尚杨杨
- 作品数：3 被引量：13H指数：2
- 供职机构：第三军医大学西南医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
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- Ascl2转录调控人结肠癌上皮细胞内CDX2基因表达的研究被引量：1
- 2014年
- 目的探讨Ascl2对人结肠癌上皮细胞中CDX2基因的转录调控作用。方法预测CDX2启动子的转录因子结合位点,构建包含8个不同长度的CDX2近端启动子的荧光素酶报告基因质粒,分别命名为pGL3-CDX2-C1-8;将各质粒分别转染到shRNA-Ascl2/LS174T和shRNA-Ctr/LS174T细胞中,检测细胞中的双荧光素酶活性。采用染色质免疫共沉淀(ChIP)技术,用Ascl2抗体免疫沉淀与CDX2启动子区DNA片段相结合的Ascl2,PCR扩增CDX2启动子的特异性序列。结果转录因子数据库预测到CDX2近端启动子区含多个E-box结合位点和潜在的Nkx-2、GATA-1、CdxA、Sox-5、SRY等顺式作用元件。双酶切及测序结果证实pGL3-CDX2-C1-8重组质粒插入片段序列均正确。重组质粒在shRNAAscl2/LS174T细胞中的荧光素酶活性明显高于shRNA-Ctr/LS174T细胞(P<0.01)。随着CDX2启动子片段的缩短,荧光素酶活性呈升高趋势。ChIP实验证实在CDX2近端启动子存在与Ascl2相结合的片段,在shRNA-Ascl2/LS174T细胞中,Ascl2与CDX2启动子区域中-841^-646、-291^-134、-7^+138片段结合的DNA片段明显少于对照shRNA-Ctr/LS174T细胞。结论 Ascl2在结肠癌上皮细胞中可能通过与CDX2近端启动子的直接结合而达到转录阻遏CDX2基因表达的目的。
- 钟小莉尚杨杨潘琼李姗姗刘韵叶钧宋丽丽赵晶京彭志红汪荣泉
- 关键词：荧光素酶报告基因
- 结直肠癌及缺氧的结直肠癌细胞中HIF-1α与miRNA-200b表达的相关性被引量：10
- 2016年
- 目的探讨缺氧诱导因子HIF-1α与miRNA-200b在结直肠癌及缺氧的结直肠癌细胞中的表达以及两者的相关性。方法采用实时定量PCR检测50例结直肠癌患者的结直肠癌组织及其癌旁组织中HIF-1α与miRNA-200b的表达。利用Co Cl_2构建结肠癌细胞系的缺氧诱导模型,通过实时定量PCR和Western blot分别测定缺氧的Caco-2细胞中HIF-1α和miRNA-200b基因表达并确立两者相关性。结果 HIF-1α在癌组织中的表达显著高于癌旁组织（P〈0.01）,miRNA-200b在癌组织中的表达显著低于癌旁组织（P〈0.01）,且HIF-1α和miRNA-200b在癌组织中的表达呈负相关（r=-0.324,P〈0.05）。缺氧处理2 h后,HIF-1α表达升高,miRNA-200b表达降低;随着缺氧时间延长（4~12 h）HIF-1α表达逐渐降低,miRNA-200b的表达缓慢上升;缺氧16 h,HIF-1α的表达回升且达到另一个高峰,miRNA-200b的表达降至最低。Real-time PCR和Western blot联合检测发现,HIF-1α和miRNA-200b表达呈相反的趋势。结论 HIF-1α可能通过抑制miRNA-200b的表达从而参与结直肠癌上皮细胞EMT的过程。
- 郭靖尚杨杨汪荣泉
- 关键词：结肠癌HIF-1ΑEMT
- 结肠癌组织miR-200c／141定量表达的临床病理学意义被引量：2
- 2015年
- 目的探讨结肠癌组织mi R-200c/141定量表达与患者临床病理学特征之间的联系。方法实时定量PCR检测49例结肠癌患者癌组织和癌旁组织中的mi R-200c/141的表达水平。分析mi R-200c/141表达量、联合mi R-200c和mi R-141表达量与患者临床病理学特征之间的关系,以及mi R-200c/141表达量在判断患者术后1年预后中的意义。结果结肠癌组织中mi R-200c/141表达水平较癌旁组织明显降低(P=0.0002,P=0.0058)。mi R-141表达量与肿瘤大小和淋巴结转移呈负相关(P<0.05),有淋巴结转移或临床Ⅲ-Ⅳ期患者结肠癌组织中mi R-141的表达量明显低于没有淋巴结转移或临床Ⅰ-Ⅱ期患者癌组织的表达量(P=0.035,P=0.042)。mi R-200c/141表达量与肿瘤大小之间明显相关(P<0.05)。mi R-200c/141的表达量与患者术后1年的生存率无相关关系(P>0.05)。结论结肠癌组织中表达下调的mi R-200c/141与肿瘤大小、淋巴结转移、临床分期有关。
- 孟令宽钟小莉潘琼叶钧尚杨杨郭靖汪荣泉
- 关键词：结肠肿瘤病理学微RNAS
