吴冰珊 作品数:59 被引量:321 H指数:9 供职机构: 福建省疾病预防控制中心 更多>> 发文基金: 国家科技重大专项 福建省医学创新课题 福建省科技创新平台建设项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 哲学宗教 农业科学 环境科学与工程 更多>>
基于多重RT⁃PCR扩增与双链cDNA合成的A组轮状病毒全基因组测序效果比较 2024年 建立A组轮状病毒(Group A rotavirus,RVA)全基因组单管多重RT⁃PCR扩增方法,并比较其与双链cDNA合成方法在RVA临床标本全基因组二代测序中的应用。对2022年某哨点医院的18份腹泻住院患儿RVA阳性粪便标本进行核酸提取,分别用单管多重RT⁃PCR扩增方法对RVA全基因组进行扩增,用随机引物对病毒核酸进行反转录及双链cDNA合成,最后采用Illumina平台对这2种不同类型的产物进行二代测序。用CLC软件对测序数据进行拼接,分析有效数据量、测序深度及全基因组覆盖度等参数,并用IGV软件查看全基因组测序深度覆盖轨迹。多重RT⁃PCR扩增产物测序和双链cDNA测序获得的RVA有效数据量分别为69.39%~99.83%和0.38%~92.99%,平均测序深度分别为10172×~68156×和35×~61783×,全基因组测序深度10×以上的位点覆盖度分别为98.93%~100.00%和86.28%~100.00%。从全基因组测序深度情况来看,多重RT⁃PCR扩增产物测序在同一个基因节段内部测序深度较为均匀,在11个节段之间测序深度差别较大;而双链cDNA测序在不同基因节段之间的测序深度较为均匀,但同一个基因节段内部靠近5'和3'末端测序深度较低。2种方法所获得的病毒核苷酸序列基本一致,部分基因节段在5'或3'末端100 bp区域内存在2个以内的核苷酸位点差异。在多重RT⁃PCR扩增方法中鉴于引物在不同基因型别间的特异性,对本研究中未涉及到的基因型别的扩增效率还有待进一步验证。单管多重RT⁃PCR扩增方法和双链cDNA合成方法虽然各有优缺点,但均适用于轮状病毒全基因组二代测序在基层的推广。 黄枝妙 吴冰珊 林琦 林卫东 翁育伟关键词:A组轮状病毒 全基因组测序 实时荧光PCR方法快速检测KI多瘤病毒 被引量:2 2016年 目的采用实时荧光PCR方法快速检测KI多瘤病毒(KIPy V),并与巢式PCR扩增法进行比较。方法收集2007年11月至2015年1月在福州市一家妇幼保健院因呼吸道感染住在儿科重症监护病房(PICU)的259例小儿鼻咽抽取物标本和另两家综合医院146例因严重急性呼吸道感染(SARI)住院的成年患者咽拭子标本,通过实时荧光PCR方法对KIPy V的调节区的基因片段进行检测。结果在小儿鼻咽抽取物标本中检测出3例KIPy V感染阳性病例,检测阳性率约为1.2%,而用巢式PCR扩增法只检测出1例,这例的Ct值较低,约为23,并且扩增曲线呈S型。其它两例的Ct值较高,分别约为33和35。在成年患者咽拭子标本中,用两种方法都未检测出KIPy V感染。在两例Ct值较高的小儿病例中,检测出混合有呼吸道合胞病毒(RSV)感染。结论确立的实时荧光PCR方法可以快速检测KIPy V,且特异性较高。 修文琼 郑奎城 吴冰珊 陈炜 刘光华 康育兰关键词:实时荧光PCR 呼吸道感染 福建一例HAstV-5型星状病毒的全基因组测序与重组分析 2018年 为了探究一例福建省检出的HAstV-5型星状病毒2013/Fuzhou/85毒株基因组分子结构特点,本研究采用PCR分段扩增、测序、拼接的方法,获得2013/Fuzhou/85毒株基因组序列全长6 803bp:5′端和3′端均有85bp非编码区;中间3个开放阅读框:ORF1a长2 802bp(86~2 887nt),编码非结构蛋白丝氨酸蛋白酶;ORF1b长1 548bp(2 827~4 374nt),编码非结构蛋白RNA聚合酶;ORF2长2 352bp(4 367~6 718nt),编码结构蛋白衣壳蛋白前体。目前,GenBank中仅有两株HAstV-5型星状病毒全基因组序列:中国辽宁毒株(JQ403108)和巴西哥亚尼亚毒株(DQ028633),2013/Fuzhou/85毒株和中国辽宁毒株核苷酸相似度最高,达94.4%。对该HAstV-5型星状病毒3个开放阅读框分别构建系统进化树,发现ORF1a与HAstV-1(JF327666)相似度最高,ORF1b和ORF2与HAstV-5(JQ403108)相似度最高,提示其有可能存在重组,用Simplot软件进行重组分析,重组位点位于2 741bp,在ORF1a和ORF1b重叠区的上游。本研究中对2013/Fuzhou/85毒株的全基因组测序和重组分析,可以为星状病毒的重组和遗传进化规律研究提供参考。 黄枝妙 吴冰珊 陈凤钦 黄业伟 翁育伟关键词:全基因组 系统进化分析 登革热发病机制的研究进展 被引量:4 2009年 登革病毒临床上可引起登革热和登革出血热,其发病机制迄今尚未完全阐明,一般认为是由于病毒和宿主复杂的交互作用引起的,本文就登革病毒的分子生物学特征、发病机制、病毒的毒力和变异等方面的国内外研究进展作一综述。 吴冰珊 严延生关键词:登革病毒 分子生物学 发病机制 疾病控制 慢性萎缩性胃炎危险因素病例对照研究 被引量:16 2016年 目的探讨慢性萎缩性胃炎危险因素,为疾病防治提供科学依据。方法以1∶1配对病例对照研究方法,对148例慢性萎缩性胃炎病例和148例健康对照者进行问卷调查。用卡方检验、单因素和多因素条件logistic回归法进行分析。结果烧烤(OR=7.00)、吸烟(OR=3.18)、口味偏咸(OR=2.38)、家族慢性胃病史(OR=2.22)和饮酒(OR=2.14)是慢性萎缩性胃炎的危险因素,而经常吃水果(OR=0.33)、新鲜蔬菜(OR=0.35)、奶制品(OR=0.42)和个性温和(OR=0.49)是保护因素。结论家族慢性胃病史、饮食生活习惯及精神心理因素等对慢性萎缩性胃炎发病有影响。 林兰 郑奎城 王雯 伍思翰 施洪 黄良祥 吴冰珊 陈铁晖 李晓庆 蔡琳关键词:慢性萎缩性胃炎 病例对照研究 饮食生活习惯 南平地区2006-2007年乙型肝炎病毒分子流行病学研究 2012年 目的了解南平地区2006-2007年乙型肝炎病毒的分子流行病学方法。方法对8县区综合医院210份乙型肝炎感染者,采用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测HBV-DNA含量,ELISA方法检测血清标志物(HBV-M),PCR-RFLP方法对基因分型。结果 HBsAg+/HBcAb+/HBeAg+组HBV-DNA的阳性率为94.9%,HBV-DNA含量也最高。HBsAg阳性组与HBsAg阴性组的HBV-DNA含量差异有统计学意义,HBeAg阳性组与阴性组的HBV-DNA含量差异有统计学意义。结论 HBV-DNA含量与HBsAg、HBeAg的存在明显关联。HBV-DNA含量可真实反应HBV的感染和复制情况,对临床诊断、药物治疗及疗效观察有重要的指导意义。 王金章 吴冰珊 沈晓娜 王美爱 刘振江 吴春敏 江秀美 严延生关键词:乙型肝炎病毒 分子流行病学 人冠状病毒HKU1 N和S蛋白基因序列及进化分析 被引量:4 2018年 目的了解人冠状病毒HCoV-HKU1在我国福州急性重症下呼吸道感染患儿中的感染情况以及病毒N基因和S基因的系统进化特征。方法通过RT-PCR法对2007年11月至2015年1月因呼吸道感染住进医院儿科重症监护病房的266例小儿鼻咽抽取物标本进行4种人冠状病毒的检测和人冠状病毒HCoV-HKU1的确认检测,测序并BLAST比对分析8份人冠状病毒阳性产物。结果在266例标本中检出2例HCoV-HKU1感染阳性病例,检出率为0.75%(2/266)。这两例患儿一例诊断为支气管炎、一例诊断为急性重症肺炎。通过检测都发现混合感染了人副流感病毒3型(HPIV-3)。对这两株病毒FZ90和FZ96的N和S蛋白基因进行序列测定、拼接和系统进化分析;结果表明这2株HCoV-HKU1都属于HKU1基因型A。结论人冠状病毒HCoV-HKU1可能是儿童下呼吸道感染中较为重要的一种病原,混合感染导致儿童病情加重。 修文琼 郑奎城 吴冰珊 谢剑锋 黄萌 康育兰 刘光华关键词:呼吸道感染 2016-2017年福建省腹泻儿童新型诺如病毒检测情况 被引量:6 2018年 目的鉴定福建省2016-2017年导致儿童腹泻的新型诺如病毒,并分析其分子特征。方法收集2016-2017年福建省病毒性腹泻监测哨点医院5岁以下腹泻住院儿童粪便标本,共计892份。应用RT-PCR方法检测诺如病毒,对诺如病毒RNA聚合酶、衣壳蛋白片段进行序列测定和分子流行特征分析。结果892份标本检出诺如病毒核酸阳性141份,其中GⅠ型6份,GII型125份,GⅠ和GII混合型10份。107份GII型诺如病毒标本成功测序。序列分析结果表明,主要型别为GII.4型和GII.3型,且检出多种新型诺如病毒,包括GII.P17/GII.17、GII.P16/GII.2和GII.P16/GII.4,毒株的核苷酸序列分别与2014年日本的Kawasaki323株、2016年日本的Kawasaki151毒株和2016年英国的NOR2565株高度同源。结论福建省腹泻儿童检出多种新型诺如病毒,需密切关注其流行趋势。 吴冰珊 黄枝妙 林卫东 张云琳 翁育伟关键词:儿童 腹泻 诺如病毒 基因型 分子流行病学 福建省首次检出Aichi病毒及其分子流行病学调查 被引量:3 2011年 目的了解福建地区Aichi病毒的存在和流行情况。方法对2008-2009年福建省多家医院的5岁以下腹泻儿童粪便179份,采用RT-PCR方法进行分子流行病学调查。结果检出Aichi病毒阳性粪便1份。测序后与国外已发表的毒株比较,表明了所测定FJ081021毒株序列(GU459258)与Qld/2008/204/Australia最接近,同源性达98.1%,证实其为B型Aichi病毒。结论首次发现福建地区人群中存在Aichi病毒。 吴冰珊 沈晓娜 王美爱 严延生关键词:胃肠炎 分子流行病学 婴幼儿急性腹泻459例病原检测分析 被引量:7 2012年 目的了解婴幼儿急性腹泻的病原构成,为本地区临床合理有效地控制小儿急性腹泻提供病原依据。方法对2009年1-12月福州儿童医院消化专科收治的459例急性腹泻患儿的粪便标本进行细菌培养,采用免疫胶体金法检测轮状病毒(RV)抗原;抽取其中218例,再应用ELISA法检测RV抗原,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测诺如病毒(NV)核酸。结果 459例患儿细菌感染35例(7.6%),真菌感染5例(1.1%),检出RV阳性117例(25.5%)。218例中RV阳性69例(31.7%),NV阳性61例(28.0%),上述二种病毒混合感染14例(6.4%)。两种病毒感染阳性率男女性别差异无统计学意义(P〉0.05),不同年龄组间RV及NV阳性率差异有统计学意义(P〈0.05),均以2岁以下患儿为主。RV、NV均有明显的季节特征,RV以10-12月份为发病高峰,NV以7~9月份为发病高峰分布,差异均有统计学意义(P〈0.05)。结论小儿感染性腹泻病原类型复杂多样,在临床诊治中应重视病原学检测。 陈凤钦 卓玲 林卫东 叶礼燕 吴冰珊关键词:急性腹泻 轮状病毒 诺如病毒 真菌