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蛋白酪氨酸磷酸酶非受体型6对心脏HERG钾通道的调控作用: 2019年; 目的旨在阐明蛋白酪氨酸磷酸酶非受体型6(tyrosine protein phosphatase non-receptor type 6,PTPN6)是否对心脏HERG钾通道电流具有调控的作用。方法聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)技术构建pcDNA3.1-PTPN6-EGFP质粒;应用脂质体Lipofectamine2000将各种质粒转染进入HEK293细胞;应用膜片钳技术分别检测对照组(pcDNA3.0-HERG单独转染HEK293细胞)、PTPN6过度表达组(pcDNA3.0-HERG和pcDNA3.1-PTPN6-EGFP共转染HEK293细胞)以及抑制剂组(pcDNA3.0-HERG和pcDNA3.1-PTPN6-EGFP共转染HEK293细胞,并加入蛋白酪氨酸磷酸酶抑制剂正钒酸钠)的HERG钾通道的脉冲电流最大电流密度、尾电流最大电流密度以及去激活时间常数Tau等。结果成功构建了pcDNA3.1-PTPN6-EGFP质粒,测序结果表明基因序列正确,荧光显微镜下可观察到HEK293细胞中绿色荧光蛋白表达;全细胞膜片钳电生理检测发现,PTPN6过度表达组的脉冲电流最大电流密度[(36.42±2.76)pA/pF]、尾电流最大电流密[(84.73±7.18)pA/pF]均较对照组[(45.92±3.18)pA/pF、(108.43±7.98)pA/pF]显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);而抑制剂组脉冲电流最大电流密度、尾电流最大电流密度[(47.10±2.96)pA/pF、(110.52±7.87)pA/pF]均较PTPN6过度表达组明显增大,差异有统计学意义(P<0.05);PTPN6过度表达组失活时间常数Tau[(785.59±90.05)ms]较对照组[(440.7±49.49)ms]明显延长,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 PTPN6过度表达能使HERG钾通道的电流密度降低,且这一作用能被酪氨酸磷酸酶抑制剂逆转,提示PTPN6能通过催化HERG钾通道去磷酸化而发挥负性调控HERG钾通道电流的作用。; 姜成任莉黄蕾张轩林吉进; 关键词：长QT综合征 HERG钾通道膜片钳技术

单磷酸腺苷酸依赖的蛋白激酶α2过表达对异丙肾上腺素刺激后心肌细胞骨架表达的影响: 2015年; 目的观察腺病毒介导单磷酸腺苷酸依赖的蛋白激酶(adenosine 5’-monophosphate-activated protein kinase,AMPK)α2过表达对异丙肾上腺素(isoproterenol,ISO)刺激后心肌细胞骨架蛋白肌间线蛋白(desmin)和α-辅肌动蛋白(α-actinin)的影响。方法 ISO处理心肌细胞,Western blot检测α-辅肌动蛋白和肌间线蛋白表达量变化。重组腺病毒AD-Prkaa2感染ISO处理的心肌细胞,Wetern blot检测p-AMPKα、α-辅肌动蛋白、肌间线蛋白表达量变化。结果 ISO刺激后心肌细胞α-辅肌动蛋白表达减少(P=0.001),肌间线蛋白表达增多(P=0.015),差异有统计学意义。AMPKα2过表达的心肌细胞内p-AMPKα增多(P<0.05),肌间线蛋白减少(P=0.008),α-actinin增多(P=0.001),差异有统计学意义。结论 AMPK激活改善ISO刺激引起的心肌细胞骨架重构,有利于心肌细胞搏动功能的维持。; 沈心远任莉林吉进; 关键词：细胞骨架心肌肥厚异丙肾上腺素

非瓣膜性心房颤动合并糖尿病患者血清尿酸值对左心房血栓或自发显影形成的预测价值: 目的本研究意在证明非瓣膜性房颤合并糖尿病患者血清尿酸(SUA)值对经食道超声心动图(TEE)显示左心房血栓(LATH)或自发性声学显影(SEC)形成的预测价值。方法本研究回顾了自2007年7月至2013年7月156例于广...; 任莉刘方舟沈心远郑素琳王宗涛费洪文林吉进

蛋白酪氨酸磷酸酶非受体型12负性调控心脏HERG钾通道电流被引量：3: 2013年; 目的研究蛋白酪氨酸磷酸酶非受体型12(PTPN12)对心脏HERG钾通道电流的调控作用。方法(1)质粒构建和基因转染:PCR技术构建各种质粒,应用脂质体将各种质粒转染HEK293细胞,经G418筛选获得稳定表达的细胞株;(2)应用抗PTPN12抗体进行Western blotting分析检测PTPN12的表达;(3)细胞电生理检测:应用膜片钳技术检测单独表达HERG组(HEK293/HERG细胞)、PTPN12过度表达组(将pCDNA3.1-PTPN12-RFP转染HEK293/HERG细胞)、PAO处理组(PTPN12/HERG组基础上加入抑制剂PAO)、herg突变组(将pCDNA3.1-PTPN12-RFP转染HEK293/HERGY327A-Y700A-Y845A细胞株)的HERG钾通道电流。结果(1)成功构建herg突变质粒和pCDNA3.1-PTPN12-RFP质粒,并获得稳定表达的细胞株;(2)共转染pCDNA3.1-PTPN12-RFP质粒的HEK293/HERG细胞在荧光显微镜下可观察到PTPN12-RFP在细胞中的表达,Western blotting可检测到PTPN12的表达;(3)PTPN12过度表达组脉冲电流密度明显低于对照组(P<0.01),PAO处理组和herg突变组电流密度明显高于PTPN12/HERG组(P<0.01)。结论 PTPN12对心脏HERG钾通道电流具有明显负性调控作用,其可能机制是PTPN12减弱了HERG钾通道酪氨酸磷酸化程度。这一发现有助于更深刻理解HERG钾通道调控机制和长QT综合征发病机制。; 林吉进刘树楷郑方芳马青艳余宏任莉沈心远; 关键词：长QT综合征 HERG钾通道

高血压与冠心病患者血浆氨基脲敏感性胺氧化酶活性和甲醛浓度改变的研究: 2013年; 目的研究原发性高血压(高血压)、冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠心病)患者血浆中内源性甲胺浓度、氨基脲敏感性胺氧化酶活性以及内源性甲醛浓度的变化,以及3者之间的相关性,进一步探讨其临床意义。方法入选健康人42名、高血压34例、冠心病37例、冠心病合并高血压25例,应用高效液相色谱仪检测血浆甲胺浓度、氨基脲敏感性胺氧化酶活性以及甲醛浓度。结果4组甲胺浓度比较,差异无统计学意义(P>0.05)。高血压组、冠心病组、冠心病合并高血压组氨基脲敏感性胺氧化酶活性均较对照组显著升高,差异有统计学意义(P<0.01)。冠心病并高血压组的氨基脲敏感性胺氧化酶活性高于单纯高血压组,差异有统计学意义(P<0.05);也高于单纯冠心病组,差异有统计学意义(P<0.05)。高血压组、冠心病组、冠心病合并高血压组甲醛浓度与对照组比较,均显著升高,差异有统计学意义(P<0.01和P<0.05);高血压组、冠心病组、冠心病合并高血压组间甲醛浓度比较,差异无统计学意义(P>0.05)。氨基脲敏感性胺氧化酶活性与甲醛浓度存在直线相关性(r=0.4463,P<0.01)。结论血浆的氨基脲敏感性胺氧化酶活性和甲醛浓度在高血压、冠心病患者明显升高,提示氨基脲敏感性胺氧化酶活性和甲醛浓度异常升高可能是动脉粥样硬化发生的始动因素之一。; 林吉进刘树楷余宏马青艳沈心远任莉; 关键词：高血压冠状动脉疾病甲胺甲醛

蛋白酪氨酸磷酸酶非受体型11对人类果蝇相关基因钾通道的调控作用被引量：1: 2015年; 目的由人类果蝇相关基因(Human ether-a-go-go-related gene,HERG)编码的钾通道电流的改变可引起长QT综合征,HERG钾通道受到蛋白酪氨酸激酶和磷酸酶的调节,且蛋白酪氨酸磷酸酶非受体型12(protein tyrosine phosphatase non-receptor type 12,PTPN12)具有负性调控HERG钾通道的作用。文中旨在探讨PTPN11对HERG钾通道电生理特性的影响。方法应用PCR技术,构建携带pc DNA3.1-PTPN11-EGFP的质粒;利用脂质体Lipofectamine2000,将各质粒转染进入HEK293细胞;应用膜片钳技术,分别检测对照组(pc DNA3.0-HERG-EGFP单独转染HEK293细胞)、PTPN11过表达组(pc DNA3.0-HERG与pc DNA3.1-PTPN11-EGFP共转染HEK293细胞)以及抑制剂组(pc DNA3.0-HERG与pc DNA3.1-PTPN11-EGFP共转染HEK293细胞基础上加入蛋白酪氨酸磷酸酶抑制剂正钒酸钠)的HERG钾通道的脉冲电流最大电流密度、尾电流最大电流密度及去激活时间常数Tau等。结果成功构建了pc DNA3.1-PTPN11-EGFP质粒。在荧光显微镜下可观察到各组中带有增强型绿色荧光蛋白的质粒表达。膜片钳检测发现,PTPN11过表达组的脉冲电流最大电流密度[(31.85±5.54)p A/p F]、尾电流最大电流密度[(73.82±11.31)p A/p F]较对照组[(45.92±3.18)、(108.43±7.98)p A/p F]均降低(P<0.05);而抑制剂组脉冲电流、尾电流最大电流密度[(48.08±4.32)、(120.06±8.02)p A/p F]较对照组与PTPN11过表达组均明显增大(P<0.05)。PTPN11过表达组去激活时间常数Tau[(622.16±46.49)ms]较对照组[(440.70±49.49)ms]明显升高(P<0.05)。结论 PTPN11对心脏HERG钾通道的电流具有负性调控作用,而酪氨酸磷酸酶抑制剂能逆转PTPN11过表达的HERG钾通道电流的减小,这一发现为应用HERG钾通道的某些调控酶作为治疗长QT综合征的治疗思路提供了一定的理论基础。; 任莉沈心远林吉进; 关键词：膜片钳技术长QT综合征

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任莉

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