朱慧萌
- 作品数：4 被引量：19H指数：3
- 供职机构：东北农业大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：黑龙江省科技攻关计划哈尔滨市科技创新人才研究专项资金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 高效可溶性重组蛋白表达载体的构建被引量：10
- 2010年
- 本研究构建了两种高效表达可溶性重组蛋白的原核表达载体。一种载体由HisSUMO序列与pET30a(+)载体连接而成(命名为HisSUMO Express),表达的融合蛋白用Ni-NTA纯化,用SUMO蛋白酶I切割后可获得不留任何残基的重组蛋白。SUMO-蛋白酶I价格较贵,为减少表达蛋白的成本,第二种载体即在His-SUMO和目的序列之间加入羟胺切割位点(命名为HisSUMO Economic)。在HisSUMO Economic中表达的融合蛋白用Ni-NTA纯化,羟胺液切割后可获得仅留一个甘氨酸残基的重组蛋白。以在常规表达载体中难以表达的鼠源成纤维细胞生长因子-21(mFGF-21)为例,经葡萄糖消耗实验检测其活性,验证两种表达载体的效果。结果表明mFGF-21在两种载体中均获得了高效表达,融合蛋白占菌体总蛋白的40%以上,Ni-NTA纯化后的融合蛋白分别利用羟胺切割液和SUMO蛋白酶I切割,纯化的mFGF-21成熟蛋白回收量约为54mg/L,回收率约为6%。经两种载体表达后的mFGF-21蛋白均具有生物学活性,可促进脂肪细胞消耗葡萄糖,为进一步研究提供了基础。
- 姜媛媛刘铭瑶任桂萍朱慧萌李德山
- 关键词：高效表达载体
- SUMO融合系统表达人白细胞介素17及其活性的研究被引量：3
- 2010年
- 目的:克隆、表达和纯化人白细胞介素17(hIL-17),并对其生物学活性进行研究。方法:采用RT-PCR的方法从活化的人T细胞中克隆获得hIL-17cDNA。构建了含羟胺切割位点的重组载体pHisSUMO-hIL-17,导入宿主菌Rosetta中,经IPTG诱导后得到表达。用Ni-NTA琼脂糖颗粒层析纯化融合蛋白,经羟胺切割,复性,通过Western blot实验进行确认,并从核酸水平和蛋白水平鉴定其活性。结果:克隆表达出了hIL-17,利用Ni-NTA琼脂糖颗粒层析纯化得到的纯品蛋白经体外活性实验表明,该蛋白具有刺激3T3-L1细胞和HeLa细胞分泌IL-6、IL-8、G-CSF的作用。结论:制备了具有生物学活性的成熟hIL-17蛋白,为进一步研究该分子在疾病中的作用奠定了基础。
- 朱慧萌谷学佳任桂萍孙阳彭中宜徐彤李德山
- 关键词：纯化活性试验
- 应用抗体工程技术研发治疗类风湿性关节炎创新药物的研究
- 李德山任桂萍李璐王文飞朱慧萌吴云舟高华山徐黎明李晋南
- 《应用抗体工程技术研发治疗类风湿性关节炎创新药物的研究》项目(编号：2006RFXXS002)成功建立了基因工程抗体研发的关键技术平台，如抗体基因的克隆、单链抗体和Fab抗体基因文库的构建、细菌和酵母展示技术的建立、鼠抗...
- 关键词：
- 关键词：类风湿性关节炎治疗基因工程抗体药物
- 白细胞介素17及其家族被引量：6
- 2009年
- 人白细胞介素17(hIL-17)是一种炎症前因子,因能诱导产生炎症介质,从而与许多疾病密切相关。文章就IL-17的分子结构、生物学功能及其家族成员加以综述。
- 朱慧萌李德山
- 关键词：炎症因子家族成员
