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马绍辉: 作品数：124 被引量：146H指数：5; 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所更多>>; 发文基金：云南省科技计划项目国家自然科学基金云南省应用基础研究基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>

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柯萨奇病毒B组2型SYBR GreenⅠRT-PCR检测方法的建立: 2020年; 目的:建立一种简单快速、灵敏、特异检测柯萨奇病毒B组2型(CVB2)的SYBR Green I逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法。方法:根据CVB2病毒衣壳蛋白1(VP1)的基因保守序列设计带有T7启动子的特异性引物,构建CVB2-T载体的重组质粒,以体外转录获得的RNA为标准品,绘制标准曲线;建立检测CVB2的SYBR Green I RT-PCR方法,对该方法特异性、灵敏性及重复性进行评价。结果:该方法在102~109拷贝/μL范围内具有良好的线性关系,最低检测限度为102拷贝/μL,标准曲线中R^2为0.996,扩增效率为102.2%;且该方法对肠道病毒71型(EVA71)、柯萨奇病毒A组16型(CVA16)、柯萨奇病毒A组10型(CVA10)和柯萨奇病毒A组6型(CVA6)均无交叉反应;组间和组内重复性实验中变异系数(CV)均小于1%。结论:本研究建立的检测CVB2的SYBR Green I RT-PCR方法具有良好的灵敏性、特异性和重复性,可用于CVB2病毒的快速检测和定量分析。; 杨亚平段素琴杨凤梅李艳艳刘权刘雨赵远马绍辉和占龙; 关键词：手足口病逆转录聚合酶链反应柯萨奇病毒感染

2019年云南省昆明市柯萨奇病毒A组16型毒株的分离鉴定及其VP1基因遗传特征分析: 2024年; 目的对2019年云南省手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)患者粪便中分离获得的柯萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus A16,CVA16)毒株的全VP1基因遗传特征进行分析。方法使用人胚肺二倍体KMB-17细胞和非洲绿猴肾Vero细胞分离病毒,设计针对CVA16全VP1基因序列引物,采用RT-PCR扩增目的基因片段并测序;利用MEGA 7.0和Geneious 9.0.2等软件对全VP1序列进行分析。结果共分离获得26株CVA16毒株,其中有8株KMB-17分离株和18株Vero分离株。随机选取20株CVA16分离株进行分析,发现3株B1a和17株B1b基因亚型;其中17株CVA16 B1b分离株的核苷酸和氨基酸同源性分别为93.8%~100%和98.3%~100%,与国内其他分离株的核苷酸和氨基酸同源性为91.1%~99.2%和97.3%~99.0%;3株B1a分离株的核苷酸和氨基酸同源性为98.0%~98.1%和99.3%,与国内其他B1a分离株的核苷酸和氨基酸同源性为88.7%~98.7%和98.3%~99.7%;17株B1b分离株与其他3株B1a的核苷酸和氨基酸同源性为87.4%~88.4%和97.3%~98.7%。结论2019年昆明地区流行的CVA16属于B1a和B1b基因亚型,以B1b为主,且均为中国内地流行株。; 刘煜菡张名郭伟冯昌增许丹菡马绍辉; 关键词：柯萨奇病毒A组16型进化分析

空肠弯曲菌鞭毛蛋白FlaA的原核表达及免疫原性分析被引量：1: 2009年; 目的:空肠弯曲菌鞭毛抗原FlaA蛋白人工表达及免疫原性的分析。方法:使用PCR方法获得flaA编码的基因,经确证后将该基因克隆到谷胱甘肽转移酶融合表达载体(pGEX-5x-1)中,构建了pGEX-flaA表达质粒,在大肠杆菌BL21中获得了相应表达,并采用Glutathione Sepharose4B进行纯化后获得目的蛋白,用该蛋白免疫小鼠制备了特异性抗血清,利用经培养获得CJ菌体的裂解液做为抗原,通过用最基本的免疫凝集及免疫扩散方法对该抗血清进行初步的分析。结果:pGEX-flaA重组菌株具有明显的表达带,其分子量与预期的结果相同,该表达蛋白占总蛋白的20%,使用裂解的CJ抗原粗纯液,免疫凝集试验观察阳性。结论:利用基因克隆-原核表达所获得FlaA融合蛋白是具有相应的免疫原性的。; 杨庆文马绍辉刘龙丁李琦涵; 关键词：空肠弯曲菌免疫原性

云南德宏地区αβ复合型珠蛋白生成障碍性贫血基因型与血液学特点分析被引量：2: 2020年; 目的分析αβ复合型珠蛋白生成障碍性贫血(下称地贫)的基因型与血液学特点。方法对云南德宏地区427例αβ复合型地贫患者及989例对照组单纯β地贫患者进行血常规检测和常见地贫基因突变检测。结果427例αβ复合型地贫患者中共检出11种突变类型和38种基因型。突变类型以-α3.7和βCD26突变为主,基因型以-α3.7/βCD26型为主。在αβ复合地贫中,β+/βA复合单个α基因缺陷时,其平均红细胞体积(MCV)、平均红细胞血红蛋白含量(MCH)高于单纯β+/βA型地贫。β+/βA复合2个或3个α基因缺陷时,其血红蛋白、MCV、MCH低于单纯β+/βA型地贫。β0/βA复合3个α基因缺陷时,其MCV、MCH低于单纯β0/βA型地贫。结论云南德宏地区的αβ复合型地贫基因型存在显著的异质性,突变谱复杂多样,其血液学表型异质性与构成它的α、β突变类型及其相互作用有关。由于地贫高发区的αβ复合型地贫患者在婚育中具有较高的生育重度地贫患儿的风险,建议加强筛查和遗传咨询。; 桑国鑫黄铠林克勤易薇孙浩黄小琴马绍辉褚嘉祐杨昭庆; 关键词：珠蛋白生成障碍性贫血基因型

柯萨奇B组1型云南分离株MSH／KM9／2009全基因组序列分析被引量：2: 2013年; 对2009年分离自云南省昆明市脑膜脑炎儿童的1株柯萨奇B组1型病毒MSH-KM9-09,进行了全基因组的序列测定,并对其分子变异和进化特点进行了分析。采用逆转录-聚合酶链反应(Reverse transcription-polymerasechain reaction,RT-PCR),分段扩增覆盖病毒全长序列的8个重叠片段(未包括多聚腺苷酸尾),并进行序列测定和分析。CVB1MSH-KM9-09病毒株基因组全长7 384个核苷酸(nt),5'端和为3'端分别为741nt和94nt的非编码区,5'和3'非编码区间为一个6 549nt长的开放阅读框,编码一个含2 183个氨基酸的多聚蛋白,编码区内未见核苷酸的插入或缺失。与GenBank库中现有CVB1全基因组序列M16560、pmMC、Tucson B1和CVB1/Nm相比对,整个基因组的核苷酸同源性分别为80.9%、81.6%、80.5%和80%,氨基酸同源性分别为95.6%、95.8%、96.2%和95.6%。首次完成中国CVB1病毒全基因组核苷酸序列的测定,经核苷酸序列同源性比对和进化树分析,证实MSH/KM9/2009株属于CVB1基因型。; 刘建生邵聪文潘玥朱艳菊邓新强廖宏玮刘雅灵马绍辉; 关键词：同源性

云南省昆明地区2022年柯萨奇病毒A16型的VP1区分子特征: 2024年; 目的对昆明市某医院2022年从手足口病患儿分离的柯萨奇病毒A组16型(coxsackievirus A16,CVA16)的全VP1基因区分子特征分析。方法对昆明市某医院2022年从手足口病(hand foot mouth disease,HFMD)患儿200份临床样品粪便标本进行处理,分别通过RD细胞和Vero细胞分离,对经3次培养后仍产生细胞效应(cytopathogenic effect,CPE)的细胞培养液提取病毒核酸,然后用通用引物222/224经RT-PCR扩增并测序,序列经BLAST比对确定其血清型,对鉴定为柯萨奇病毒A组16型(coxsackievirus A16,CVA16)的再用特异引物CA16VP1F/CA16VP1R扩增其全VP1区并测序和拼接。下载CVA16病毒标准序列,采用Geneious 5.4.1和MEGA 6.05等软件对本研究CVA16的全VP1区的核苷酸和氨基酸序列分析。结果经鉴定后共检出22株从Vero细胞分离CVA16和6株RD细胞分离的CVA16毒株,进一步通过特异引物扩增获得21株可用的CVA16VP1全长序列,基于全VP1基因系统进化分析,这21株CVA16全属于B1a基因型。21株CVA16全长VP1基因之间的核苷酸和氨基酸序列同源性均较高,分别为91.9%~99.6%和89.2%~99.3%;与中国CVA16 B1a基因型的其他株的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为89.7%~96.3%和89.2%~97.0%。与CVA16 B1b其他参考株对比,其核苷酸和氨基酸序列同源性分别在84.3%~87.2%和89.2%~97.0%。与其它CVA16的B1a基因亚型相比较发现21个氨基酸位点出现变异。结论2022年中国云南省昆明某医院引起HFMD的CVA16毒株属于B1a基因型,应继续监测以明确其流行特征。; 张磊沈茹楚昭阳马绍辉李丽; 关键词：柯萨奇病毒A组16型

丙型肝炎病毒多表位抗原重组体免疫原性分析被引量：2: 2003年; 目的　研究丙型肝炎病毒 (HCV)多表位抗原重组体在大肠杆菌中的非融合表达及其免疫原性分析。方法　利用DNA重组技术将构建的HCV多表位抗原重组体克隆入原核表达载体pBV2 2 0并在BL 2 1中表达 ,非融合表达蛋白经SDS PAGE检测 ,排阻层析纯化 ,利用ELISA和免疫印迹分析其抗原反应性。免疫昆明鼠和猕猴 ,并检测其抗体和特异性CTL(Cyto toxicTlymphocyte) ,在抗体转阴后再次用HCV病人血清攻击以检测其免疫应答能力。结果　HCV多表位重组体在pBV2 2 0 BL 2 1中表达量占菌体总蛋白量的 15 %。Western blot和ELISA分析表明HCV多表位抗原能与HCV病人血清特异性结合 ,抗体水平和特异性CTL检测结果显示该抗原肽能诱导小鼠和猕猴产生较好的抗体水平和特异性CTL效应。用病人血清再次攻击后受试动物的抗体迅速阳转。; 胡方董承红董少忠王丽春孙明王晶晶刘龙丁马绍辉陈丽珊任大明李琦涵; 关键词：丙型肝炎病毒免疫原性大肠杆菌

应用KMB17细胞培养柯萨奇病毒B族1、2、3型的研究: 2024年; 目的采用人胚肺二倍体细胞(human embryonic lung diploid cell)KMB17株对柯萨奇病毒B族(Coxsackievirus B,CVB)1、2、3型进行适应性培养,探索应用KMB17细胞培养CVB1-3型病毒的相关参数,为基于KMB17细胞研发CVB多价疫苗提供参考。方法将CVB 1-3型分别设置8个不同的感染复数(mulitiplicity of infection, MOI)梯度(0.05、0.1、0.15、0.2、0.25、0.3、0.35、0.4),在KMB17细胞上进行培养观察,对病毒培养结果进行统计分析。结果 CVB 1-3型病毒均能KMB17细胞中复制,并使细胞产生明显的细胞病变(cytopathic effect, CPE)。其中CVB 1型在KMB17细胞上适宜的种毒MOI值为0.25~0.3,病毒收获液的平均滴度为7.25 lgCCID50/mL,适宜MOI范围内病毒培养时间的95%置信区间为96.1~97.6 h;CVB 2型在KMB17细胞上适宜的种毒MOI值为0.20~0.25,病毒收获液平均滴度为7.375 lgCCID50/mL,适宜MOI范围内病毒培养时间的95%置信区间为74.8~76.8 h。CVB 3型在KMB17细胞上适宜的种毒MOI值为0.30~0.35,病毒收获液的平均滴度为7.25 lgCCID50/mL,适宜MOI范围内病毒培养时间的95%置信区间为82.7~84.7 h。结论 KMB17为一株理想的用于CVB1、2、3型培养的基质细胞,可为基于KMB17细胞研发CVB多价疫苗提供参考。; 邓自君靳玮华李艳艳张伟杨凤梅张名陈丽雄徐鸿界李明学刘权唐洁段素琴孙文亭李咏洁马绍辉赵远杨明和占龙杨净思; 关键词：病毒培养

mRNA疫苗的研究进展被引量：4: 2022年; 近年来随着生物技术的发展,疫苗的研发策略不再仅限于传统的疫苗,曾经被认为有较多局限性的mRNA疫苗在通过一系列研究和改进后,表现出其优越性的一面,已经在肿瘤、感染性疾病及自身免疫性疾病的防控和治疗等方面展示出了良好的应用前景。本文对mRNA疫苗的结构设计和优化及传递系统和疾病防治应用方面取得的进展作一综述。; 袁军鸿杨昭庆(综述)杨昭庆; 关键词：结构优化肿瘤治疗感染性疾病

腮腺炎病毒主要中和抗原HN蛋白的分离纯化: 目的采用两步层析方法分离纯化腮腺炎病毒 HN 蛋白组分。方法将培养收获的腮腺炎病毒液经甲醛灭活,后加入 SDS 及 TritonX-100裂解后,经由 SP Sepharose Fast Flow 阳离子柱及 Sapha...; 梁燕马绍辉王丽春董承红杨子江史长军李琦涵; 文献传递

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