- 人肝素酶RNAi序列的筛选及鉴定被引量：7
- 2007年
- 目的筛选及鉴定有效人肝素酶(heparanase,Hpa)RNA干扰(RNA interference)序列。方法通过在线网络软件选择3个Hpa RNAi的靶点,再设计1组无关序列作阴性对照。通过基因重组技术,把3个干扰片段及阴性对照片段分别克隆入质粒pGenesile-1,脂质体法稳定转染至HepG2肝癌细胞;经G418抗性筛选后各挑选2个阳性克隆进行扩大培养;Western blot检测不同克隆肝素酶蛋白的表达水平,并进一步采用RT-PCR验证筛选克隆肝素酶mRNA的表达水平。结果通过在线网络软件设计3个RNA干扰序列,分别为Hpa/RNAi-1:GGCTATCTCTTCTGTTCAA,Hpa/RNAi-2:TCCT-GTCCGTCACCATTGA,Hpa/RNAi-3:CTCAGTTGCTCCTGGACTA及阴性对照序列Hpa/RNAi-N:CTACCGTTGTATAGGTGT;测序证实克隆入pGenesil-1载体的3个干扰序列及阴性对照序列与设计序列完全一致;经G418抗性筛选后形成的阳性克隆采用Western blot检测其肝素酶蛋白的表达,结果表明3个干扰序列对HepG2细胞人肝素酶蛋白的表达均有抑制作用,其中Hpa/RNAi-1和Hpa/RNAi-3干扰链的抑制效果最好,分别达到57%和71%;RT-PCR检测结果亦表明Hpa/RNAi-1和Hpa/RNAi-3序列在mRNA水平对肝素酶有较好的抑制效果。结论成功筛选出有效的人肝素酶RANi序列。
- 熊震汤旭东房殿春陈婷余松涛陈陵罗元辉杨仕明
- 关键词：RNA干扰SIRNA肝癌
- 人肿瘤转移相关抗原肝素酶HLA-A2.1限制性CTL表位的预测及初步鉴定被引量：10
- 2007年
- 目的预测并鉴定肿瘤转移相关抗原肝素酶来源的HLA-A2.1限制性CTL表位。方法采用超基序、量化基序和分子模拟相结合的方法,对肝素酶HLA-A2.1限制性CTL表位进行预测,合成候选表位肽;利用T2细胞的特点,对合成的候选肽与HLA-A2.1分子进行亲和力分析,初步验证预测结果;利用标准51Cr释放试验检测特异性CTLs诱导活性。结果在所筛选的5个候选CTL表位中,Hpa(525-533)、Hpa(277-285)、Hpa(405-413)可在体外有效诱导肝素酶特异性CTLs的产生,对肝素酶阳性且HLA-A2阳性的KATO-Ⅲ细胞具有明显的杀伤效应。结论Hpa(525-533)、Hpa(277-285)、Hpa(405-413)有可能是肿瘤抗原肝素酶HLA-A2.1的限制性CTL表位。
- 陈婷万瑛汤旭东房殿春余松涛熊震罗元辉杨仕明
- 关键词：肝素酶表位分子模拟
- 缺氧促进肺动脉内皮细胞对单核细胞的特异性粘附
- 目的：缺氧诱导的肺组织炎症在缺氧肺动脉高压发生中起重要作用.缺氧导致血管内皮细胞向促炎表型转变,增强炎细胞的粘附和迁移,是缺氧肺组织炎细胞浸润的重要环节.我们之前的研究发现,缺氧诱导HUVEC表达CADM3增加,促进单核...
- 陈婷向仕权杨诚忠李满满黄缄高钰琪谭小玲
- 关键词：单核细胞肺血管内皮细胞主动脉内皮细胞缺氧
- hTERT基因修饰骨肉瘤U-2 OS细胞后生物学行为的改变
- 目的观察 hTERT 基因修饰对人骨肉瘤细胞系 U-2 OS 生物学行为的影响。方法采用脂质体法将克隆有人全长 cDNA hTERT 的真核荧光质粒(pIRES2-EGFP-hTERT)转染端粒酶阴性的人骨肉瘤 U -2...
- 陈陵房殿春汤旭东陈婷余松涛罗元辉杨仕明
- 文献传递
- 缺氧上调人脐静脉内皮细胞长链非编码RNA(MGC16121)表达
- 目的：人类基因组所转录的RNA中只有很小一部分是编码蛋白质的,绝大多数RNA并不编码蛋白质,即非编码RNA.它们虽然不直接参与基因编码和蛋白质合成,但在基因转录后调控、剪切和修饰中发挥重要功能,和疾病的发生、发展、诊断和...
- 李满满向仕权陈婷杨诚忠黄缄高钰琪谭小玲
- 关键词：长链非编码RNA人脐静脉内皮细胞缺氧
- hTERT基因修饰对树突状细胞生物学行为的影响
- ＜正＞目的:观察hTERT基因修饰对树突状细胞生物学行为的影响。方法:用负载人全长端粒酶逆转录酶（hTERT）目的基因的复制缺陷型腺病毒,感染原代培养的人树突状细胞（DC）,向DC转导hTERT基因,并进行免疫组化、We...
- 陈陵梁光萍苏勇跃蔡永国陈婷汤旭东房殿春罗元辉杨仕明
- 文献传递
- 乳清蛋白肽对生长期大鼠氮代谢影响的研究及短肽型全营养素临床应用效果观察
- 目的：乳清蛋白属于优质蛋白，为整蛋白大分子化合物，在肠道不能被直接吸收。水解乳清蛋白是乳清蛋白经蛋白酶水解后的产物，所含的小分子短肽和游离氨基酸可以在肠道不经过消化而直接被吸收。本文以乳清蛋白为对照，研究水解乳清蛋白对生...
- 陈婷
- 关键词：生长期氮代谢肠内营养支持临床疗效
- 文献传递
- 小鼠肝素酶H-2K^b限制性CTL表位预测及其MHC-I亲和力分析被引量：8
- 2007年
- 目的预测肿瘤转移相关基因肝素酶的CTL表位,为探索基于肝素酶的抗原表位的免疫治疗奠定基础。方法利用基于超基序、量化基序结合人工神经网络方案开发的H-2Kb限制性CTL表位预测软件,对小鼠肝素酶蛋白的CTL表位进行预测,然后人工合成相关待测表位肽,再对这些合成肽与MHC-I结合亲和力进行检测。结果采用机算机网络系统,预测了5条小鼠肝素酶抗原表位,即mHpa234~241(LGEDFVEL),mHpa351~358(FAAGFMWL),mHpa519~526(FSYGFFVI),mHpa386~393(VDENFEPL),mHpa398~405(LSLLFKKL),MHC亲合力实验表明,与阴性对照肽对比,随着预测肽浓度增加,H-2Kb的表达逐渐增加,与MHC-Ⅰ类分子的亲和力亦逐渐增强,当预测肽浓度达到30μmol/L时,其荧光系数(FI)均大于1.5。结论通过计算机软件预测到的5条小鼠肝素酶CTL表位与MHC-Ⅰ类分子均有较高的结合亲和力,为该表位的下一步体内鉴定及基于小鼠肝素酶抗原表位的肿瘤免疫治疗奠定基础。
- 汤旭东万瑛陈婷熊震陈陵余松涛罗元辉杨仕明
- 关键词：CTL表位
- hTERT基因修饰对人外周血树突状细胞生物学行为的影响被引量：1
- 2006年
- 目的观察人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因修饰对树突状细胞生物学行为的影响。方法用负载hTERT目的基因的复制缺陷型腺病毒(rAd-hTERT)感染原代培养的人树突状细胞(DC)以获取hTERT基因修饰的DC(DC-hTERT),采用免疫组化及Westernblot法检测DC-hTERT内hTERT及增殖细胞核抗原(PCNA)的表达;采用流式细胞术检测DC-hTERT表面成熟标志的变化;采用MTT法检测DC-hTERT的增殖能力。结果rAd-hTERT感染DC后hTERT蛋白表达明显增加;流式细胞术检测显示,感染Ad-hTERT后DC表面成熟指标CD83及CD86无明显变化;成熟DC经hTERT修饰后的生长曲线显示,DC-hTERT在前2周数量稍有增加,但DC/PBS及DC/rAd-LacZ数量明显下降,在第3周三者数量均有下降趋势,但DC-hTERT组细胞数量仍明显多于其他两组;Westernblot检测显示DC-hTERT内PCNA的表达明显增强。结论hTERT基因表达上调后,DC增殖能力明显增强,衰老速度延缓。
- 陈陵蔡永国梁光萍苏踊跃房殿春汤旭东陈婷余松涛罗元辉杨仕明
- 关键词：人端粒酶逆转录酶树突细胞重组腺病毒
- hTERT基因修饰DC对不同类型肿瘤细胞的免疫杀伤效应研究
- 目的研究 hTERT 基因修饰树突状细胞(DC)诱导产生的细胞毒 T 淋巴细胞(CTLs)对不同肿瘤细胞系的免疫杀伤效应。方法采用密度梯度离心法分离并得到人外周血白细胞(PBMCs),利用 rhGM -CSF、rhIL-...
- 陈陵蔡永国房殿春汤旭东陈婷余松涛熊震罗元辉杨仕明
- 文献传递
