张玲
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
- 供职机构：安徽安科生物工程(集团)股份有限公司更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 突变人干扰素-α2b基因5′端提高其在大肠杆菌中的表达被引量：1
- 2010年
- 目的对人干扰素-α2b(hIFN-α2b)基因的5′端进行突变,构建重组人干扰素-α2b(rhIFN-α2b)原核高表达工程菌,以提高rhIFN-α2b的表达水平。方法依据大肠杆菌密码子偏好性,在不改变hIFN-α2b的氨基酸序列的情况下,定点突变hIFN-α2b基因5′端序列并PCR扩增出rhIFN-α2b′,克隆至温控型表达载体pJW2,转化大肠杆菌DH5α,筛选阳性重组子,温度诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE、Western blot鉴定分析并以WISH-VSV系统检测其抗病毒活性。结果SDS-PAGE分析表明rhIFN-α2b表达量约占菌体总蛋白20.6%,Western blot表明rhIFN-α2b具有与hIFN-α2b相同的免疫原性,WISH细胞-VSV病毒系统证实其比活性达1.2×108IU/mg,与未突变工程菌一致。结论突变hIFN-α2b基因5′端可以提高其表达水平,并成功构建出rhIFN-α2b原核高表达工程菌。
- 王参军邹文艺张玲范清林宋礼华
- 关键词：突变干扰素-Α2B基因表达大肠杆菌
- 人血管内皮生长因子受体-Fc在DG44细胞中的表达及其生物活性
- 2013年
- 目的在中国仓鼠卵巢细胞DG44中表达人血管内皮生长因子受体(vascular endothelial growth factor receptor,VEGFR)-Fc,并检测其生物活性。方法化学合成人VEGFR1的第2免疫球蛋白结构域(VEGFR1D2)基因和人VEGFR2的第3免疫球蛋白结构域(VEGFR2D3)基因,通过重叠PCR(Overlap PCR)将VEGFR1D2-VEGFR2D3和人IgG1Fc拼接形成VEGFR-Fc融合基因,插入真核表达载体pD2中,构建重组表达质粒pD2-VEGFR-Fc,在FreeStyleTMMAX Reagent和OptiPROTMSFM介导下转染至DG44细胞中,MTX加压筛选稳定表达VEGFR-Fc蛋白的细胞株,SDS-PAGE、Western blot和ELISA法检测细胞培养上清中VEGFR-Fc蛋白的表达。表达的VEGFR-Fc蛋白经HiTrapTMProteinA FF柱纯化后,利用显微镜观察法和血管内皮细胞ECV304模型检测其生物活性。结果 VEGFR-Fc基因扩增产物大小为1 377 bp;重组表达质粒pD2-VEGFR-Fc经双酶切和测序证明构建正确;质粒pD2-VEGFR-Fc转染的DG44细胞培养上清中含VEGFR-Fc蛋白,表达量为0.5 g/L;细胞培养上清经HiTrapTMProteinA FF柱纯化后,杂蛋白去除效果较好;纯化的VEGFR-Fc能与VEGF特异性结合,抑制ECV304生长。结论成功在DG44细胞中表达了具有生物活性的VEGFR-Fc,为进一步研究其在抑制血管生成和抗肿瘤中的作用奠定了基础。
- 胡伟伟范清林尼钢钢张玲黄辉宋礼华
- 关键词：血管内皮生长因子受体FC段中国仓鼠卵巢细胞生物活性
- hTNFRII-Fc融合基因的克隆及在CHO细胞中的表达被引量：2
- 2010年
- 构建人肿瘤坏死因子受体II胞外区(TNFRII)和人免疫球蛋白(IgG1)Fc段的融合基因真核表达载体,并在中国仓鼠卵巢细胞(CHO)中表达融合蛋白hTNFRII-Fc。用全合成重叠延伸PCR方法克隆TNFRII胞外区的基因片段,再与(IgG1)Fc段拼接起来形成hTNFRII-Fc融合基因,经HindIII、EcoRI双酶切后插入至pEE14中构建pEE14-TNFRII-Fc真核表达载体,脂质体转染至CHO细胞中进行表达及鉴定。ELISA检测到转染hTNFRII-Fc基因的CHO细胞培养上清中含有hTNFRII-Fc蛋白,SDS-PAGE与Western-blot鉴定证实其为hTNFRII-Fc蛋白,为进一步研究该融合蛋白在CHO细胞稳定表达及应用于类风湿关节炎等自身免疫性疾病临床治疗奠定了一定的研究基础。
- 张玲范清林王参军邹文艺宋礼华
- 关键词：真核表达类风湿关节炎
