郝永昌
- 作品数：14 被引量：14H指数：2
- 供职机构：海南大学更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项海南省重点科技项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- 水牛MD-2 cDNA基因的克隆与原核表达被引量：1
- 2011年
- 为探讨水牛抵抗革兰阴性菌感染的免疫机制,克隆、表达了水牛髓样分化蛋白-2(bMD-2)基因,并用Western blot进行鉴定。采用RT-PCR方法从水牛外周血白细胞中扩增bMD-2基因,构建pET28a-bMD-2表达载体,转化至大肠埃希菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达,进行SDS-PAGE和Western blot分析。结果显示,bMD-2基因含有一个483 bp的开放阅读框,编码161个氨基酸;37℃条件下,经1 mmol/LIPTG诱导表达6 h后,His-bMD-2在E.coliBL21中表达量最高,并以包涵体的形式存在,融合蛋白的分子质量约为25 ku。结果表明水牛MD-2原核表达载体成功构建并表达,为继续深入对水牛MD-2基因功能的研究提供参考。
- 焦寒伟杜丽雷明张冬琳郝永昌张晓茹匡文华成鹰王凤阳
- 关键词：水牛MD-2克隆原核表达
- 海南坡鹿MD2 cDNA的克隆及其生物信息学分析
- 2011年
- 以海南坡鹿外周血白细胞总RNA为模板,利用RT-PCR技术,获得海南坡鹿MD2全长cDNA,并对其进行较系统的生物信息学分析,内容包括序列特征分析、同源性分析、编码蛋白质理化性质及结构预测。结果表明:海南坡鹿MD2的CDS序列长度为486 bp,编码160个氨基酸,与黄牛、人、欧洲兔、褐家鼠的核苷酸序列同源性分别为98.55%,77.43%,78.47%和74.74%。该基因编码的蛋白质相对分子质量约为19×103,理论等电点为8.18。对编码蛋白的分子结构预测发现,该蛋白为非跨膜蛋白,其二级结构中,α-螺旋占16.25%,β-折叠片占38.13%,无规则卷曲占45.63%。
- 杜丽谢少林成鹰张晓茹匡文华焦寒伟张冬琳郝永昌雷明刘涛王凤阳
- 关键词：海南坡鹿克隆生物信息学分析
- 一种抑制水牛膜分化抗原14 基因表达的小核糖核酸分子
- 本发明的一种抑制水牛膜结合型白细胞分化抗原14基因表达的小核糖核酸分子，通过建立稳定表达增强型绿色荧光蛋白EGFP-水牛膜结合型白细胞分化抗原14融合蛋白的人胚肾293细胞系，合成不同小核糖核酸分子，并转染人胚肾293细...
- 王凤阳杜丽雷明焦寒伟成鹰张冬琳郝永昌
- 布鲁氏菌感染条件下mCD14 knockdown RAW264.7稳定细胞系microRNA表达分析
- 布鲁氏菌病是由布鲁氏菌引起的传染病,不仅感染多种动物,而且对人类健康也造成影响。CD14作为布鲁氏菌细胞壁成分脂多糖(LPS)的受体以及重要的天然免疫分子,参与败血症引起炎症反应启动。研究表明,抑制LPS上游炎症通路是一...
- 郝永昌
- 关键词：MICRORNA
- 文献传递
- 一种抑制水牛膜分化抗原14 基因表达的小核糖核酸分子
- 本发明的一种抑制水牛膜结合型白细胞分化抗原14基因表达的小核糖核酸分子，通过建立稳定表达增强型绿色荧光蛋白EGFP-水牛膜结合型白细胞分化抗原14融合蛋白的人胚肾293细胞系，合成不同小核糖核酸分子，并转染人胚肾293细...
- 王凤阳杜丽雷明焦寒伟成鹰张冬琳郝永昌
- 文献传递
- 海南原鸡CD14 cDNA的克隆及其生物信息学分析被引量：1
- 2013年
- 从海南原鸡外周血白细胞中提取总RNA,以总RNA为模板,利用RT-PCR技术,成功获得海南原鸡CD14全长cDNA,并对其进行较系统的生物信息学分析,内容包括序列特征分析、同源性分析、编码蛋白质理化性质及结构预测。结果表明:海南原鸡CD14的CDS序列长度为1398 bp,编码465个氨基酸,该基因编码的蛋白质相对分子质量约为4.971 ku,理论等电点为6.41。对编码蛋白的分子结构预测发现,该蛋白为跨膜蛋白,其二级结构中,α-螺旋占47.31%,β-折叠占6.88%,无规则卷曲占45.81%。比对分析表明,海南原鸡CD14基因的核酸序列与人、小鼠、牛、猕猴的同源性均在30%～38%之间。
- 荣辉张珈宁杜丽成鹰郝永昌焦寒伟贾晓晓史巧芸吴科榜胡日查王凤阳
- 关键词：原鸡CD14CDNA克隆生物信息学分析
- 中国荷斯坦奶牛髓样分化蛋白-2 cDNA的克隆与原核表达被引量：2
- 2012年
- 本试验旨在克隆并表达中国荷斯坦奶牛髓样分化蛋白-2(myeloid differentiation protein-2,MD-2)基因,并用West-ern blotting进行鉴定。采用RT-PCR技术从中国荷斯坦奶牛外周血白细胞中扩增MD-2cDNA,并将扩增产物与pMD20-T载体连接,重组质粒经测序鉴定后,构建pET28a-MD-2重组质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达后进行SDS-PAGE和Western blotting分析。结果表明,目的基因含有1个483bp的开放阅读框,编码161个氨基酸;与黄牛、黑猩猩和小鼠MD-2的cDNA序列同源性分别为99.38%、77.02%、68.12%,氨基酸同源性分别为98.75%、65.00%和58.13%。融合蛋白以包涵体的形式存在,分子质量约为25ku。说明本研究成功克隆并表达了中国荷斯坦奶牛MD-2cDNA,为其进一步的功能研究提供了理论依据。
- 焦寒伟王洪梅刘晓杜丽雷明张冬琳郝永昌成鹰何洪彬王凤阳
- 关键词：中国荷斯坦奶牛髓样分化蛋白-2克隆原核表达
- 一种有效抑制小鼠mCD14基因表达的小干扰核糖核酸分子
- 本发明的一种能有效抑制小鼠mCD14基因表达的小干扰核糖核酸分子，其核糖核酸分子序列信息是：正义，gggcaguucacugauauuatt(5’-3’)，反义，uaauaucagugaacugccctt(5’-3’)，...
- 王凤阳杜丽雷明焦寒伟成鹰张冬琳郝永昌
- 文献传递
- 水牛MyD88 cDNA的克隆与原核表达被引量：5
- 2011年
- 采用RT-PCR方法从水牛外周血白细胞总RNA中扩增出髓样分化因子88(mydoid differentiation factor88,MyD88)cDNA序列,PCR产物分离纯化后,与pMD20-T载体连接,重组质粒经PCR、酶切鉴定后测序,并进行生物信息学分析;构建pET28a-MyD88表达载体,并将其转化至E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达后,进行SDS-PAGE、镍柱亲和层析纯化和Western blotting分析。结果显示,克隆到的水牛MyD88cDNA全长为1189bp,含有1个891bp的开放阅读框,编码296个氨基酸,理论等电点为5.65。经IPTG诱导表达后,得到一个带His·Tag的约39kD的重组融合蛋白。用抗His单克隆抗体进行Western blotting,得到1条约39kD特异性抗体结合带,表明水牛MyD88原核表达载体成功构建并表达。本研究为进一步开展水牛MyD88的结构功能分析奠定了基础。
- 张晓茹匡文华成鹰杜丽张冬琳郝永昌雷明焦寒伟刘涛祁超王凤阳
- 关键词：MYD88水牛基因克隆原核表达
- 水牛髓样分化因子88融合蛋白真核表达载体的构建及其在HEK293细胞中的表达被引量：1
- 2012年
- 将水牛髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)cDNA全长定向克隆至pEGFP-C1真核表达载体,通过酶切和测序鉴定正确后,经脂质体介导将重组质粒转染至HEK293细胞,应用荧光显微镜、流氏细胞术和Westernblotting检测MyD88蛋白的表达。结果表明,酶切及测序结果证实重组质粒含有MyD88全长CDS序列,融合蛋白读码正确;荧光显微镜、流式细胞术和Western blotting检测证实,水牛EGFP-MyD88融合蛋白真核表达载体能够在HEK293细胞表达。本研究成功构建了pEGFP-C1-MyD88真核表达载体,并使其在HEK293细胞中获得表达,为进一步研究该基因的生物学功能奠定基础。
- 匡文华张晓茹成鹰杜丽雷明焦寒伟张冬琳郝永昌祁超王凤阳
- 关键词：水牛髓样分化因子88EGFP融合蛋白真核表达
