张育坚
- 作品数:9 被引量:17H指数:2
- 供职机构:中国科学院上海生命科学研究院更多>>
- 相关领域:生物学医药卫生更多>>
- 重组活性羧肽酶B在胰岛素原C肽制备工艺中的应用
- 用RT-PCR方法克隆了大鼠羧肽酶原B的cDNA编码序列,将其重组到原核表达质粒pT7-473中,并在大肠杆菌中可以包涵体方式获得高表达,SDS-PAGE电泳及灰度扫描显示表达量达菌体总蛋白的35﹪,表达产物融合了表达质...
- 李素霞张育坚田丽萍刘海峰张晓彦夏文超龚毅袁勤生
- 关键词:羧肽酶原B羧肽酶B分离纯化基因工程
- 文献传递
- 肿瘤细胞靶向性白细胞介素4(IL-4)融合蛋白的研究(英文)被引量:1
- 2004年
- 白细胞介素 4受体 (IL 4R)特异地存在于多种肿瘤细胞表面 ,这为某些肿瘤的治疗提供了一个靶向标记。在以前的研究中 ,人白细胞介素 4 (hIL 4 )与白喉毒素 (DT)的融合蛋白 (DT4H)被构建 ,且它对某些肿瘤细胞系的高毒性得到了证明。但是 ,由于毒素部分的强免疫原性 ,它可以诱导人体的免疫反应。该研究中我们构建了白细胞介素 4与绿脓杆菌外毒素 (PE) 2 5 3~ 6 0 8aa的融合蛋白 ,并在其N端添加了 6×His标记方便纯化 ,在其C端添加了KDEL提高毒性。为了改善与IL 4R的亲和力我们将IL 4进行了环式重组 ,构建的融合毒素 ,H4 0 4K ,经DEAE$CSepharoseFastFlow及Ni NTA纯化后 ,纯度达 90 %。纯化后的H4 0 4K与DT4H相似 ,对U2 5 1高度敏感 ,对MCF 7及HepG2中度敏感 ,且我们首次证实该毒性不会被兔抗白喉毒素的多克隆抗体所抑制。这些研究表明 ,H4 0
- 张育坚胡小波李素霞田丽萍杨胜利龚毅
- 关键词:绿脓杆菌外毒素肿瘤治疗白细胞介素4白细胞介素4受体
- 重组活性羧肽酶B的克隆表达及复性研究
- 羧肽酶B(carboxypeptidaseB,CPB,EC3.4.17.2)是一种含锌的胰外肽酶,特异的水解肽链C端的碱性氨基酸:精氨酸,赖氨酸或鸟氨酸,CPB含307个氨基酸,分子质量35ku。
本文研究,天...
- 李素霞张育坚夏文超龚毅袁勤生
- 关键词:羧肽酶B克隆表达
- 文献传递
- 重组活性羧肽酶B的克隆表达及复性研究
- 羧肽酶B(carboxypeptidase B,CPB,EC 3.4.17.2)是一种含锌的胰外肽酶,特异的水解肽链C端的碱性氨基酸:精氨酸,赖氨酸或鸟氨酸,CPB含307个氨基酸,分子质量35ku.天然存在的CPB是由...
- 李素霞张育坚夏文超龚毅袁勤生
- 关键词:克隆表达蛋白水解酶基因克隆表达
- 文献传递
- 胰岛素、地塞米松、肿瘤坏死因子α能调节脂联素的表达和分泌被引量:6
- 2005年
- 目的通过体外培养的3T3-L1脂肪细胞模型,研究胰岛素、地塞米松和肿瘤坏死因子α(TNFα)对脂肪细胞因子脂联素(Acrp30)的mRNA表达和蛋白分泌的影响。方法用150nmol/L胰岛素、100nmol/L地塞米松和10ng/ml TNFα刺激分化完全的3T3-L1细胞16h,提取细胞RNA,运用半定量RT-PCR技术检测Acrp30mRNA表达量的变化;另外,用同样浓度的胰岛素、地塞米松和TNFα刺激分化完全的3T3-L1细胞1、2、4、16h,用Western印迹技术检测Acrp30分泌的变化。结果胰岛素、地塞米松和TNFα均能下调Acrp30mRNA的表达;地塞米松和TNFα减少Acrp30的蛋白分泌;而胰岛素仅能瞬时刺激Acrp30的蛋白分泌,作用时间超过4h对Acrp30的分泌并无影响。结论血浆脂联素蛋白浓度在翻译后水平被调节,包括翻译和(或)分泌水平。
- 胡小波张育坚陈霞沈雁杨胜利龚毅
- 关键词:胰岛素地塞米松分泌脂联素肿瘤坏死因子Α3T3-L1细胞
- 人胰岛素原C肽的表达、纯化及其细胞活性研究被引量:2
- 2004年
- 近年来研究发现人胰岛素原C肽 (简称C肽 )有多种生物活性 ,在治疗糖尿病的并发症中有潜在的应用价值。在前期研究中 ,完成了多拷贝串联C肽基因的构建和融合表达 ,在原核中获得了高表达。用发酵的方法大规模表达融合蛋白C肽 (FCP) ,由Ni NTA柱亲和纯化获得的蛋白经胰蛋白酶和羧肽酶B的酶解及RP HPLC分离获得了纯度超过 95 %的C肽单体。细胞活性研究显示它对U2 5 1、2
- 田丽平张育坚李素霞杨胜利龚毅
- 关键词:C肽糖尿病
- 肿瘤细胞特异性IL-4靶向融合蛋白的研究
- 基因工程技术的革命使得人类能充分的改造蛋白,使其更好的为人类服务.在该研究中我们将环形重组的IL-4(cpIL-4)与缺失天然结合区的白喉毒素(DT389)融合构建了靶向毒素DT4H,为了方便纯化,我们在其末端融合了Hi...
- 张育坚
- 关键词:IL-4白喉毒素绿脓杆菌外毒素UPA肿瘤靶向治疗
- 文献传递