范国才
- 作品数：43 被引量：119H指数：6
- 供职机构：军事医学科学院放射与辐射医学研究所蛋白质组学国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金全球变化研究国家重大科学研究计划北京市科委重大项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程更多>>
- 重组人G-CSF构象异构体的分离与鉴定被引量：2
- 2000年
- 目的 :探索原核基因工程产品质量控制的指标。方法 :以重组粒细胞集落刺激因子(G CSF)为模型 ,将其中构象不均一组分进行分离 ,并对每个成分进行鉴定。结果 :重组人G CSF在大肠杆菌中以包涵体形式表达 ,经纯化和复性后 ,SDS PAGE鉴定为单一蛋白带 ,但在非变性PAGE中出现 3条带 ,继而采用制备型非变性PAGE成功地将 3种成分分离。 3种成分在同样的缓冲体系中分别存放 3个月 ,仍未见互变异构现象。经激光解析飞行时间质谱检测 ,3种成分相对分子质量相同 ,测序表明 ,N端连续的 5个氨基酸残基排列完全相同。结论 :3种成分为重组蛋白的不均一折叠形成的构象异构体。
- 张军权陈惠鹏王清明陈吉中范国才
- 关键词：粒细胞集落刺激因子G-CSF
- rG-CSF受体CRH的基因克隆及在原核中的高效表达被引量：2
- 2000年
- 目的 :研究受体与配体作用机制以及粒细胞集落刺激因子受体 (G CSFR)结合肽类似物的筛选 ,表达rG CSFR胞外CRH区。方法 :利用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)技术从小鼠白血病细胞 (NFS 60 )扩增出rG CSFR胞外CRH区的cDNA片段 ,通过基因重组将该片段克隆于谷胱甘肽转移酶 (GST)融合表达载体pGEX 1λT中。结果和结论 :克隆片段与文献报道的rG CSFR序列完全一致 ,连接产物转化大肠杆菌BL 2 1,经IPTG诱导可获得大量稳定表达的CRH GST融合蛋白。
- 张力群王清明范国才陈吉中陈惠鹏
- 关键词：粒细胞集落刺激因子受体原核细胞PCRCRH
- 一种蛋白质B细胞表位展示系统的构建及验证
- 2012年
- 目的:建立一种能够有效展示蛋白质B细胞表位的载体系统,以用于表位特异性抗体的制备和表位疫苗的设计。方法:选用抗体的可变区作为蛋白质B细胞表位展示的骨架蛋白,B细胞表位的展示部位为CDR3区。全基因合成骨架蛋白基因,通过重叠PCR将B细胞表位编码序列插入到骨架蛋白基因中,原核表达目的蛋白,利用Sephacryl S-100层析柱进行蛋白纯化,用纯化的蛋白按常规方法免疫小鼠,采用ELISA法检测免疫血清的滴度及特异性,通过Western blot和间接免疫荧光技术进一步验证免疫血清对目的蛋白的识别。结果:成功构建了3种表位展示蛋白,均表现出了很好的抗原性,表位展示蛋白免疫血清具有较好的特异性,能够特异识别所展示的B细胞表位。结论:抗体可变区作为骨架蛋白能够很好地展示B细胞表位,免疫小鼠后获得的免疫血清表现出了较好的特异性。
- 刘英富霍景瑞范国才孙志贤王清明
- 关键词：B细胞表位骨架蛋白抗血清
- 大容量人天然抗体库的构建、鉴定及初步应用被引量：7
- 2005年
- 从未经主动免疫的健康志愿者的外周血淋巴细胞中提取总RNA,用RT-PCR扩增人抗体重链(VH)和轻链(VL)可变区基因,得到了6种VH家族基因,11种VL家族基因,这些抗体基因家族覆盖了人抗体基因多样性的95%以上。采用改进的SOEPCR法将VH基因和VL基因连接成人单链抗体(scFv)基因,并克隆到噬菌粒载体pCANTAB5E中,将连接产物电转化大肠杆菌TG1,经辅助噬菌体M13KO7超感染,构建了库容为5.58×109的噬菌体单链抗体库。采用BstNI酶切法证明,构建的噬菌体单链抗体库具有良好的多样性。以TNF-α为靶,从该抗体库中筛选到了抗TNF-α抗体,这说明该抗体库可用于人源抗体的筛选。
- 唐晓明王清明杨俊涛陈吉中范国才汪思应
- 关键词：主动免疫外周血淋巴细胞噬菌体抗体药物生物技术
- HPO结构与受体结合功能关系的初步研究被引量：1
- 2003年
- 肝细胞生成素(HPO)是一种新型细胞因子,在肝再生过程中具有重要的调控作用,研究发现在肝源细胞表面有其特异性受体。为了研究HPO结构与其受体结合功能的关系,构建并表达了HPO及其系列缺失体,利用流式细胞术检测了HPO及其系列缺失体与受体的结合能力。结果表明,在HPO的序列中可能有多个受体结合功能区,其N端的前10位氨基酸残基和C端的第11-20位氨基酸残基对于其受体结合能力是必需的,而C端前10位氨基酸残基对HPO与受体的结合有一定的抑制作用。此外HPO结构的完整性对于其受体结合功能也是必需的。
- 刘刚王清明陈吉中范国才陈惠鹏
- 关键词：肝细胞生成素流式细胞术
- 用噬菌体随机肽库筛选刺激细胞生长的活性小肽
- 2002年
- 目的 筛选刺激ＮＦＳ－６０细胞生长的活性小肽。方法以Ｇ－ＣＳＦ依赖细胞系ＮＦＳ－６０为靶细胞，筛选随机６和１５肽库，经３轮筛选后，随机挑取６０个噬菌体克隆进行生物学活性和结合活性鉴定。结果得到６个刺激ＮＦＳ－６０细胞生长的阳性噬菌体克隆。经细胞ＥＬＩＳＡ检测，这６个小肽都可与ＮＦＳ－６０细胞结合，并且这６个小肽与细胞结合的量，都与所加入的噬菌体的量成正比，经测序未找到共同序列。结论从随机噬菌体肽库中筛到的活性小肽，可以模拟某些生长因子的活性部位，来刺激靶细胞的生长。
- 武婕范国才王清明陈惠鹏
- 关键词：噬菌体肽库粒细胞集落刺激因子G-CSF
- 鼠粒细胞集落刺激因子受体的纯化及鉴定
- 1999年
- 粒细胞集落刺激因子受体（ＧＣＳＦＲ）在鼠ＮＦＳ６０细胞中有较高的含量，通过对ＮＦＳ６０细胞的大规模培养，用ＣＨＡＰＳ及超速离心抽提ＧＣＳＦＲ，经ＧＣＳＦ亲和层析纯化获得ＧＣＳＦＲ，采用ＡＢＣＥＬＩＳＡ进行鉴定．
- 陈惠鹏范国才付炜陈吉中蒋中华张强
- 关键词：G-CSFABC-ELISA纯化
- HeLa S3 DNA转染后XP细胞UV抗性的稳定增加和切除修复基因的定位探索被引量：1
- 1990年
- 通过带有选择标志的质粒pSV_2Neo的基因共转染和第一轮转化的XP细胞DNA的再转染,进一步证明了前文报道的HeLaS3 DNA的切除修复基因在XP细胞中的稳定表达,以及受体细胞UV抗性的稳定增加。通过五种限制性核酸内切酶酶切DNA片段的转染,初步寻找出切除修复基因位于Bg1 Ⅰ,xhoⅠ 酶切片段之中。
- 章扬培白晓彬范国才陈月能徐惠英吴英夏寿萱
- 关键词：基因转染UV
- 抑制O^6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶活性与肿瘤化疗关系的研究
- 1992年
- 肿瘤细胞耐药性是化疗成功的主要障碍。近年来,随着对其形成机制的逐渐揭示,如何逆转和去除肿瘤细胞耐药的分子基础已成为肿瘤化疗研究中的一个重要方向叫。亚硝脲类药物如嘧啶亚硝脲[1-(4-amino-2-methyl-5-pyrimidinyl)methyl-3-(2-chloroethyl)-3-nitrosourea hydrochloride,ACNU]和双氯乙亚硝脲[1,3-bis-(2-chloroethyl)-1-nitrosourea。
- 陈建敏章扬培陈月能吴英范国才
- 关键词：ACNUBCNU肿瘤化疗
- 抗人肝再生增强因子单克隆抗体的研制被引量：3
- 2000年
- 目的利用纯化的重组人肝再生 增强因子(hALR)制备抗hALR的单克隆抗体,建立hALR的检测方法。方法采用杂交瘤技术制备单克隆抗体,经ELISA和免疫印迹证明其特异性。 结果获得了4株分泌抗hALR特异性抗体的杂交瘤细胞 系;无血清培养液效价为1×10^(-2),腹水效价为1×10^(-5);亚类鉴定 表明:2株单克隆抗体为IgG1,另2株为IgG2b;免疫印迹显示:抗体结合抗原的分子量 与hALR相符,为特异性抗hALR抗体。结论通过杂交瘤 技术,获得了抗hALR的单克隆抗体,为以后的工作奠定了基础。
- 章波陈惠鹏范国才陈吉中王清明
- 关键词：肝再生增强因子单克隆抗体杂交瘤
