徐荣燕
- 作品数：5 被引量：17H指数：2
- 供职机构：山东农业大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 嗜热真菌糖苷酶的基因克隆、表达与分子改造
- 纤维素是地球上最丰富的碳水化合物，可被纤维素酶降解转化成为葡萄糖，对于人类社会解决能源危机、食物短缺和环境污染具有重大的现实意义。传统上采用化学方法控制纤维素降解难度大、成本高，对环境污染严重，而纤维素的生物降解有效克服...
- 徐荣燕
- 关键词：嗜热真菌糖苷酶基因克隆分子改造
- 嗜热子囊菌光孢变种内切葡聚糖酶I基因在毕赤酵母中的表达及部分酶学性质被引量：2
- 2009年
- 嗜热子囊菌是一种嗜热真菌,可以产生具有很高工业价值的内切葡聚糖酶.本研究成功表达了嗜热子囊菌内切葡聚糖酶Ⅰ基因,并获得热稳定的重组内切葡聚糖酶.提取嗜热子囊菌光孢变种(Thermoascus aurantiacus var.levisporus)总RNA,通过RT-PCR方法克隆出内切-β-葡聚糖酶eg1基因的成熟肽编码序列.采用基因重组的方法构建该基因的巴斯德毕赤酵母Pichia pastoris分泌型表达载体pPIC9K-eg1,经线性化后采用电穿孔法将其导入毕赤酵母GS115中,大量筛选后获得高效表达内切葡聚糖酶Ⅰ的毕赤酵母工程菌株GpN24.该菌株采用甲醇诱导120h后,内切葡聚糖酶Ⅰ的活力可达570.7U/mL,最适温度为55℃,在90℃的条件下保温30min后仍具有60%的酶活力;最适pH为5.0,在pH3.0～5.0的条件下酶活力保持稳定.
- 张亚波刘连盟徐荣燕李多川
- 关键词：纤维素酶内切葡聚糖酶嗜热子囊菌光孢变种嗜热真菌毕赤酵母
- 表达嗜热毛壳菌bgl基因的毕赤酵母工程菌株
- 本发明是一种表达嗜热毛壳菌Chaetomium thermophilum热稳定β-葡萄糖苷酶基因bgl的毕赤酵母工程菌Pichia pastoris GS-BGL。通过RT-PCR及RACE方法从嗜热毛壳菌C.therm...
- 李多川徐荣燕滕芳超李安娜
- 文献传递
- 链格孢ATMT转化体系的构建及弱毒突变株验证被引量：9
- 2009年
- 本文利用来自质粒pUCATPH的构巢曲霉色氨酸合成基因trpC的启动子(PtrpC)、终止子(TtrpC)和潮霉素磷酸转移酶抗性基因(hph)以及植物表达载体pROKⅡ成功构建了适用于丝状真菌的根癌农杆菌介导转化的双元载体pROKIIHPH,并转化根癌农杆菌Agrobacterium tumefaciens LBA4404,建立了根癌农杆菌LBA4404介导的链格孢Alternaria alternata分生孢子转化体系;再从乙酰丁香酮(AS)浓度、不同的共培养时间、受体菌分生孢子浓度和农杆菌菌液浓度对A. alternata转化效率的影响对体系进行优化。结果确定了根癌农杆菌菌液体积为200mL(OD600=0.15),A. alternata分生孢子浓度为106个/mL,在A. tumefaciens的预培养时期以及与A. alternata共培养时期分别加入200μmo1/LAS,共培养时间48h,转化率达120～200个/105分生孢子。在所筛选的约800个转化子中获得了1株毒性明显低于野生菌sd1的弱毒突变株t108,通过PCR验证推测其毒力降低可能由于T-DNA插入阻断了基因的表达。该实验结果为与突变相关基因的研究以及弱毒株t108的进一步研究和利用提供了实验材料,也为深入研究链格孢sd1菌株的基因功能奠定了基础。
- 徐后娟徐荣燕李多川
- 关键词：链格孢根癌农杆菌双元载体
