孙强
- 作品数：43 被引量：98H指数：7
- 供职机构：第四军医大学西京医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学自动化与计算机技术更多>>
- PTEN在肝癌中表达缺失的意义及其体外转染对人肝癌细胞系的作用被引量：3
- 2005年
- 目的探讨PTEN表达与肝细胞癌发生、发展的关系,观察体外转染外源性PTEN对肝癌细胞的生长、细胞周期和超微结构的影响。方法检测PTEN在肝癌组织和肝癌细胞系中的表达缺失情况,以观察该基因与肝癌病理分级、转移和预后的关系。将含PTEN的反转录病毒载体及空载体转入人肝癌细胞系HHCC,观察转染前后细胞的生长、超微结构、细胞周期及裸鼠致瘤能力改变情况。结果肝癌中PTEN表达缺失率为30.16%(19/63),显著高于正常肝组织0(0/8)和肝硬化组织7.15%(1/14)。随着恶性程度的增高,PTEN表达缺失率随之增加。PTEN表达缺失与转移及预后显著相关。PTEN在人肝癌细胞系hHCC中也不表达。将抑癌基因PTEN转入后,hH-CC细胞生长明显受到抑制,细胞超微结构失去部分恶性表型特征,细胞周期由G1→S0期受抑制,并出现凋亡峰,体外成瘤能力下降。结论抑癌基因PTEN失表达多见于肝细胞肝癌进展期,并与肝细胞肝癌分化程度、是否转移以及临床预后相关;体外PTEN的转入可以明显地抑制HHCC生长、体外成瘤能力。
- 王廷厶贝军易军李小军王岭孙强
- 关键词：PTEN基因肝细胞肝癌基因转染
- 融合His标签的HCV包膜糖蛋白E2的真核表达及意义被引量：1
- 2004年
- 目的 构建HCV包膜糖蛋白E2与His标签融合的真核表达载体并在CHO细胞中表达 ,为研究HCV包膜糖蛋白的功能奠定基础。方法 利用PCR技术从HCV基因组序列中扩增出编码HCV包膜糖蛋白E2的基因 ,将其插入原核表达载体pET2 8(a)载体中 ,构建pET2 8(a) HCVE2 ,从pET2 8(a) HCVE2上获得His HCVE2融合基因 ,插入pcDNA3 1,构建表达HCV包膜糖蛋白E2与His标签融合蛋白的真核表达载体pcDNA3 1 His E2。用脂质体介导法将pcDNA3 1 His E2转染CHO细胞 ,通过间接免疫荧光、Westernblot检测融合蛋白在CHO细胞内的表达。结果 转染HCVE2与His融合基因的真核表达载体的CHO细胞内有融合蛋白的表达。结论 与His标签融合的HCV包膜糖蛋白E2能够在CHO细胞内表达。
- 杜德伟贾战生秦鸿雁孙强刘秋平聂青和周永兴韩骅
- 关键词：融合基因真核表达
- 带有蛋白转导结构域的Bcr/Abl癌蛋白片段的表达及其跨膜转运被引量：10
- 2001年
- HIV 1编码的反式激活蛋白TAT具有将细胞外蛋白转导进入细胞的基序 ,称为蛋白转导结构域 (PTD) .为研究PTD介导的PTD Bcr Abl融合蛋白的跨膜转运 ,合成了编码PTD的基因片段 ,并与PCR扩增的慢性粒细胞白血病癌蛋白bcr abl基因片段融合 .在大肠杆菌中表达纯化了融合蛋白 ,将纯化的融合蛋白加入培养的HL60细胞和C2C12细胞后 ,发现PTD基序可以介导Bcr Abl蛋白自由从细胞外跨膜转导进入细胞内 .研究结果可能为用外源蛋白负载 (loading)免疫活性细胞如抗原提呈细胞提供新的途径 .
- 梁英民孙强蒋姗姗陈萍王冀姝李荣周鹏王键黄红艳韩骅
- 关键词：蛋白转导结构域BCR/ABL慢性粒细胞白血病癌蛋白
- LIM结构域蛋白KyoT基因剔除小鼠的建立和表型分析被引量：2
- 2001年
- KyoT为一LIM结构域蛋白,可与转录因子RBP-Jk相互作用而调节其转录活性.构建了KyoT基因剔除载体,转染小鼠胚胎干细胞(ES细胞)后得到同源重组的ES细胞克隆.将此ES细胞注射入小鼠的囊胚泡得到嵌合小鼠,再经小鼠培育得到KyoT基因被剔除的小鼠.纯合子KyoT基因剔除小鼠不能表达有功能的KyoT蛋白.表型分析表明纯合子KyoT基因剔除小鼠腹腔B1B细胞数增加,提示KyoT可能参与B淋巴细胞的发育.
- 韩骅王冀姝李荣牛利国孙强周鹏
- 关键词：基因剔除B淋巴细胞转录因子DNA结合蛋白
- 小鼠Notch1胞外段高抗原区编码基因的克隆与表达
- 2002年
- 目的 :克隆小鼠Notch1胞外段高抗原区编码基因 ,并进行原核表达及蛋白纯化 ,为制备mNotch1的单克隆抗体做准备。方法 :计算机分析小鼠Notch1全长 ,PCR扩增其胞外段高抗原区编码基因 ,克隆入载体T -vector进行序列测定 ,然后将测定正确的片段连入GST融合表达载体pGEX - 4T - 1,得到pG -NEF ,转化宿主菌DH5α ,经IPTG诱导 ,SDS -PAGE分析 ,以及新生条带表达形式分析以后 ,用GST亲和层析柱纯化。结果 :小鼠Notch1分子胞外段近膜处约 170个氨基酸区域抗原性较高 ,PCR扩增得到大小约 5 0 0bp的特异性片段 ,序列测定结果与文献报导的完全一致 ;原核表达产物大小约Mr 43× 10 3 ,以包涵体形式存在 ,约占总蛋白的2 5 % ,纯化后目的蛋白含量 >95 %。结论 :成功地进行了小鼠Notch1胞外段高抗原区编码基因的基因克隆、原核表达及蛋白纯化。
- 黄红艳柳天平孙强张蓉陈萍周鹏王冀姝李荣韩骅
- 关键词：NOTCH1基因克隆原核表达蛋白纯化
- 腭裂相关基因MCPR1在大肠杆菌中的融合表达及抗体制备被引量：3
- 2004年
- 目的 :MCPR1是我室利用消减杂交技术克隆出来的新基因 ,本研究利用融合蛋白制备MCPR1的多克隆抗体。方法 :采用多聚酶链式反应 (PCR)扩增出MCPR1基因蛋白编码序列 ,进一步将该基因片段克隆到中间载体pGEX -T -easy ,再酶切得到MCPR1片段定向克隆到 pGEX -4T -1载体中 ,构建融合表达载体pGEX -4T-MCPR1,在大肠杆菌中用IPTG进行诱导表达 ,得到GST -MCPR1融合蛋白 ,进行初步纯化及SDS -PAGE电泳 ,直接割胶 ,将其作为抗原免疫兔子。结果 :成功构建融合表达载体pGEX -4T -MCPR1,得到初步纯化的GST-MCPR1融合蛋白 ,免疫兔子 1个月后 ,获得免疫血清 ,初步纯化得到多克隆抗体。Western印迹分析表明所得到的抗体具有较强的特异性 ,ELISA分析证实其效价为 10 6。结论 :MCPR1多克隆抗体的获得性为在蛋白水平研究新MCPR1的功能提供了实验基础 ,后续实验可以利用免疫分析技术研究MCPR1蛋白与其它蛋白质的相互作用 ,从而为阐明MCPR1在胚胎发育及腭裂形成中所发挥的作用提供实验手段。
- 轩东英金岩金明轩昆孙强胡世颉
- 关键词：原核表达融合蛋白多克隆抗体
- 亚油酸刺激胰岛β细胞胞浆游离钙水平升高的机制
- 2010年
- 为明确亚油酸影响胰岛β细胞的胞浆游离钙水平([Ca2+]i)的作用和机制,本研究运用胶原酶灌注消化法原代培养大鼠胰岛细胞,使用钙离子荧光指示剂Fluo-3负载细胞后在共聚焦显微镜下观察Fluo-3荧光强度以反映[Ca2+]i变化,灌流给药观察亚油酸等药物的作用,记录结束后采用免疫细胞化学染色方法鉴定β细胞。结果显示,亚油酸(20μmol/L)刺激β细胞[Ca2+]i升高,表现为最初的峰型升高和随后的较为持久的平台期升高。平台期升高可被去除细胞外液中Ca2+所阻断,也可被瞬时受体电位(transient receptor potential,TRP)通道的阻断剂La3+所抑制,峰型升高和平台期升高均被耗竭细胞内钙库的Ca2+或者抑制磷脂酶C活性所阻断。结果表明,亚油酸通过刺激β细胞内钙库的Ca2+释放和激活TRP通道,导致[Ca2+]i升高。
- 王莉付荣国刘晓丹桂保松孙强陈晨赵玉峰董蕾
- 关键词：亚油酸胰岛Β细胞
- 人转化生长因子β1质粒真核表达载体的构建与鉴定
- 2003年
- 目的构建并鉴定人转化生长因子β1(TGF-β1)基因真核表达栽体。方法设计含XbaI和XhoI酶切住点的TGF-β1cDNA引物，采用RT-PCR法，扩增TGF-β1cDNA片段，纯化PCR产物，XbaI和XhoI双酶切并连接至pcDNA3。转化感受态大肠杆菌DH5α。酶切鉴定阳性重组子，并进行序列测定。结果琼脂糖凝胶电泳显示，用XbaI和XhoI双酶切后可形成两条带，分子量分别为1．2kb和5．38kb。符合物理图谱，表明栽体成功构建，并且测序结果与预期结果完全一致。结论成功构建了人TGF-β1基因真核表达栽体。
- 储庆吴织芬孙强何海丽刘玲侠
- 关键词：TGF-Β1基因真核表达载体质粒DH5ΑDNA引物重组子
- PTD-bcr/abl融合癌蛋白片段的表达及其跨膜转运被引量：12
- 2001年
- 目的探讨蛋白转导结构域(PTD)介导的转导bcr/abl癌蛋白片段的方法，为进行免疫治疗提供实验依据。方法合成编码PTD的基因片段，并与PCR扩增的慢性粒细胞白血病癌蛋白bcr/abl基因片段融合,在大肠杆菌中表达。将纯化的融合蛋白PTD-bcr/abl与HL-60 细胞共孵育，用Western blot分析融合蛋白的跨膜转运。结果PTD基序可介导bcr/abl蛋白由细胞外跨膜转导进入细胞内。结论这一结果可能为应用外源蛋白负载(loading)抗原提呈细胞(APC)提供新的途径。
- 梁英民孙强蒋姗姗陈萍王冀姝刘利韩骅
- 关键词：蛋白转导BCR/ABL慢性粒细胞白血病基因表达
- 蛋白转导结构域-bcr/abl融合基因的构建和表达被引量：11
- 2002年
- 目的 构建含蛋白转导结构域 (PTD)与慢性粒细胞白血病 (CML)bcr/abl融合基因片段的质粒 ,并在大肠杆菌中表达。方法 PCR扩增的CMLbcr/abl基因片段 ,经DNA测序后 ,与合成编码PTD的DNA片段一起插入质粒pET 16b ,构建表达载体pEPb ,转化大肠杆菌并进行了PTD bcr/abl蛋白的诱导表达和纯化。结果 跨越bcr/abl断裂点的 5 2 3bp的目的片段被有效地扩增。DNA序列分析表明所构建的含PTD bcr/abl融合基因的质粒与设计相同。PTD bcr/abl融合蛋白在转化大肠杆菌获得了高效表达并纯化。结论 成功地获得了PTD bcr/abl融合蛋白片段的基因表达产物 。
- 梁英民孙强蒋姗姗王冀姝吴绒丽陈萍刘利韩骅
- 关键词：BCR/ABL融合基因白血病慢性基因表达大肠杆菌
