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蓝舌病病毒反向遗传操作系统的建立: 蓝舌病(Bluetongue,BT)是由蓝舌病病毒(Bluetongue Virus,BTV)引起,媒介昆虫(如库蠓等)传播的一种反刍动物急热性疾病,被世界动物卫生组织(OIE)列为法定通报性疾病,在我国被列为一类动物疫...; 杨涛徐青元孙恩成李俊平冯瑜菲孙亮孙晶吴东来

蓝舌病病毒反向遗传操作系统的建立被引量：3: 2014年; 为建立蓝舌病病毒(BTV)的反向遗传操作系统,本研究构建了分别表达血清1型BTV SZ97/1株VP1、VP3、VP4、VP6、VP7、NS1和NS2蛋白的7个真核表达质粒,同时又构建了含有SZ97/1株BTV的全部10个基因节段的T7聚合酶体外转录重组质粒。并利用T7 RNA聚合酶对酶切线性化的10个体外转录质粒进行体外转录,制备BTV全部10个基因的体外转录RNA。将已构建的7个真核表达质粒和体外转录获得的RNA产物依次共转染BHK-21细胞,拯救出含有分子标记的BTV。本研究首次在我国建立了BTV的反向遗传操作系统,为我国深入开展该病毒致病机理、传播机制、基因组功能的研究以及新型疫苗的研发奠定了基础。; 杨涛徐青元孙恩成冯瑜菲李俊平孙亮孙晶吴东来; 关键词：蓝舌病蓝舌病病毒反向遗传学

链球菌毒性噬菌体的分离与生物学特性研究被引量：1: 2021年; 本研究以牛源链球菌48株为宿主,经双层琼脂平板反复纯化从污水中分离到毒性噬菌体SP48。透射电镜观察发现,SP48属于长尾噬菌体科;酶切分析表明,SP48的基因组大于60 kb,可被限制性核酸内切酶Eco R I、Xho l I和Bln I切开。对乙醚、氯仿不敏感,对40~45℃或pH 5~10的环境有很好的耐受性;最佳感染复数为10,潜伏期约30 min,爆发期约80 min,平均爆发量为45 PFU/cell。; 徐凤宇邱子怡孙亮孙亮马红霞高云航; 关键词：链球菌生物学特性

西尼罗病毒NS1与E基因重组腺病毒的构建及免疫原性研究被引量：1: 2014年; 为构建串联表达西尼罗病毒(WNV)NS1和E基因的重组腺病毒,本研究利用口蹄疫病毒具有自我切割功能的2A蛋白的编码序列将NS1和E基因串联,构建穿梭载体p Shuttle-WNV-NS1-2A-E,通过细菌内同源重组获得重组腺病毒DNA,经脂质体转染AD293细胞,在细胞内完成病毒粒子的组装制备重组腺病毒。通过间接免疫荧光和western blot检测表明:重组腺病毒中的外源基因表达的融合蛋白NS1-2A-E可以自我裂解为NS1和E蛋白。将构建的重组腺病毒免疫小鼠,结果表明该重组病毒可以诱导机体产生良好的体液免疫应答。本实验为WNV重组腺病毒活载体疫苗的研制奠定了基础。; 刘二战赵国辉孙恩成崔焕忠杨涛徐青元孙晶孙亮席娜魏天吴东来; 关键词：西尼罗病毒 NS1 重组腺病毒体液免疫

蓝舌病病毒4型VP5蛋白单克隆抗体的制备: 目的：对中国BTV4型VP5蛋白制备型特异性单克隆抗体(MAbs)，为BTV4的型特异性检测方法的建立以及VP5蛋白功能研究奠定基础。方法:提取BTV4的RNA，设计特异性引物对目的基因SS进行反转录-PCR;利用pMA...; 孙亮孙恩成徐青元杨涛吴东来; 关键词：动物医学蓝舌病蛋白表达单克隆抗体; 文献传递

蓝舌病病毒8型VP2蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位鉴定被引量：8: 2014年; 为制备蓝舌病病毒03TV）8型VP2蛋白的单克隆抗体（MAb）TL鉴定其抗原表位，本研究采用Bac-to-Bac昆虫杆状病毒表达系统表达并纯化的重组VP2蛋白免疫BALB／c小鼠，三免后取小鼠脾淋巴细胞与SP2／0细胞进行融合，并以纯化的重组VP2蛋白为包被抗原，通过间接ELISA筛选出两株能够稳定分泌抗BTV8VP2蛋白的MAbs杂交瘤细胞株（2G4和387）。间接免疫荧光结果表明：2G4和387与BTV8均呈阳性反应，与BTV1～7、BTV9-24、茨城病毒、中山病毒以及赤羽病毒均呈阴性反应。Westernblot结果显示，2G4和387均能够识别BTV8及BTV8重组VP2蛋白。Ig亚类鉴定2G4和387均为IgG1／κ链。利用原核表达的96条覆盖VP2全长的麦芽糖结合蛋白（MBP）融合短肽对MAbs的抗原表位进行鉴定，结果表明：MAb2G4识别的抗原表位为捌LCRLLSTIGRKMCNTE^296。本研究结果为BTV8型特异性检测方法的建立及VP2蛋白结构和功能的研究奠定了基础。; 席娜赵国辉孙恩成秦永丽孙亮魏天徐青元杨涛孙晶刘二战钱爱东吴东来; 关键词：VP2蛋白真核表达单克隆抗体抗原表位

蓝舌病病毒反向遗传操作系统的建立: 目的:建立蓝舌病病毒(BTV)反向遗传操作技术平台.方法:本研究在对中国分离的一株血清1型BTV进行全基因测序的基础上,构建同时含有T7启动子序列和BTV各基因片段的10个质粒,其中在NS3基因片段通过核苷酸点突变方法加...; 杨涛徐青元孙恩成李俊平冯瑜菲孙亮孙晶吴东来; 关键词：动物医学蓝舌病病毒; 文献传递

蓝舌病病毒3型VP5蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位鉴定被引量：4: 2014年; 为制备血清3型蓝舌病病毒(BTV)VP5蛋白的单克隆抗体(MAb)及鉴定其抗原表位,本研究利用pMAL-C4x原核表达系统表达、纯化的重组VP5蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾淋巴细胞与SP2/0细胞进行融合,并以Bac-to-Bac昆虫杆状病毒表达系统表达、纯化的重组VP5蛋白为包被抗原,通过间接ELISA筛选出一株稳定分泌抗BTV3 VP5蛋白的MAb杂交瘤细胞株(3F2)。间接免疫荧光结果表明:MAb 3F2与BTV3、BTV5、BTV9、BTV16呈阳性反应;与BTV6、BTV7、BTV13、BTV21呈弱阳性反应;与其它BTV血清型均呈阴性反应。利用原核表达的麦芽糖结合蛋白(MBP)融合短肽对MAb 3F2识别的抗原表位进行鉴定,结果表明:该MAb识别的抗原表位为89PGERGIQMKIKEIEEE104。氨基酸序列比对结果显示该表位在不同地域来源的BTV3株间比较保守。该MAb的制备和鉴定为进一步研究VP5蛋白的结构和功能奠定了基础。; 孙晶孙恩成刘二战孙亮徐青元杨涛吴东来; 关键词：单克隆抗体抗原表位

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孙亮