孙边成
- 作品数：45 被引量：119H指数：6
- 供职机构：长沙市疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：长沙市科技计划项目湖南省医药卫生科研计划课题湖南省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学理学生物学更多>>
- 10种食源性疾病病原体高通量LAMP分子鉴别检测体系的建立及应用被引量：3
- 2011年
- 目的建立一种LAMP分子鉴别检测体系,应用于10种食源性疾病病原体的分子鉴别检测。方法针对8种细菌（沙门菌属、志贺菌属、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌、EHEC O157：H7、奇异变形杆菌、霍乱弧菌和单增李斯特菌）和2种病毒（Norwalk病毒和轮状病毒）分别建立LAMP和RT-LAMP方法,分别对25种常见肠道细菌和病毒进行LAMP扩增,水浴箱内65℃扩增60 min（LAMP）或120 min（RT-LAMP）,扩增完成后利用电泳和肉眼进行结果判断。对365份食源性疾病患者呕吐物、肛拭子和食品等标本进行10种食源性疾病病原体LAMP分子检测。结果 10种食源性疾病病原体LAMP或RT-LAMP方法均只对靶病原体出现阳性结果,电泳显示为LAMP特异性梯状条带,加SYBRGreen I后肉眼观察反应液变为绿色;8种细菌性病原体LAMP检测方法的敏感度为3×100~1.2×102cfu/ml,其中6种LAMP方法敏感度高于PCR方法,其他病原体（霍乱弧菌、EHEC O157：H7、Norwalk病毒和轮状病毒）敏感度与PCR方法相同。从365份标本中检出沙门菌属11份、志贺菌属6份、金黄色葡萄球菌13份、EHEC O157：H7 2份、副溶血性弧菌2份、单增李斯特菌2份、Norwalk病毒12份和轮状病毒7份。结论建立了一个较为完整的LAMP分子鉴别检测体系,可以在一台水浴箱内同时对10种食源性疾病病原体进行高通量的分子鉴别检测,具有快速、不需要特殊仪器和肉眼判断结果的优势,适合基层单位的实验室开展食源性疾病的分子鉴别诊断。
- 孙边成张如胜宋克云欧新华姚栋苏良叶文陈法明
- 关键词：食源性疾病病原体环介导等温扩增高通量
- 猪链球菌长沙分离株的鉴定与16S rRNA系统进化分析被引量：3
- 2013年
- 目的对2株猪链球菌(Streptococcus suis,SS)长沙分离株进行分离培养和分子鉴定,并对其16SrRNA基因进行测序,阐明其系统进化关系。方法利用分离培养法对2株SS进行分离鉴定,同时对分离株16SrRNA基因进行PCR扩增和核苷酸序列测定,将测序结果提交GenBank,通过在线Blast同源性分析进行菌株鉴定,并与传统培养鉴定方法进行比较,利用Mega4.0软件构建SS长沙分离株系统进化树。结果成功扩增出2株菌的目的片段,通过测序后Blast同源性分析,证实2株菌株均为SS,且与传统鉴定方法结果一致,进化树显示长沙2株SS和国内外2型位于同一进化分支上,同四川的05ZYH33参考株亲缘关系最近。结论通过16SrRNA基因可以准确快速鉴定SS,可应用于应急检测,长沙2株猪链球菌属于SS2型,与其他SS2分离株16SrRNA基因同源性高,未发生变异。
- 苏良欧新华杨柳青张如胜刘如春陈田木李亚曼孙边成
- 关键词：猪链球菌RRNA进化分析
- 流感、禽流感及肠道病毒的分子检测及进化分析
- 张如胜孙边成陈静芳欧新华姚栋黄政叶
- 该项目自2009年起，先后对季节性流感病毒（甲型H1N1流感、B型流感)、禽流感病毒（H5N1、H7N9、H9N2）和新型肠道病毒(CV-A16、CV-A10)等开展了分子检测及进化分析研究，在国内外率先建立了甲型H1N...
- 关键词：
- 关键词：禽流感病毒
- 活禽市场为人H9N2亚型禽流感感染来源的研究
- 目的 探讨人H9N2亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)的感染来源,为人感染H9N2亚型AIV疫情防控提供依据.方法 对2014～2015年长沙市活禽市场环境开展AIV核酸监测,收集全球人...
- 张如胜黄政刘晓蕾姚栋陈静芳袁洁欧新华孙边成
- 关键词：新发传染病H9N2禽流感病毒活禽市场
- 紫锥菊植物提取物中乙醇与乙酸乙酯溶剂残留量的测定被引量：1
- 2009年
- 目的建立顶空气相色谱法测定紫锥菊提取物中乙醇与乙酸乙酯残留量的测定方法。方法以SPB-5(30m×0.32mm×0.25μm)为色谱柱,FID检测器结合顶空进样器进行气相色谱分析。结果在优化条件下,方法的线性较好,样品的加标回收率在98%～100%之间,相对标准偏差小于5%。结论本方法可以快速、准确的测定紫锥菊提取物中的乙醇与乙酸乙酯的残留量。
- 孙边成严付华张艳
- 关键词：气相色谱法乙醇乙酸乙酯
- 2014年长沙市活禽市场污水中H5N1亚型禽流感病毒HA、NA及NS基因进化分析被引量：4
- 2017年
- 目的分析2014年长沙市活禽市场污水中H5N1亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)血凝素(Hemagglutinin,HA)、神经氨酸酶(Neuraminidase,NA)及非结构蛋白(Non-structural,NS)基因进化特征。方法从2014年长沙市活禽市场采集501份环境标本,利用Real-time PCR方法进行A型、H5、H7和H9亚型流感病毒核酸检测,并对单一H5阳性标本进行核苷酸测序,病毒HA、NA和NS基因测序结果进行在线BLAST分析,利用Mega5和Bioedit软件构建核苷酸进化树和氨基酸(Amino acids,aa)比对。结果从501份环境标本中检出A型H5亚型病毒阳性标本177份(检出率35.33%),其中8份标本经核苷酸测序鉴定为H5N1亚型病毒,进化分析表明大部分H5N1病毒HA基因位于2.3.2分支内,聚集形成一个新亚分支,NA及NS基因位于2.3.2.1b亚分支。HA蛋白受体结合位点aa为QSG,表现为禽流感病毒受体特征;NA蛋白未出现H275Y及N295Saa替换,对神经氨酸酶抑制剂敏感;HA、NA及NS蛋白关键分子位点表现为高致病性的分子特征。结论 2014年长沙市活禽市场污水中H5N1亚型禽流感病毒HA、NA和NS基因表现为高致病性的分子特征,但不具有对人易感的受体特征,需要进一步监测。
- 张如胜孙边成姚栋叶文陈静芳黄政刘晓蕾欧新华陈发明
- 关键词：活禽市场禽流感病毒H5N1亚型基因
- HPLC法测定对羟基苯甲酸甲(丙)酯、阿斯巴甜被引量：6
- 2006年
- 目的 同时测定液态食品和可溶性固态食品中的对羟基苯甲酸甲（丙）酯、阿斯巴甜的含量。方法 高效液相色谱法。结果 样品加标回收率为91％～104．3％，RSD〈3％。结论 该法操作简单、方便，令人满意。
- 孙边成张艳吴昊
- 关键词：高效液相色谱法阿斯巴甜食品
- 水溶性人工合成色素的聚苯胺分散相固相萃取被引量：4
- 2017年
- 目的通过化学氧化法制备聚苯胺,并将其作为分散相固相萃取的吸附材料,用于实际样品中水溶性人工色素的提取。方法采用化学氧化法制备聚苯胺,优化仪器参数和提取反应条件后,将聚苯胺用于人工合成色素胭脂红、苋菜红、柠檬黄和日落黄的提取,同时应用于实际饮料样品中人工合成色素的检测。结果水溶性人工合成色素标准品提取前后对比图以及高效液相色谱图均显示出该提取法对4种水溶性人工合成色素具有极好的提取效率,可以基本实现完全提取,方法用于复杂基体样品的检测时同样具有良好的提取效率。结论新提取方法对水溶性人工色素萃取效率高,抗干扰能力强,同时还具有操作简单、成本低廉和环境友好等优点,具有良好的应用前景。
- 胡骢严付华汪琼孙边成
- 关键词：聚苯胺
- 长沙市家禽市场环境中H5N1亚型禽流感病毒传播风险研究被引量：7
- 2012年
- 目的对长沙市家禽市场职业暴露人群进行禽流感病毒（AIv）H5N1亚型抗体水平和环境AIV核酸检测，并对环境中AIVH5N1亚型的血凝素（HA）基因进行测序分析。方法抽取长沙市1个区和1个县，各选择2个城区或乡镇家禽市场进行职业暴露人群H5N1抗体和环境AIV核酸检测。利用单放射免疫扩散溶血实验（SRH）对102份家禽市场职业暴露人员血清标本进行H5N1抗体检测，real-time PCR方法检测160份家禽市场环境标本（污水、禽类粪便、羽毛和禽类笼具表面涂抹标本）AIV核酸，对4份污水H5N1亚型AIV核酸阳性标本进行HA基因RT-PCR扩增和TA克隆测序，测序结果利用Lasergene和Mega5．0软件进行氨基酸比对和进化树构建。结果AIVH5N1抗体监测结果显示，家禽市场职业暴露人群血清H5N1抗体阳性率为25．5％（26／102），其中乡镇和城区家禽市场职业暴露人群阳性率分别为50．0％（9／18）和25．4％（17／67），乡镇家禽市场职业暴露人群阳性率高于城区。长沙市家禽市场环境中H5亚型AIV核酸阳性率为3113％（50／160），其中乡镇家禽市场阳性率为37．3％（31／83），高于城区家禽市场24．7％（19／77）；不同标本H5亚型AIV核酸阳性率不同：污水（50．0％，24／48）、羽毛（44．5％，4／9）、禽类粪便（29．8％，14／47）和禽类笼具表面涂抹（14．3％，8／56）；差异均有统计学意义（P〈0．01）。TA克隆测序得到4个AIV H5N1亚型HA基因序列，进化树显示4个AIV H5N1亚型HA基因与中国内地和香港禽来源的AIV分离株为同一分组，属于欧亚分支；4个AIVH5N1亚型HA基因受体结合位点氨基酸序列仍然为禽源（QSG）、HA1和HA2蛋白之间连接肽为多个碱性氨基酸序列（RERRRKK或RERRGKK），与人源AIV H5N1亚型具有相同的受体结合位点和高致病性的分子特征。结论长沙市家禽市场环境中存在较多数量的AIV H5N1亚型，是�
- 张如胜欧新华宋克云袁洁陈田木肖姗孙边成
- 关键词：禽流感病毒
- 长沙市家禽市场污水来源H9N2亚型禽流感病毒NS基因进化分析被引量：1
- 2013年
- 目的对长沙市家禽市场污水来源的H9N2亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)的非结构蛋白(Non-structural,NS)基因进行进化和分子特征分析,探讨其传播风险。方法从家禽市场收集1份H9N2AIV样本(C09055049)进行NS基因PCR扩增和TA克隆测序,测序结果利用Lasergene和Mega5软件进行氨基酸比对和进化树构建。结果序列分析表明,NS基因核苷酸序列全长890bp,分别编码NS1(217个氨基酸)和NS2(121个氨基酸)两个蛋白,进化树显示本研究中的NS基因属于A等位基因群的A/Chicken/Shanghai/F/1998-like,起源于国内最早的分离株A/Chicken/Beijing/1/94;NS基因与进化树不同分支代表株氨基酸比对显示,NS1与A/Chicken/Shanghai/F/98同源性最高(96.3%),NS2与A/Chicken/Beijing/1/1994和A/Chicken/Shanghai/F/1998同源性最高(96.7%)。H9N2AIV的NS1蛋白第92位D氨基酸,且NS1蛋白C-端缺失13个氨基酸,表现为低致病性的分子特征。结论家禽市场污水来源的H9N2AIV的NS1蛋白缺乏高致病性及感染人的分子特征,传播至人的风险较小。
- 张如胜欧新华宋克云陈田木刘如春孙边成
- 关键词：禽流感病毒H9N2亚型NS基因进化分析
