孙余婕
- 作品数：23 被引量：72H指数：5
- 供职机构：安徽医科大学附属省立医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金安徽省自然科学基金安徽省人才开发资金资助项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 实时荧光PCR技术检测乙型肝炎病毒YMDD变异和乙型肝炎病毒基因型方法的建立及应用
- 实时荧光定量PCR/(real-time quantitative PCR/)是近年来兴起的、已经成为分子生物学重要技术之一。实时荧光定量PCR是指在PCR体系中加入荧光基团,利用荧光信号累积实时监测整个PCR过程,最后...
- 孙余婕
- 关键词：聚合酶链反应拉米夫定
- 文献传递
- BLMmRNA在白血病细胞中的表达及其临床意义被引量：4
- 2012年
- 目的分析BLM基因在白血病骨髓细胞中的表达情况及其临床意义。方法收集2011年1月至12月安徽省立医院血液科住院和门诊随访的125例白血病患者骨髓标本为研究对象。其中包括59例慢性粒细胞白血病（CML），66例急性白血病（AL）。对照组为5例门诊非恶性血液病患者的骨髓标本，其中女性3例，男性2例，年龄在15岁至53岁。采用半定量逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）法检测了已通过细胞形态学和免疫分型检查骨髓细胞中BLMmRNA的表达情况，按患者年龄、性别、所患白血病类型、外周血白细胞计数情况、有无肝脾肿大、融合基因表达情况、染色体核型、是否初诊以及是否移植进行分组。回顾性分析BLM基因在各分组中的表达情况以及与以上各因素的相关性。采用，检验、单因素方差分析、t检验以及Pearson相关性检验进行统计学分析。结果BLM基因在各型白血病中均有表达。125例白血病患者骨髓标本中，BLM基因阳性表达71例，阴性表达54例，5例非恶性血液病患者的骨髓标本中均不表达。白血病患者骨髓细胞内BLM基因的表达在不同白细胞计数分组问以及融合基因分组间，差异有统计意义（矿值分别为14．730和22．399，P均〈0．05）。经治疗后的白血病患者BLM基因的表达水平（0．1788±0．1091）低于初诊（0．3276±0．2016）白血病患者，差异有统计学意义（t=3．937，P〈0．05）；移植后的患者BLM基因表达水平（0．1271±0．1009）低于未经过移植（0．2902±0．2034）的患者，差异具有统计学意义（t=2．061，P〈0．05）。Pearson相关性分析显示白血病骨髓细胞中BLM基因的表达与融合基因呈正相关（r=0．357，P〈0．01），并且与染色体核型呈正相关（r=0．279，P〈0．05）。结论BLM基因表达水平的测定可作为判断白血病患者病情严重程度和预后的指标，检测其水平可能为临
- 张永娟何晓东孙余婕张白银黄蓉嵇金陵沈佐君
- 关键词：白血病骨髓细胞逆转录聚合酶链反应
- 实时荧光定量聚合酶链反应动态监测慢性粒细胞白血病治疗后微小残留病的研究
- 2012年
- 目的建立慢性粒细胞白血病（CML）实时荧光定量聚合酶链反应（RQ—PCR）检测方法，并研究应用此方法检测CML治疗后微小残留病（MRD）的意义。方法应用RQ．PCR对80例CML患者初诊时和（或）治疗后的骨髓标本进行分析，检测bcr-abl融合基因的转录水平，回顾性分析临床资料，根据治疗方案不同分为异基因造血干细胞移植组（34例）、甲磺酸伊马替尼组（33例）、羟基脲组（13例），监测CML患者治疗前后bcr—abl融合基因变化。结果初诊CML患者bcr—abl阳性平均值为6847．67拷贝／万个细胞，加速期平均值为306176．08拷贝／万个细胞；异基因造血干细胞移植组移植后1个月平均值为944．33拷贝／万个细胞，移植后6个月平均值2．37拷贝／万个细胞，移植后12个月平均值0．29拷贝／万个细胞，移植后24个月检测不到bcr-abl融合基因；甲磺酸伊马替尼组服用3个月后平均值3720．23拷贝／万个细胞，服用12个月〈0．10拷贝／万个细胞；羟基脲组用药0个月平均值7290．1l拷贝／万个细胞，服用9个月后平均值3143．24拷贝／万个细胞。异基因造血干细胞移植组、甲磺酸伊马替尼组相同时间bcr-abl水平差异无统计学意义（t=1．74，P=0．17），羟基脲组与前两组间比较差异有统计学意义（t=3．74，P=0．01；t=2．97，P=0．02）。疾病进展时可检测到bcr—abl转录水平的上升；加速期患者的转录本水平明显高于慢性期患者。结论RQ—PCR作为CML治疗后MRD检测的方法，可以评价治疗效果，预测疾病复发，指导早期进行干预治疗。
- 霍菲菲刘欣孙自敏朱薇波孙余婕郑昌成吴竞生蔡晓燕韩永胜杨会志
- 关键词：微小残留病实时定量聚合酶链反应
- CML患者TGF-β1 mRNA与bcr/abl^(P210)融合基因转录本表达的关系被引量：2
- 2016年
- 目的通过分析慢性粒细胞白血病(CML)患者转化生长因子-β1(TGF-β1)mRNA与bcr/abl^(P210)融合基因转录本(简称bcr/abl^(P210))的表达水平,探讨两者在CML发病过程中可能的作用。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测73例CML患者外周血和骨髓中TGF-β1 mRNA及bcr/abl^(P210)的表达水平,以22名健康体检者作为正常对照组。TGF-β1 mRNA与bcr/abl^(P210)的相关性采用Pearson相关分析。结果 CML患者骨髓和外周血样本中TGF-β1 mRNA、bcr/abl^(P210)的表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。正常对照组外周血中TGF-β1 mRNA的表达水平明显高于CML患者骨髓中TGF-β1 mRNA的表达水平(P<0.05),正常对照组TGF-β1 mRNA的表达水平是CML组的11.39倍。相关性分析显示CML患者TGF-β1 mRNA与bcr/abl^(P210)呈正相关(r=0.53,P<0.01)。结论骨髓TGF-β1 mRNA有可能作为一种新的CML诊疗指标。
- 许大兵孙余婕沈佐君
- 关键词：融合基因转录本
- 叶酰聚谷氨酸合成酶基因在甲氨蝶呤对映体获得性耐药A549细胞株中的表达差异被引量：3
- 2011年
- 目的研究不同甲氨蝶呤（MTX）对映体耐药与叶酰聚谷氨酸合成酶（FPGS）基因水平表达的关系。方法用大剂量冲击递增结合低剂量持续诱导法诱导获得两组含不同构型15～55μmoL／L浓度的MTX对映体[L-（＋）-MTX和D-（-）-MTX]耐药的细胞系，细胞为人源非小细胞性肺癌A549细胞，用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测各细胞系的耐药指数；用实时荧光定量聚合酶链反应（RFQ—PCR）方法检测这两组各细胞系中胞质型FPGS（cFPGS）和线粒体型FPGS（mFPGS）基因的相对含量。结果D-（-）-MTX耐药细胞组耐药指数高于L-（＋）-MTX耐药细胞组（32．7±9．3比11．54-2．9，P〈0．05），L-（＋）-MTX／A549细胞系耐药指数均在5～15之间，为中度耐药，而D-（-）-MTX／A549细胞系耐药指数均〉15，为高度耐药。在D-（-）-MTX和L-（＋）-MTX两组耐药细胞系中，mFPGS表达水平仅在MTX为15μmol／L时差异无统计学意义，在MTX其他各浓度点两组间差异均有统计学意义（25μmol／L：2．3±0．9比1．3±0．7，35μmoL／L：2．6±0．3比1．1±0．9，45μmol／L：1．4±0．8比1．0±1．0，55μmoL／L；1．0±0．2比0．2±0．1均P〈0．05）；cFPGS表达水平在MTX为15μmol／L时两组间差异也同样无统计学意义，在25～55μmol／L浓度区间内D-（-）-MTX／A549细胞系的cFPGS表达与耐药指数呈现高度负相关（r=-0．95，P〈0．05）。结论在A549细胞中MTX对映体初次剂量15μmol／L冲击法诱导获得的对映体耐药与再次接受更大剂量（t〉25μmol／L）MTX诱导获得耐药的机制不同，D-（-）-MTX／A549耐药细胞系表现为更高的耐药性，提示临床使用MTX时应考虑该药物存在手性对映体问题。
- 周红艳何晓东孙余婕凡任芝孙利沈佐君
- 关键词：甲氨蝶呤对映体
- 实时荧光PCR监测HBV感染患者拉米夫定治疗病毒YMDD变异被引量：9
- 2007年
- 目的 建立一种快速准确的实时荧光PCR方法检测HBV感染患者经拉米夫定治疗后YMDD变异情况。方法 首先用PCR法筛选HBVDNA阳性血清157例，HBVDNA含量为2．0×10^3-8．0×10^8拷贝／ml，HBVDNA阴性血清30例，然后采用TaqMan探针技术和选择性引物的实时荧光PCR对其进行YMDD变异检测。通过变异株和对照管的循环阈值（cyclethreshold，Ct值）差来计算血清中总HBV中的YMDD变异株含量，并用PCR产物直接测序方法随机对69例HBVDNA阳性标本RT区进行基因序列分析，验证所建立方法的准确性。结果 187例接受拉米夫定治疗患者血清标本中，发生YMDD变异88例，其中YIDD变异39例，YVDD变异38例，YIDD与YVDD混合变异11例。突变株的含量为10％～100％。30例HBVDNA阴性血清的C管循环40次，69例测序结果显示68例两种方法检测结果完全相同，符合率为98．55％。结论 采用选择性引物和TaqMan探针技术建立实时荧光PCR方法能快速准确地检测YMDD变异情况，并能检测患者变异株在HBV总量中的比例，为临床使用拉米夫定治疗乙型肝炎病毒感染监测耐药性提供一种有效方法。
- 孙余婕沈佐君吴赟高人焘李宜杨志军
- 关键词：乙型拉米夫定
- 乙型肝炎病毒基因型的国内研究进展被引量：11
- 2010年
- 乙型肝炎病毒基因型分布有地理差异,并与肝病的发生、发展,以及抗病毒药物的疗效,都有一定的相关性。对近年来国内乙型肝炎病毒基因型的有关研究作一综述。
- 吴赟孙余婕沈佐君
- 关键词：HBV突变
- 利用新型免疫磁珠富集原理检测肺癌患者外周血循环肿瘤细胞被引量：5
- 2013年
- 目的建立一种新型免疫磁珠方法，检测肺癌患者外周血中循环肿瘤细胞（CTCs）。方法实验探索性研究。选择经手术切除组织病理确诊为非小细胞肺癌的42例初治患者，其中I期7例、Ⅱ期9例、Ⅲ期16例、Ⅳ期10例，健康志愿者20名。将不同数量（50、100、200、500、1000个）的肺癌细胞株（A549）混入2ml健康成人血标本中以模拟肿瘤患者的血样，对该血样进行红细胞裂解和离心，沉淀所得细胞与经过免疫磁珠标记的上皮细胞黏附分子（EpCAM）的抗体反应，然后经一套自制的检测装置对细胞进行富集和分离，与磁标记的EpCAM抗体反应后的上皮细胞因为磁力的作用被集中在一张玻片上，最后用经典的HE染色鉴定循环肿瘤细胞并计数。计算肿瘤细胞的回收率验证该方法的敏感性，同时检测20名健康志愿者血标本验证该方法的特异性。用上述方法检测42例肺癌患者的CTCs，将检测到的结果根据患者的临床特征进行分组，以卡方检验分析CTCs的检出率与患者的年龄、性别、临床分期、肿瘤大小等临床特征的相关性，同时以直线相关法研究掺入细胞数与回收细胞数的相关性。结果掺人肿瘤细胞回收试验的回收率在68％～82％之间，掺入细胞间回归方程为Y=0．6419X＋8．8875，回收的细胞与添加细胞间数量有显著的相关性（相关系数尺。=0．9916，P〈0．05）。42例肺癌患者中有18例（42．9％）CTCs阳性，其中，I期CTCs检出率为0，II期CTCs检出率为11．1％，Ⅲ期CTCs检出率为62．5％，IV期CTCs检出率为70％。CTCs检测的阳性率与患者的年龄、性别、肿瘤大小均无明显关系（P〉0．05），而与临床分期（TNM）有密切关系（P〈0．05）。特异性检测结果为20名健康志愿者外周血标本均未检测到CTCs。结论新型免疫磁珠富集技术可以有效分离和鉴定肺癌患者外周血中的循环肿瘤细胞，有�
- 嵇金陵何晓东索美芳张培黄蓉孙余婕沈佐君
- 关键词：肿瘤循环细胞免疫磁化分离肿瘤细胞黏附分子
- 甲氨蝶呤对映体诱导的肺癌A549耐药细胞株中VEGF及其受体表达差异的研究被引量：10
- 2009年
- 目的:通过探讨甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)对映体耐药细胞中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth fac-tor,VEGF)及其受体表达的差异,以反映MTX对映体耐药细胞在肿瘤中血管形成能力的不同。方法:采用实时荧光定量PCR(real-time fluorogentic quantitative PCR,RFQ-PCR)技术分别检测D-(-)-MTX/A549组、L-(+)-MTX/A549组以及亲本细胞组中VEGF、血管内皮生长因子受体(vascular endothelial growth factor receptor,VEGFR)-1和VEGFR-2mRNA的表达水平;皮下接种裸鼠,成瘤后取瘤体切片,行CD34免疫组织化学检测,新生微血管密度(microvessel density,MVD)计数;采用双层软琼脂克隆形成实验检测D-(-)-MTX/A549组、L-(+)-MTX/A549组细胞的克隆形成率。结果:RFQ-PCR检测结果显示,D-(-)-MTX/A549组VEGF、VEGFR-1和VEGFR-2Ct值/β-actinCt值分别为1.668±0.127、1.872±0.133和1.919±0.107,L-(+)-MTX/A549组的比值分别为2.035±0.185、2.221±0.157和2.255±0.140,亲本细胞组的比值为2.057±0.123、2.291±0.138和2.354±0.131;3种细胞植入裸鼠成瘤后切片免疫标记CD34统计MVD显示亲本细胞为3.29±1.11,L-(+)-MTX/A549细胞为8.00±2.14,D-(-)-MTX/A549细胞为57.88±13.87;软琼脂实验检测克隆形成率发现D-(-)-MTX/A549组为(0.625±0.088)%,L-(+)-MTX/A549组为(1.050±0.095)%,亲本细胞组为(1.250±0.248)%。研究结果显示D-(-)-MTX/A549组和L-(+)-MTX/A549组以及亲本细胞组之间差异均有统计学意义(P<0.05),而L-(+)-MTX/A549组与亲本细胞组之间则差异无统计学意义(P>0.05)。结论:D-(-)-MTX诱导肺腺癌A549耐药细胞在肿瘤血管形成上的能力大于L-(+)-MTX诱导的细胞。
- 董林何晓东陶绍能孙余婕李明沈佐君
- 关键词：甲氨蝶呤
- 氨甲蝶呤对映体获得性耐药A549细胞株二氢叶酸还原酶基因表达分析被引量：5
- 2011年
- 目的研究氨甲蝶呤(MTX)对映体[L-(+)-MTX和D-(-)-MTX]耐药与二氢叶酸还原酶(DHFR)基因表达的关系。方法用浓度递增结合低剂量持续诱导法获得A549细胞对不同构型及不同浓度的MTX对映体的耐药细胞株,荧光定量PCR检测耐药细胞株中DHFR基因的相对含量。结果对两种不同对映体的获得性耐药存在差异,D型耐药细胞耐药指数高于L型;对映体各浓度耐药细胞间耐药指数也有差异。15μmol/L L型、D型MTX首次诱导耐药细胞的DHFR相对含量低于亲本细胞,对该浓度对映体耐药的各细胞组间没有差别(P>0.05)。35～45μmol/L浓度耐药细胞的DHFR相对含量增加,45μmol/L D型耐药细胞DHFR相对含量高于对应浓度L型耐药细胞,差异有显著性(P<0.05)。结论首次诱导MTX耐药以抑制DHFR基因为主。DHFR基因表达具有手性差异。DHFR基因的检测有望作为肿瘤治疗监测的指标。
- 李道静何晓东孙余婕凡任芝许维东孙利张永娟张白银沈佐君
- 关键词：二氢叶酸还原酶氨甲蝶呤对映体耐药
