权美玉
- 作品数：2 被引量：5H指数：1
- 供职机构：中山大学药学院微生物与生化制药实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 抗Nodal单克隆抗体的制备及夹心ELISA试剂盒的研制被引量：1
- 2012年
- 利用Nodal成熟肽为抗原免疫小鼠,取其脾脏B淋巴细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,经间接ELISA法、融合细胞有限稀释法克隆筛选出阳性单克隆杂交瘤细胞株,接种至小鼠腹腔,培养后抽取腹水并用饱和硫酸铵沉淀法初步纯化,从而获得抗Nodal单克隆抗体。该单克隆抗体经特异性验证实验后,与Nodal的多克隆抗体兔血清一道分别作为夹心ELISA检测试剂盒的上下层抗体使用,建立了以Nodal为抗原的夹心ELISA试剂盒的检测方法,并进行了对肿瘤细胞提取物、肿瘤小鼠血清的检测。该研究为该试剂盒在肿瘤诊断方面的应用奠定了基础。
- 严力韬张帆王昊权美玉杜军
- 关键词：NODAL单克隆抗体ELISA试剂盒
- 稳定高表达和干扰Nodal基因黑色素瘤细胞株构建及EMT表型鉴定被引量：4
- 2014年
- 目的:构建稳定过表达及稳定干扰Nodal的黑色素瘤细胞B16细胞株,并鉴定其EMT表型,用于研究Nodal诱导黑色素瘤EMT的现象及机理。方法:将过表达小鼠Nodal基因的质粒pL-tdTomatomNodal,及携带有干扰Nodal基因序列的shRNA质粒pGFP-V-RS-Nodal,分别转染B16细胞。通过抗性筛选富集,阳性克隆挑选及扩大培养,获得稳定转染细胞株B16/dT-mNodal及B16/sh-Nodal。通过实时荧光定量PCR和Western blot技术检测胞内Nodal的过表达及敲除情况和EMT标记物的表达情况。结果:两株细胞均构建成功,B16/dT-mNodal细胞株发出强烈红色荧光,胞内Nodal水平上调明显,并呈现间质细胞特性;B16/sh-Nodal细胞株发出强烈绿色荧光,胞内Nodal水平下调明显,并呈现上皮细胞特性。结论:成功构建稳定过表达Nodal及稳定干扰Nodal的B16细胞株,并构建Nodal影响B16细胞EMT过程的模型,为研究Nodal在黑色素瘤EMT过程中的作用提供了重要的实验工具。
- 权美玉郭强张坤水方瑞李翠琳杜军
- 关键词：NODAL黑色素瘤基因沉默EMT
