曹国栋
- 作品数：9 被引量：31H指数：4
- 供职机构：北京医科大学人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 转导野生型p53基因提高K562细胞对紫外线诱导的细胞凋亡的敏感性被引量：4
- 1998年
- 目的：观察野生型ｐ５３基因转染的Ｋ５６２细胞对紫外线诱导其细胞凋亡的影响。方法：应用基因转染技术将重组野生型ｐ５３的逆转录病毒载体转导ｐ５３蛋白缺失的Ｋ５６２细胞，用紫外线照射Ｋ５６２ｐ５３细胞不同时间后再培养不同时间，用ＤＮＡ片段化和细胞ＤＮＡ原位末端标记技术检测细胞凋亡情况。结果：紫外线照射Ｋ５６２ｎｅｏ和Ｋ５６２ｐ５３细胞８分钟后再培养７～１２小时，Ｋ５６２ｎｅｏ和Ｋ５６２ｐ５３两组细胞的凋亡差异显著。结论：野生型Ｐ５３蛋白在Ｋ５６２细胞表达后，能加速紫外线诱导的Ｋ５６２细胞凋亡。
- 陈德喜王申五曹国栋马丽萍潘秀英
- 关键词：细胞凋亡P53基因紫外线K562细胞
- BCL—2蛋白不能抑制VP16诱导的乳腺癌细胞(Bcap37)凋亡被引量：4
- 1999年
- 目的 为了解BCL—2在Bcap37细胞表达增高能否抑制足叶乙甙诱导的细胞凋亡,把重组的逆转录表达载体pLXSN—bcl—2和pLXSN—neo转染Bcap37细胞,经G418筛选获得表达细胞(Bcap37—bcl—2,Bcap37—neo)。方法 经RT—PCR和Western blotting检测bcl—2基因的表达,并用不同浓度的VP16处理两种细胞16小时,经细胞形态观察、细胞凋亡原位显示、MTT实验检测细胞的凋亡变化。结果 两种细胞的凋亡变化没有显著差异。结论 BCL—2高表达不能阻滞VP16诱导的Bcap37细胞凋亡,这与我们以前所做的关于BCL—2能阻滞VP16诱导的K562细胞凋亡作用相反,推测BCL—2的抗凋亡作用可能和细胞类型有关,可能还有其它因素参与BCL—2对细胞凋亡的调节。
- 陈德喜马丽萍曹国栋王申五
- 关键词：VP16乳腺癌
- 逆转录病毒介导的反义bcl-2序列促进足叶乙甙诱导的白血病细胞凋亡被引量：15
- 1998年
- 目的：探讨逆转录病毒介导的反义ｂｃｌ２序列对细胞凋亡的诱导作用。方法：ＰＡ３１７细胞包装逆转录病毒，病毒转导Ｊｕｒｋａｔ细胞后用ＲＴＰＣＲ及Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法检测ｂｃｌ２ｍＲＮＡ及蛋白表达水平；用流式细胞仪计数及ＤＮＡ电泳检测细胞凋亡。结果：转染反义ｂｃｌ２序列可使内源性ＢＣＬ２蛋白表达下降，提高白血病细胞株对足叶乙甙（Ｖｐ１６）的敏感性，促进细胞凋亡。结论：反义ｂｃｌ２序列能促进Ｖｐ１６诱导的白血病细胞凋亡，为ｂｃｌ２反义技术治疗白血病的临床应用提供了实验依据。
- 曹国栋王申五陈德喜马丽萍潘秀英林文玉
- 关键词：逆转录病毒细胞凋亡反义DNA白血病
- 介绍一种PCR鉴定重组体DNA插入方向及转染的方法被引量：3
- 1998年
- 介绍一种用ＰＣＲ方法鉴定重组体中插入片段的正、反连接方向及其是否导入细胞的方法．其原理是选择紧靠载体克隆位点上游的一段序列为上游引物，以扩增插入序列的上、下游引物分别作为下游引物进行ＰＣＲ．载体上游引物加插入序列的上游引物可扩出产物者为反向连接；加插入序列的下游引物可扩出产物者为正向连接．该法简单、快速，可广泛用于鉴定重组体中插入片段的正、反连接方向及基因转染时外源基因是否导入细胞内．
- 曹国栋王申五陈德喜
- 关键词：转染PCR
- 转导野生型p53的K562细胞出现生长抑制和凋亡被引量：6
- 1998年
- 把重组有编码野生型p53的逆转录病毒载体转导到p53蛋白缺失的K562细胞,以观察野生型p53蛋白在K562细胞表达后对K562细胞增殖和凋亡的影响。应用RT-PCR和Western印迹杂交方法检测K562细胞p53表达,应用流式细胞仪计数检测细胞的增殖,采用梯形DNA和细胞形态学方法检测细胞凋亡变化。研究结果表明:感染pLXSN-p53病毒24小时后,K562细胞p53表达阳性,K562-p53细胞的生长受到抑制,少数细胞进入凋亡状态。结论提示,野生型p53可促进p53表达阴性的K562细胞生长抑制与凋亡。
- 陈德喜王申五曹国栋马丽萍潘秀英
- 关键词：K562细胞P53基因PLXSN
- 逆转录病毒载体介导的bcl-2反义RNA促进胃癌MGC-803细胞凋亡
- 1999年
- ｂｃｌ－２是Ｔｓｕｊｉｍｏｔｏ在Ⅱ型Ｂ细胞淋巴瘤中发现的一种基因，其过度表达能抑制撤退生长因子、射线、热休克、化疗药物、病毒及促凋亡基因等多种因素诱导的细胞凋亡。ｂｃｌ－２蛋白高表达赋予肿瘤细胞对多种化疗药物的抗性，导致化疗失败或复发。逆转ｂｃｌ－２的表达可能提高化疗效果。我们将ｂｃｌ－２的编码序列反向插入逆转录病毒表达载体中并转导实体瘤胃癌细胞株ＭＧＣ～８０３，观察ｂｃｌ－２反义序列对实体瘤肿瘤细胞的作用。１方法 重组体的构建、包装及转导：ｂｃｌ－２ ｃＤＮＡ全长 １．９ ｋｂ（由王洛权博士提供），插入逆转录病毒表达载体ｐＬＸＳＮ中，ＰＣＲ法鉴定ｂｃｌ－２的插入方向。
- 曹国栋王申五武莎莎马丽萍潘秀英
- 关键词：MGC-803细胞凋亡BCL-2反义RNA
- 幽门螺杆菌染色体DNA片段的分子克隆
- 1998年
- 目的幽门螺杆菌（Helichacterpylori,Hp）与慢性胃炎、消化性溃疡有关．构建含HP染色体DNA片段克隆做为阳性对照，在基础研究和临床检测中都有一定意义．方法用PCR扩增Hp染色体片段，克隆至BluescriptSK＋载体中．用IMR及DNA测序进行鉴定．结果用PCR可扩出203hp的Hp特异带，DNA测序证实序列完全正确，表明克隆成功．
- 潘秀英林文玉王申五曹国栋刘勇
- 关键词：分子克隆染色体
- 反义bcl-2-正义bcl-Xs逆转录病毒重组体的构建
- 1998年
- 构建一种反义抗细胞凋亡基因-正义促细胞凋亡基因相连结的新型表达质粒,以探讨其对细胞凋亡的影响。用分子克隆方法,成功地构建了反义bcl-2-正义bcl-Xs逆转录病毒重组体,初步结果显示此重组体比反义bcl-2或正义bcl-Xs逆转录病毒重组体具有更强的促细胞凋亡作用。该新型表达质粒的构建为探讨细胞凋亡提供了新工具,新思路。
- 曹国栋王申五陈德喜
- 关键词：逆转录病毒载体
- 逆转录病毒介导p16基因转移引起K562白血病细胞系的增殖抑制被引量：1
- 2000年
- 武莎莎曹国栋陈德喜潘秀英王申五
- 关键词：肿瘤抑制基因P16逆转录病毒白血病细胞系
