魏洁
- 作品数：35 被引量：75H指数：5
- 供职机构：北京医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项河北省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学轻工技术与工程更多>>
- 重组人p66Shc腺病毒抑制HeLa细胞增殖的机制研究被引量：1
- 2014年
- 目的探讨重组人p66Shc腺病毒(AdenoⅩ-p66Shc)对宫颈癌HeLa细胞增殖的抑制作用及机制。方法MTT法检测细胞活力,DCFH-DA荧光探针检测活性氧(ROS)生成;ELISA检测8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)含量;AnnexinⅤ-FITC/PI荧光染色检测细胞凋亡率;Western blot检测相关蛋白表达;免疫共沉淀检测p66Shc与p53之间相互作用。结果重组人p66Shc腺病毒呈剂量依赖性地抑制HeLa细胞增殖(P<0.05),而N-乙酰半胱氨酸能够阻断重组人p66Shc腺病毒的作用。p66Shc能引起细胞ROS水平显著上升(P<0.05),同时伴随8-OHdG含量的升高(P<0.05);p66Shc能引起p53蛋白和CyclinB1蛋白表达及p53磷酸化修饰(p-p53)显著升高(P<0.05),但免疫共沉淀实验结果显示p66Shc与p53并非直接结合,提示p66Shc通过其他信号分子间接调控p53的表达及活性。结论重组人p66Shc腺病毒通过使HeLa细胞ROS水平上升,引起DNA氧化损伤,从而诱导p53表达及其磷酸化修饰升高抑制HeLa细胞增殖。
- 杨晓姗林雅军魏洁胡刚徐蓉许晓东马桂蕾孙洪范
- 关键词：P66SHCHELA细胞活性氧P53
- CRISPR/Cas9介导下敲除KNDC1的人脐静脉内皮细胞具有抗衰老能力被引量：2
- 2020年
- 目的利用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的KNDC1并观察其抗衰老能力。方法通过在线软件设计靶向于KNDC1外显子1、2、3的5个sgRNAs,并将其构建到CRISPR/Cas9载体中;经测序确认序列正确后,将重组质粒转染HeLa细胞和HUVECs,48 h后用real-time PCR和Western blot分别检测KNDC1 mRNA和蛋白表达水平;用SA-β-gal染色检测细胞衰老情况;用2,7-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)荧光探针检测细胞内活性氧水平。结果测序结果显示,设计的5个sgRNAs全部插入到了CRISPR/Cas9载体中,序列正确,构建成功。将5个重组质粒转染到HeLa细胞后发现第4和5号载体敲除效率较高,接下来将4和5号重组质粒转染到HUVECs中,发现与转染对照质粒相比,转染了4和5号重组质粒的HUVECs KNDC1 mRNA及蛋白表达水平显著降低(P<0.05),衰老HUVECs数量和细胞内活性氧水平明显减少。结论利用CRISPR/Cas9技术能有效敲除HUVECs的KNDC1,敲除KNDC1的HUVECs具有抗衰老能力。
- 孙靖玉姚赫胡刚魏洁郭君张鑫林雅军
- 关键词：脐静脉内皮细胞
- 赖氨大黄酸对D-半乳糖致衰老模型小鼠的肾脏保护作用及其作用机制被引量：4
- 2015年
- 目的:研究赖氨大黄酸(RHL)对D-半乳糖衰老模型小鼠的抗衰老和肾脏保护作用,阐明其作用机制,为RHL预防衰老的研究提供依据。方法:通过腹腔注射D-半乳糖建立小鼠衰老模型,将小鼠随机分为对照组、衰老模型组和低、高剂量RHL组。除对照组外,其余各组小鼠每天腹部皮下注射D-半乳糖100mg·kg-1,持续8周,对照组小鼠每天皮下注射等量生理盐水,低和高剂量RHL组小鼠分别每天1次灌胃25和50mg·kg-1的RHL。观察各组小鼠一般状况,计算肾脏指数;检测血清和肾脏组织中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)活性;HE染色行肾脏组织病理学检查;Western blotting法检测肾脏衰老相关蛋白表达水平。结果:与对照组比较,衰老模型组小鼠肾脏指数降低(P<0.05),血清和肾脏组织中SOD和GSH-Px活性降低(P<0.05),MDA含量升高(P<0.05);与模型组比较,RHL组小鼠肾脏指数升高(P<0.05),血清和肾脏组织中SOD和GSH-Px活性升高(P<0.05),MDA含量下降(P<0.05)。肾脏病理组织学检查,与衰老模型组小鼠比较,低和高剂量RHL组小鼠肾脏组织中肾小管上皮细胞水肿减轻,且存在剂量依赖性。Western blotting法检测,与对照组比较,衰老模型组小鼠肾脏组织中沉默信息调节因子1(SIRT1)蛋白表达水平降低(P<0.05),P16和P21蛋白表达水平升高(P<0.05);与衰老模型组比较,低和高剂量RHL组小鼠肾脏组织中SIRT1蛋白表达水平升高(P<0.05),P16和P21蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论:RHL通过抑制氧化应激、肾小管上皮细胞水肿和调控衰老相关基因的表达来发挥对衰老小鼠肾脏的保护作用。
- 魏洁李开济赵毓芳骆广玲魏静波闫丰吕翠平甄永占
- 关键词：衰老模型D-半乳糖
- 尿铜蓝蛋白测定在糖尿病肾病早期诊断中的意义被引量：3
- 2001年
- 高芳堃魏洁陈仁涉迟家敏李明王葛英
- 关键词：糖尿病肾病尿铜蓝蛋白
- 赖氨大黄酸对HeLa细胞周期的影响及其机制
- 2011年
- 目的探讨赖氨大黄酸对HeLa细胞周期的影响及其机制。方法 MTT法检测赖氨大黄酸对HeLa细胞增殖的影响;流式细胞技术检测活性氧水平和细胞周期变化;显微镜下观察HeLa细胞形态变化;Western blot法检测p53和p21蛋白表达。结果赖氨大黄酸剂量依赖性地抑制HeLa细胞增殖,IC50约为83μmol·L-1。随着赖氨大黄酸剂量的增加,HeLa细胞中活性氧水平增加,并出现S期和G2期阻滞,以及细胞空泡样变性。通过Western blot研究发现赖氨大黄酸处理后的p53蛋白磷酸化水平呈剂量依赖性地增加,同时下游周期相关蛋白p21表达水平也随之增加,而p53蛋白表达水平未出现显著地剂量依赖性变化。结论赖氨大黄酸通过增加HeLa细胞中活性氧水平,引起细胞周期相关蛋白p53的磷酸化水平和p21蛋白表达水平增加,引起HeLa细胞出现空泡样变性,并诱导S期和G2期阻滞。
- 林雅军甄永占魏洁胡刚
- 关键词：HELA细胞活性氧细胞周期
- p66Shc重组腺病毒载体及构建和应用
- 本发明提供一种p66Shc重组腺病毒载体，是利用基因工程技术，将人p66Shc片段与pAdeno X-CMV载体在体外同源重组后，转化感受态菌，筛选正确的重组腺病毒并将其线性化后转染HEK293A细胞，在HEK293A细...
- 胡刚林雅军徐蓉魏洁程建华
- 文献传递
- 赖氨大黄酸盐的合成工艺及活性研究被引量：10
- 2010年
- 目的制备水溶性大黄酸衍生物。方法以大黄酸为起始原料,制备大黄酸的赖氨酸水溶液,在30℃反应24 h,然后加入一定量丙酮使其结晶析出,得到晶体物质。根据2005年药典方法检测其在水中溶解度,用MTT法检测新化合物对细胞增殖的影响。结果目标化合物经HPLC、红外光谱和1H-NMR确证。赖氨大黄酸在水中溶解度为15 g.L?1,其在抑制肿瘤细胞和内皮细胞增殖方面与大黄酸相当。结论获得了水溶性好的大黄酸衍生物——赖氨大黄酸,并且其活性与大黄酸相当。
- 林雅军甄永占魏洁胡刚
- 关键词：化学合成溶解度
- 赖氨藤黄酸通过诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡增强顺铂的抗肿瘤作用被引量：1
- 2022年
- 目的 探讨赖氨藤黄酸(GAL)增强顺铂(DDP)抑制人类宫颈癌HeLa细胞增殖的作用机制。方法 通过平板克隆形成实验测定GAL对HeLa细胞的增殖抑制作用;用不同浓度DDP和(或)GAL分别处理HeLa细胞,通过MTT法检测细胞增殖抑制作用;流式细胞术检测HeLa细胞凋亡百分率;Hoechst染色观察HeLa细胞的凋亡形态学变化;Westernblot从蛋白质水平检测凋亡相关分子caspase-3、cleaved-caspase-3、PARP、cleaved-PARP的表达。结果 GAL能够浓度依赖性抑制HeLa细胞克隆形成。GAL可显著增加DDP诱导的细胞凋亡,从(56.9±7.78)%增加到(74.4±9.53)%。Hoechst染色发现,与对照组相比,GAL 1.0μmol/L+DDP 10μmol/L联合处理组,核浓缩和核边集的凋亡细胞显著增多,而且出现分叶状和碎片状核。与对照组相比,GAL 0.5μmol/L+DDP 5μmol/L组、GAL 1.0μmol/L、DDP 10μmol/L以及GAL 1.0μmol/L+DDP10μmol/L组cleaved-caspase-3和cleaved-PARP表达水平升高(P <0.05),而GAL 1.0μmol/L+DDP 10μmol/L组caspase-3表达水平降低(P <0.05)。结论 GAL通过增加DDP诱导的HeLa细胞凋亡来增强DDP的抗肿瘤作用,可以作为DDP诱导HeLa细胞凋亡的增强剂。
- 牛洁刘璞张鑫郭君魏洁林雅军
- 关键词：顺铂宫颈癌凋亡
- 尿铜蓝蛋白检测临床应用评价被引量：1
- 2004年
- 目的建立铜蓝蛋白酶联免疫吸附方法,开展临床糖尿病、糖尿病肾病尿铜蓝蛋白检测并评价其意义。方法对本院内科诊断的720名患者按所患疾病分组,分别收集尿样,采用酶联免疫吸附测定方法,检测尿中铜蓝蛋白和微量白蛋白分泌率,对结果进行统计分析比较。结果(1)糖尿病病人、糖尿病肾病病人的尿铜蓝蛋白分泌率(cerulopasmin excretion rate CER)和尿微量白蛋白分泌率(al-bumin excretion rate AER)的变化趋势呈一致性,二者正相关,r=0.8;(2)临床应用结果表明,对糖尿病肾病早期诊断的真阳性率为:CER达84％,AER达71％;假阴性率CER I6％,AER 29％。(3)糖尿病组、糖尿病肾病组、高血压组CER均值分别为(262±104)ng/min、(549±149)ng/min、(188±70)ng/min。结论(1)尿铜蓝蛋白检测是糖尿病肾病早期诊断的敏感指标;(2)尿铜蓝蛋白与微量白蛋白呈正相关性;(3)尿铜蓝蛋白检测有助于提高糖尿病肾病早期诊断的真阳性率并降低其早期诊断的假阴性率。
- 高芳堃魏洁鲍利民高欣吴伟齐若梅张楠陈仁社
- 关键词：铜蓝蛋白微量白蛋白糖尿病肾病糖尿病性肾病糖尿病肾病早期
- 重组人KNDC1腺病毒表达载体的构建及其促HUVEC衰老作用被引量：5
- 2015年
- 目的构建人KNDC1腺病毒表达载体,观察其在人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中的表达及功能。方法扩增KNDC1基因并与腺病毒骨架载体进行体外重组连接,经筛选、测序确认后转染进HEK293A细胞进行包装;按p Adeno X试剂盒的步骤纯化重组腺病毒,通过终点稀释法测定病毒滴度;用p AdenoⅩ-KNDC1感染HUVEC,48 h后用Western blot检测KNDC1蛋白表达水平;用SA-β-gal染色检测细胞衰老情况。结果经测序确认目的基因KNDC1成功克隆入腺病毒载体中。转染HEK293A细胞后观察到细胞变圆、部分细胞漂浮的特征性病变效应,病毒滴度达到1×1011PFU。感染了p AdenoⅩ-KNDC1的HUVEC中KNDC1蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。随着p AdenoⅩ-KNDC1剂量的增加,衰老HUVEC数量增多。结论人KNDC1腺病毒表达载体构建成功并能促进HUVEC衰老。
- 李开济郝晓方章广玲魏静波魏洁林雅军甄永占
- 关键词：腺病毒同源重组脐静脉内皮细胞
