莫国玉
- 作品数：25 被引量：59H指数：6
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- 相关领域：医药卫生轻工技术与工程化学工程更多>>
- 治疗性双质粒HBV DNA疫苗的体外转染表达与鉴定
- 探讨治疗性双质粒HBV DNA疫苗转染COS-7细胞后目的基因的表达情况,为进一步研究HBV DNA疫苗的药效学机理提供依据。采用脂质体转染试剂LipofectarnineTM2000介导,将带有preS2+s的重组疫苗...
- 饶桂荣陈光明刘惠萍何晓嫱黄英杨富强莫国玉
- 关键词：COS-7细胞体外转染
- 文献传递
- 抗HBV的治疗性双质粒DNA疫苗的构建及初步药效学研究被引量：4
- 2008年
- 目的:构建抗乙型肝炎病毒(HBV)的治疗性DNA疫苗并进行体外、体内鉴定。方法:采用PCR技术扩增含有HBV包膜中蛋白(preS2.S)抗原基因和hIL-2/hIFN-γ融合蛋白的基因,将目的基因分别亚克隆于pVAX1真核表达载体,并进行酶切和测序分析;转染双质粒于COS-7细胞检测基因及蛋白表达情况;利用Combinatotial Extension(CE)软件模建分析佐剂质粒表达融合蛋白的空间结构;双质粒联合在体电脉冲技术(EP)注射BALB/c小鼠以检测特异性的体液和细胞免疫应答。结果:经酶谱和测序分析表明,构建的双质粒pVAX1/S2.S(pS2.S)和pVAX1/IL-2IFN-γ(pIIF)的基因片段的方向、序列完全正确;ELISA法定量检测双质粒转染COS-7细胞后48小时目的基因(preS2.S和hIL-2/hIFN-γ)的蛋白表达水平较高,HBsAg、IL-2、IFN-γ的含量分别为45.1、10.03、11.5ng/ml;模拟空间结构分析表明佐剂质粒的融合蛋白中两细胞因子的活性部位均裸露在外;小鼠免疫试验结果表明,疫苗pS2.S能诱导健康小鼠的保护性抗-HBs的抗体产生,且具有剂量相关性;佐剂pIIF可显著增强疫苗pS2.S质粒的免疫效果;在EP辅助作用下,质粒pS2.S和pIIF共肌注BALB/c小鼠,低剂量就能诱导较强特异性的细胞和体液免疫。结论:成功构建了抗HBV的DNA疫苗pS2.S及佐剂pIIF质粒,并具有较特异的体内外活性。
- 饶桂荣杨富强莫国玉陈光明
- 关键词：DNA疫苗转染
- 治疗性HBV DNA疫苗、制备方法及应用
- 本发明涉及一种利用基因重组技术构建的HBV双质粒DNA疫苗、制备方法及应用。该HBV双质粒DNA疫苗包括疫苗质粒pS2.S和其佐剂质粒pIIF，其真核表达载体为pVAX1。质粒体外转染非洲绿猴肾细胞(COS-7)，检测到...
- 陈光明饶桂荣罗显荣杨富强莫国玉陈阳述
- 文献传递
- 治疗性双质粒HBV DNA疫苗的纯化与检定被引量：1
- 2007年
- 目的研究双质粒HBVDNA疫苗(pS2.S和pFP)的纯化工艺,并建立质控标准。方法首先对两工程菌(DH5α/pS2.S和DH5α/pFP)的高效发酵菌体采用碱裂解法进行质粒初提;然后通过三步柱层析(依次为分子筛层析、亲和层析、阴离子层析)进行质粒纯化,并检测质粒含量、超螺旋比例、内毒素等,最后对终产品质粒溶液进行全面质量检定。结果质粒初提液通过分子筛层析后,去除了大量的RNA、宿主DNA、内毒素等,再经亲和柱纯化后获得了高比例的超螺旋质粒DNA,达95%,最后经阴离子柱层析有效去除内毒素,并浓缩了质粒,质粒得率为0.9～1.1mg/g菌,质粒总回收率达78%。三批终产品全面质量检定均符合规定。结论建立了稳定的双质粒HBVDNA疫苗(pS2.S和pFP)的纯化工艺及质量控制标准,为进一步研究奠定基础。
- 饶桂荣黄明杨富强莫国玉刘惠萍陈光明
- 关键词：DNA疫苗质粒纯化
- 治疗性双质粒HBV DNA疫苗的体外转染表达与鉴定被引量：4
- 2006年
- 目的:探讨治疗性双质粒HBVDNA疫苗转染COS-7细胞后目的基因的表达情况。方法:以脂质体转染试剂LipofectamineTM2000介导,将带有preS2+S基因的重组疫苗质粒pS2.S和带有hIL2+hIFNγ融合基因的重组佐剂质粒pFP分别转染COS-7细胞,同时设立空质粒转染和未转染细胞为对照组,于转染后24,48,72,96h采用ELISA法检测细胞培养上清的HBsAg、融合蛋白白细胞介素(IL-2)及干扰素(IFN-γ)的表达,并测定融合蛋白的IL-2、IFN-γ活性,采用ECLWesternblotting分析和鉴定目的蛋白preS2+S、IL-2及IFN-γ的分子质量大小。结果:双质粒在转染COS-7细胞后不同时间均可进行分泌表达,且48h时目的蛋白的表达量达峰值,其中表达的融合蛋白具有较高的IL-2和IFN-γ的生物学活性,pS2.S和pFP的转染上清分别在30.6ku和110ku处有特异性阳性反应条带。结论:HBVDNA疫苗质粒pS2.S和佐剂质粒pFP在COS-7细胞的最佳表达时间是转染后48h,并鉴定双质粒表达产物的分子质量大小分别为30.6ku和110ku。
- 饶桂荣刘惠萍何晓嫱杨富强莫国玉陈光明
- 胸腺蛋白溶液保留灌肠治疗溃疡性结肠炎疗效观察被引量：2
- 2005年
- 陈光明杨若才杨富强莫国玉
- 关键词：胸腺蛋白
- 治疗型双质粒HBV DNA疫苗对食蟹猴免疫功能的影响被引量：3
- 2008年
- 目的评价治疗型双质粒HBV DNA疫苗(简称HBV DNA疫苗)诱导食蟹猴HBV特异性体液免疫和细胞免疫的效果。方法30只食蟹猴随机均分为5组(雌雄各半),分别重复肌注高剂量2000μg/kg、中剂量660μg/kg、低剂量200μg/kgEP介导HBV DNA疫苗,330μg/kg EP介导的佐剂质粒和PBS对照。在不同时间点以酶联免疫吸附法(ELISA)及酶联免疫斑点法(ELIS-POT)检测其血清抗-HBs水平并计数外周血单个核细胞(PBMCs)HBsAg特异性分泌IFN-γ的T细胞频数。结果食蟹猴接种不同剂量HBV DNA疫苗后第10周起均产生不同滴度的特异性抗体。16周时EP介导的HBV DNA疫苗高、中、低剂量组各3只食蟹猴中分别有3、2、3只HBsAg特异性IFN-γT细胞计数阳性;29周时高、中、低剂量组全部动物应答呈阳性,其计数结果分别为30.0±13.5SFCs/3×105PBMCs,30.7±26.3SFCs/3×105PBMCs及17.7±6.4SFCs/3×105 PBMCs;而相同时间点佐剂组和PBS对照组3只食蟹猴均为阴性。结论EP介导的HBV DNA疫苗能有效诱导食蟹猴产生HBsAg特异性体液和细胞免疫应答。
- 杨富强刘惠萍莫国玉谢锐姬陈光明侯金林
- 胸腺蛋白治疗消化性溃疡出血的疗效观察被引量：2
- 1999年
- 目的观察胸腺蛋白对消化性溃疡出血的治疗及预防复发作用。方法将185例消化性溃疡合并上消化道出血的患者随机分为单纯奥美拉叹组和奥美拉唑＋胸腺蛋白组，每组分别为91例和94例。统计分析两组消化性溃疡出血的平均止血时间、治疗有效率及随访1年的出血复发率。结果奥美拉唑＋胸腺蛋白组与单纯奥美拉唑组比较，胃溃疡出血的平均止血时间下降有非常显著差异（P＜0．01）；而十二指肠球部溃疡出血的平均止血时间下降有显著差异（P＜0．05）。治疗胃溃疡出血、十二指肠球部溃疡出血的有效率无显著差异（P＜0．05）；但胃溃疡出血及十二指肠球部溃疡出血1年复发率下降分别有显著差异（P＜0．05）和非常显著差异（P＜0．01）。结论胸腺蛋白有缩短消化性溃疡出血的止血时间及预防出血复发作用。
- 张述平杨若才张宁玲陈光明陈光明
- 关键词：胸腺蛋白消化性溃疡出血复发率
- IL-2/IFN-γ细胞因子融合蛋白基因表达质粒瘤内注射联合在体电脉冲治疗恶性肿瘤的研究
- 细胞因子如IL-2、IL-12、IFN-γ和GM-CSF等具有抗肿瘤作用,联合给药作用更强;肿瘤局部注射表达上述细胞因子的质粒DNA,可减少细胞因子重组蛋白的毒副作用,同时由于其表达时间较长,局部浓度较高,故疗效更好;在...
- 莫国玉陈光明杨富强何晓嫱孙希海符立梧梁永钜丁岩陈黎明戴春岭
- 关键词：恶性肿瘤治疗
- 文献传递
- DNA疫苗免疫治疗作用及安全性实验研究
- 陈光明杨富强何晓嫱莫国玉黄明黄英吴乐园饶桂荣谢宗法刘惠萍
- 该课题组构建了HBV preS2.S重组质粒，并以此为DNA疫苗研究基础探讨细胞因子融合蛋白（IL-2/INF-γ）质粒pFP的免疫佐剂作用，同时利用电脉冲（EP）技术探讨提高双质粒DNA在体细胞的转染效果的实验充分说明...
- 关键词：
- 关键词：DNA疫苗细胞因子电转染
