许云禄 作品数:86 被引量:305 H指数:10 供职机构: 福建医科大学 更多>> 发文基金: 福建省自然科学基金 莆田市科技计划项目 福建省教育厅科技项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 理学 化学工程 更多>>
蕲蛇酶对血管内皮细胞纤维蛋白溶解功能的影响 被引量:11 2003年 目的 研究蕲蛇酶对体外培养人脐静脉内皮细胞纤溶活性的影响 ,探讨其抗栓作用机制。方法 采用人脐带来源的脐静脉内皮细胞进行原代及传代培养 ,以光镜、电镜、第Ⅷ因子相关抗原免疫组化等方法鉴定内皮细胞 ,采用发色底物法 (S2 2 51 )测定内皮细胞培养液中组织型纤溶酶原激活剂(t PA)及组织型纤溶酶原激活剂抑制物 (PAI)的活性 ,ELISA法测定培养液中纤维蛋白降解产物的含量。结果 所培养的细胞具有特征性Weibel palade小体 ,第Ⅷ因子特异性抗原阳性。蕲蛇酶使细胞培养液中t PA活性升高 ,t PA/PAI比值升高 ,纤维蛋白降解产物明显增加。结论 蕲蛇酶具有促进血管内皮细胞释放t PA ,提高其纤溶活性的作用。 许云禄 刘广芬 王晴川关键词:脐静脉 蕲蛇 蕲蛇酶 组织型纤溶酶原激活物 纤溶酶原激活物抑制物 龙虎芪黄汤对免疫性肝损伤小鼠血清TNF-α IL-6的影响 被引量:3 2009年 目的:观察龙虎芪黄汤对卡介苗(BCG)+脂多糖(LPS)所致小鼠急性免疫性肝损伤小鼠血清TNF-αIL-6影响。方法:采用尾静脉注射卡介苗(BCG)+脂多糖(LPS)建立小鼠免疫性肝损伤模型,通过龙虎芪黄汤高、中、低剂量灌胃,检测血清ALT、AST、TNF-α、IL-6的含量,并观察小鼠的肝组织的病理变化。结果:龙虎芪黄汤可显著降低BCG+LPS所致小鼠血清ALT、AST的升高(P<0.01),同时也明显降低TNF-α、IL-6的升高(P<0.05),能明显改善BCG+LPS所致的肝组织病理学损伤。结论:龙虎芪黄汤对BCG+LPS所致小鼠急性免疫性肝损伤的保护作用与减少细胞毒因子释放的有关。 林薇 许云禄 郑良朴 叶蕻芝关键词:免疫性肝损伤 小鼠 江浙短尾蝮蛇纤溶酶原激活剂真核表达载体的构建及在COS-7细胞中的表达 <正>目的采用基因工程技术,在COS-7细胞中表达江浙短尾蝮蛇纤溶酶原激活剂并检测其生物活性。方法根据TSV-PA的CDNA序列设计上游引物,含EcoRⅠ酶切位点,和下游引物,含XhoⅠ酶切位点.从江浙短尾蝮蛇毒腺中提取... 孟文丽 张进华 许云禄文献传递 异硫氰酸苯己酯诱导Molt-4细胞p15基因去甲基化及机制研究 被引量:10 2009年 研究新型组蛋白去乙酰化酶抑制剂异硫氰酸苯己酯(PHI)对急性T淋巴细胞性白血病Molt-4细胞p15基因的去甲基化作用及诱导沉默基因重新表达作用,并进一步探讨其作用机制。应用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)检测PHI作用前后Molt-4细胞株p15基因甲基化状态的变化;半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测Molt-4细胞经过PHI处理后DNA甲基转移酶DNMT1、DNMT3A、DNMT3B、p15基因的mRNA的表达变化;用蛋白免疫印迹(Western blotting)检测Molt-4细胞经过PHI处理后的P15蛋白的表达。结果显示,PHI作用于Molt-4细胞5d后,p15基因的甲基化程度减弱,p15基因的异常高甲基化现象被逆转,沉默的p15基因重新表达,p15mRNA、P15蛋白表达增加,并呈浓度依赖性;PHI可下调DNMT1和DNMT3B的mRNA表达(P<0.05),而对DNMT3A的mRNA表达作用不明显(P>0.05)。PHI可能通过抑制DNA甲基转移酶DNMT1和DNMT3B的活性,诱导p15基因产生去甲基化,或者(和)是通过改变p15基因附近组蛋白的乙酰化水平,导致染色体空间结构发生变化,增加转录因子的进入,从而诱导p15基因重新表达。 蒋少红 马旭东 黄轶群 许云禄 郑瑞玑关键词:组蛋白去乙酰化酶 蛋白酶抑制剂 DNA甲基转移酶 白血病 异硫氰酸苯己酯 舟山眼镜蛇毒细胞毒素的克隆及原核表达 2010年 目的构建舟山眼镜蛇毒细胞毒素(Cytotoxin,CTX)原核表达载体(pET42α(+)-CTX),并在大肠杆菌中表达CTX重组蛋白。方法从舟山眼镜蛇毒中分离纯化细胞毒素(CTX),测定N-末端氨基酸序列并据此设计引物,以提取的舟山眼镜蛇毒腺总RNA为模板,通过RT-PCR方法扩增细胞毒素基因序列(CTXcDNA)。将CTXcDNA定向克隆到原核表达载体pET42α(+)中,双酶切图谱、PCR和DNA测序鉴定,转化宿主菌E.coliBL21(DE3),异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导,SDS-PAGE凝胶电泳分析表达产物,GSTrap FF亲和层析纯化融合蛋白CTX;Western-blotting鉴定。结果成功合成CTXcDNA,并构建原核表达质粒pET42α(+)/GST-CTX,在大肠杆菌E.coliBL21(DE3)中表达融合蛋白CTX,SDS-PAGE凝胶浓度扫描显示表达量占菌体总蛋白的28.9%,Western-blotting证实纯化蛋白为重组CTX融合蛋白(rCTX)。结论成功构建CTX基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中表达,获得rCTX具有眼镜蛇毒CTX的抗原性。 陈瑜 王玥 黄燕愉 许云禄关键词:眼镜蛇蛇毒 细胞毒素 克隆 龙虎芪黄汤对小鼠免疫性肝损伤的保护作用 被引量:1 2006年 观察龙虎芪黄汤对卡介苗(BCG)加脂多糖(LPS)所致小鼠急性免疫性肝损伤的影响,结果显示龙虎芪黄汤可显著降低BCG加LPS所致小鼠血清ALT、AST及肝组织MDA的升高,明显提高肝组织SOD的含量,抑制肝组织TNF-α的升高,能明显改善BCG加LPS所致的肝组织病理学损伤,而对肝组织NO含量则无明显影响。说明龙虎芪黄汤对BCG加LPS所致小鼠急性化学性肝损伤可起到保肝降酶、抗脂质过氧化、减少细胞毒因子释放的作用。 林薇 许云禄 叶蕻芝 郑良朴关键词:免疫性肝损伤 小鼠模型 蕲蛇酶抗栓作用机理的初步分析 被引量:20 1997年 动物实验结果示,蕲蛇酶能裂解纤维蛋白原成为可溶性纤维蛋白,降低血中纤维蛋白原浓度,抑制血小板聚集,对抗由凝血酶诱导的血浆凝块聚集的血浆凝块回缩,因而发挥预防血栓形成作用。对纤维蛋白平板试验无直接溶纤作用,但能增加实验动物血中t-PA活性。 王晴川 刘广芬 许云禄关键词:蕲蛇酶 凝血酶样酶 血栓溶解 药理学 血栓形成 广西圆斑蝰蛇毒凝血因子X激活剂的分离纯化及其止血作用的研究 2010年 目的从广西圆斑蝰蛇毒中分离纯化凝血因子X激活剂(factor X activator of Russell’sviper venom,RVV-X)并研究其止血作用。方法应用阴离子交换色谱和凝胶过滤从广西圆斑蝰蛇毒中分离纯化RVV-X,以复钙化时间进行活性鉴定,以SDS-PAGE测定纯度和分子量。观察RVV-X对家兔肝脏创伤出血模型出血时间及出血量,家兔和肝素化小鼠凝血时间的影响。结果广西圆斑蝰粗毒经阴离子交换色谱获得六个蛋白峰,将RVV-X所在第V峰用凝胶过滤获得的组分A为RVV-X纯品,其凝血活性具有钙依赖性。SDS-PAGE非还原性条件下呈单一蛋白条带,分子量约为97.8kDa,还原性条件下呈二蛋白条带,为一条重链(约76.3kDa)和一条轻链(约21.5kDa)。RVV-X可显著减少家兔肝脏切口的失血量,缩短切口出血时间;能显著缩短家兔及肝素化小鼠凝血时间。结论用层析方法从广西圆斑蝰蛇毒中分离得到的凝血因子X激活剂具有较强的止血活性。 谢芸 许云禄关键词:离子交换 凝胶过滤 止血作用 舟山眼镜蛇毒L-氨基酸氧化酶的分离纯化、理化及酶学性质 被引量:3 2007年 目的从舟山眼镜蛇蛇毒中分离L-氨基酸氧化酶(LAO),测定其理化和酶学性质。方法应用Sephadex G-100凝胶色谱和POROS CM20离子交换色谱分离纯化LAO;Wellner和Lichtenberg法测定LAO活力;SDS-PAGE法测定相对分子质量。结果舟山眼镜蛇蛇毒经Sephadex G-100凝胶色谱和两次POROS 20离子交换色谱后,获得LAO纯品(暂定名NA-LAO)。NA-LAO在非还原和还原条件下相对分子质量均为58 kD左右;其反应最适pH为8.0,最适温度为60℃,对L-苯丙氨酸的米氏常数(Km)为3.08 mmoL/L。结论应用凝胶过滤色谱和离子交换色谱可从舟山眼镜蛇毒中分离纯化LAO。 林丽珊 张志强 陈洲 许云禄关键词:眼镜蛇毒液类 色谱法 色谱法 离子交换 PTEN蛋白在七氟醚后处理激活PI3K/Akt信号通路减轻大鼠脑缺血再灌注损伤中的作用 被引量:4 2014年 目的 评价10号染色体上缺失的磷酸酶与张力蛋白同源物基因(PTEN)蛋白在七氟醚后处理激活磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路减轻大鼠脑缺血再灌注损伤中的作用.方法 选择清洁级SD大鼠108只,体重250 ~ 280 g,2~3月龄,采用随机数字表法,将其分为6组(n=18):假手术组(S组)、缺血再灌注组(I/R组)、I/R+七氟醚后处理组(I/R+S组)、I/R+生理盐水组(I/R+ NS组)、I/R+ PTEN选择性抑制剂pic组(I/R+P组)、I/R+ pic+七氟醚后处理组(I/R+ P+S组).I/R+ P+S组和I/R+P组腹腔注射pic 20 μg/100 g(0.4 ml/100 g),间隔3h给药,共4次,最后1次给药后采用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,I/R+ NS组以等容量生理盐水替代.于再灌注即刻各七氟醚后处理组吸入2.5%七氟醚30 min,其余组吸入医用氧30 min,七氟醚后处理后氧气洗脱15 min,氧流量1 L/min.于再灌注24h,行神经功能缺陷评分(NDS);采用TrC染色测定脑梗死体积,计算脑梗死体积百分比;TUNEL细胞凋亡检测法检测细胞凋亡情况;Western blot法检测磷酸化PTEN (p-PTEN)蛋白和磷酸化Akt(p-Akt)表达水平.结果 与S组比较,其余5组NDS评分、脑梗死体积百分比和凋亡指数升高,p-Akt、p-PTEN蛋白表达上调(P<0.05);与I/R组和I/R+ NS组比较,I/R+S组、I/R+P组和I/R+ P+S组NDS评分、脑梗死体积百分比及凋亡指数降低,p-Akt、p-PTEN蛋白表达上调(P<0.05),I/R+S组、I/R+P组和I/R+ P+S组间比较上述指标差异无统计学意义(P>0.05);I/R组与I/R+ NS组比较上述指标亦差异无统计学意义(P>0.05).结论 七氟醚后处理可通过抑制PTEN蛋白而激活PI3K/Akt信号通路,减轻大鼠脑缺血再灌注损伤. 费海彬 刘荣国 许云禄 陈彦青关键词:PTEN磷酸水解酶 1-磷脂酰肌醇3-激酶 蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶 再灌注损伤