒pcDNA-Ag85ARES-Ag85B基因序列和阅读框架正确。将重组质粒转入293T细胞后,利用Ag85A和Ag85B特异性抗体Western blot检测实两种抗原可在同一载体中各自独立表达。结论成功构建了能够同时独立表达结核分枝杆菌Ag85A和Ag85B抗原基的真核表达载体pcDNA-Ag85A-IRES-Ag85B,为下一步研究它们的免疫原性和免疫效果奠定了基础。
- 李武邓光存刘晓明王玉炯
- 关键词：结核分枝杆菌AG85AAG85B共表达WESTERNBLOT
- 结合地方特色的微生物学案例教学被引量：4
- 2018年
- 微生物学是现代生物学重要的基础学科,微生物学课堂教学模式的创新与改革对培养生命科学创新人才具有重要作用。案例教学是激发学生学习兴趣,提高学生学习主动性的有效措施。微生物学案例教学中案例来源可以多样化,采用具有地方特色、发生在学生身边的案例更能激发学生的学习兴趣。根据不同的案例类型和教学目的,微生物学案例教学可以分为提出问题、发现问题和解决问题3种教学组织形式。案例教学不仅能促进课堂教学的开放与互动,对学生的价值引导也具有重要的作用。
- 苏建宇邓光存赵辉李武王玉炯
- 关键词：微生物学案例教学教学组织形式
