董平
- 作品数：4 被引量：5H指数：2
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- VEGF-C基因治疗继发性淋巴水肿的实验研究
- 背景与目的:
血管内皮生长因子C/(VEGF-C/)属于血管内皮生长因子//血小板源生长因子/(VEGF//PDGF/)家族,是一种多肽类生长因子,于1996年被首次发现,通过酪氨酸激酶受体VE...
- 董平
- 关键词：VEGF-C淋巴水肿
- 文献传递网络资源链接
- 人VEGF-C基因荧光真核表达载体的构建和表达被引量：1
- 2004年
- 目的 :构建含有绿色荧光蛋白基因的人血管内皮生长因子C基因的真核表达载体 ,检测该基因在真核细胞中的表达 ,研究VEGF C基因在淋巴管生成中的作用。方法 :含有绿色荧光蛋白基因的质粒 pEGFP 1通过末端平滑化 ,酶切获得 5’(粘端 )BamHI EGFP XbaI(平端 ) 3’片断 ,已经构建的VEGF C表达载体 pcDNA3.1/VEGF C通过末端平滑化 ,酶切获得 5’ (粘端 )BamHI pcDNA3.1 目的基因 Kp nI(平端 ) 3’ ,两片段连接构建含有绿色荧光蛋白的真核表达载体 ,琼脂糖凝胶电泳并测序检测插入片段的正确性。将该载体通过脂质体转染到真核细胞CHO中 ,观察绿色荧光蛋白在CHO细胞中的表达情况。通过G4 18筛选阳性转染细胞 ,提取总RNA ,行RT PCR ,PCR产物琼脂糖凝胶电泳观察VEGF C基因在CHO细胞中的表达情况。结果 :琼脂糖凝胶电泳证实了插入EGFP片段的大小 ,测序结果证实了插入片段的正确性 ,CHO细胞中看到绿色荧光蛋白的表达 ,RT PCR产物中含有VEGF CcDNA。结论 :成功构建了含有绿色荧光蛋白基因的VEGF
- 董平刘执玉高杰李贵宝毕玉顺田铧丁兆习
- 关键词：血管内皮生长因子真核细胞杂合子基因表达
- VEGF-C真核表达载体的构建和体外表达被引量：2
- 2004年
- 目的 :构建血管内皮生长因子C(VEGF -C)基因的真核表达载体 ,检测其在真核细胞CHO中的表达。方法 :根据人VEGF -CcDNA的序列 ,设计合成一对特异性引物 ,用RT -PCR法克隆乳腺癌细胞MCF -7VEGF -C基因的cDNA ,回收PCR产物连接于克隆载体。扩增 ,质粒提取 ,酶切鉴定并进行基因序列鉴定。酶切回收VEGF -CcDNA全长的基因片段 ,与真核表达载体pcDNA3.1(- )连接称重组质粒进行酶切鉴定。采用脂质体转染法将构建的pcDNA3.1(- ) /VEGF -C转染至CHO细胞中 ,G4 18加压筛选培养。最后用Western -blotting法检测细胞培养上清以及裂解细胞中的VEGF -C蛋白。结果 :基因测序证实RT -PCR产物包含VEGF -CcDNA全长。重组pcDNA3.1(- )中含有VEGF -CcDNA全长序列 ,Western -blotting检测到细胞培养上清中以及细胞内有VEGF -C蛋白存在。结论 :成功构建了人类VEGF
- 董平刘执玉毕玉顺田铧丁兆习
- 关键词：内皮内皮生长因子真核细胞
- 人血管内皮生长因子C基因真核表达载体的构建被引量：2
- 2003年
- 目的:构建人血管内皮生长因子C(vascularendothelialgrowthfactorC,VEGF-C)基因的真核表达载体,以便进一步研究VEGF-C基因在淋巴管生成中的作用。方法:根据人VEGF-C的cDNA序列,设计合成一对5'端分别含有EcoRⅠ和BamHⅠ酶切位点的特异性引物,运用RT-PCR方法克隆人乳腺癌细胞MDA-MB-231中的VEGF-CcDNA(1.26Kb);回收PCR产物(1.28Kb),并将其连接至克隆载体pMD18-T中;重组的pMD18-T在大肠杆菌DH5α内扩增后,经质粒提取、EcoRⅠ和BamHⅠ酶切,筛选出阳性重组子,并进行基因测序鉴定;琼脂糖凝胶电泳回收含有VEGF-CcDNA全长的酶切片断(1.27Kb),然后在DNA连接酶作用下将其与真核表达载体pcDNA3.1㈠连接,重组质粒经EcoRⅠ和BamHⅠ酶切予以鉴定。结果:RT-PCR产物含有VEGF-CcDNA,基因测序显示重组的pMD18-T中含有正确的人VEGF-CcDNA全长序列,重组的pcDNA3.1㈠中含有人VEGF-CcDNA全长序列。结论:成功构建了人类VEGF-C真核表达载体VEGF-C/pcDNA3.1㈠。
- 高杰刘执玉董平毕玉顺田铧李贵宝宋涛
- 关键词：内皮血管内皮生长因子基因真核表达
