王金玉 作品数:10 被引量:16 H指数:2 供职机构: 暨南大学第三附属医院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 广州市属高校科技计划项目 广东省科技计划工业攻关项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
纳米氧化铁介导的mdr1反义寡核苷酸对人肠癌细胞的靶向投递作用 2013年 目的:以氧化铁磁性纳米颗粒(PLL-DCIONP)作为载体介导多药耐药基因1(mdr1)反义寡核苷酸(asODN)作用于人肠癌细胞,评价mdr1asODN对人肠癌细胞的靶向投递作用。方法:荧光显微镜观察PLL-DCIONP-asODN-FAM复合物、asODN-FAM体外转染LS174T、HCT-8/VCR细胞,普鲁士蓝(Perle′s blue)铁染色观察PLL-DCIONP-asODN复合物、PLL-DCIONP体外转染LS174T、HCT-8/VCR细胞,MRI测定体外转染细胞磁化率。结果:LS174T、HCT-8/VCR细胞在PLL-DCIONP-asODN-FAM复合物转染组荧光强度明显高于asODN-FAM转染组,LS174T、HCT-8/VCR细胞在PLL-DCIONP-asODN复合物转染组细胞内的蓝色铁颗粒明显多于PLL-DCIONP转染组,PLL-DCIONP-asODN复合物转染后的细胞T2随着细胞数的增加而逐渐缩短,呈明显的衰减势态。结论:PLL-DCIONP-asODN对HCT-8/VCR细胞有靶向投递作用。 王金玉 武兆忠 陈江林 李娜玲 蓝文珍关键词:氧化铁磁性纳米颗粒 反义寡聚核苷酸 肠癌 反义寡脱氧核苷酸技术在分子影像中的应用 2009年 反义寡脱氧核苷酸(ASODN)技术是根据核酸杂交原理,设计针对特定靶序列的ASODN,从而抑制特定基因的表达。分子影像学是一门在细胞与分子水平对活体生物过程进行描述和测量的新兴交叉学科。ASODN技术以分子影像为技术平台,通过图像达到无创、实时、活体、特异、精细地直接显示细胞或分子水平的生理和病理过程。该文主要阐述ASODN的作用机制、ASODN的化学修饰、ASODN技术的进展及其在分子影像领域的应用。 王金玉 武兆忠关键词:反义寡脱氧核苷酸 分子诊断技术 分子影像 纳米氧化铁颗粒表征分析及其对体外标记肿瘤细胞磁信号变化的影响 被引量:7 2010年 背景:超顺磁性纳米氧化铁颗粒的粒径小,且具有良好的水溶性、组织相容性、超顺磁性及表面积效应,使其应用于磁共振成像和作为生物大分子等药物载体成为可能。目的:构建葡聚糖包被的超顺磁性四氧化三铁纳米颗粒(dextran coated iron oxide nanoparticles,DCIONP),分析其主要物理性质和磁学特性,并探讨其标记肿瘤细胞后对肿瘤细胞磁学特性的影响。方法:通过化学共沉淀法制备葡聚糖包被的DCIONP。透射电镜和X射线粉末衍射法分析DCIONP的粒径和晶体结构,磁共振仪测定其弛豫率等主要物理和磁学参数。体外DCIONP分别标记人骨肉瘤MG63细胞、人肝癌HGP2细胞和鼠骨髓间充质干细胞后,用普鲁士蓝铁显色法和透射电镜观察DCIONP粒子在细胞内的分布,1.5T磁共振仪测量DCIONP体外标记肿瘤细胞后对肿瘤细胞磁信号的影响。结果与结论:X射线衍射分析确定所制备的葡聚糖包被的磁性纳米粒子主要为Fe3O4晶体,氧化铁核心约为10nm,具有超顺磁性,其弛豫率达3.936×106mol/s。体外标记3种细胞后,见DCIONP主要分布在细胞核中,细胞浆中所占比率相对较小。体外磁标记后,肿瘤细胞的T2信号随着细胞数的增加而逐渐缩短,且2×109L-1和2×1010L-1磁标记细胞的磁信号呈明显的衰减状态。结果证实所制备的DCIONP粒子物理性能稳定,磁标记肿瘤细胞后在MR上能产生特征性的低信号。 武兆忠 刘敏 李志铭 张昊 林伟 王金玉 李园关键词:肿瘤 细胞 磁共振成像 纳米生物材料 纳米氧化铁颗粒表征分析及其对体外标记肿瘤细胞磁信号变化的影响 武兆忠 刘敏 李志铭 张昊 林伟 王金玉 李园雌激素膜快速效应对人成骨样细胞MG63 OPG mRNA快速表达水平的影响 被引量:2 2009年 目的探讨17β-雌二醇(E2)膜快速效应对人成骨样细胞MG63的OPG mRNA快速表达水平影响。方法采用RT-PCR法分析经E2快速作用后的MG63细胞中OPG mRNA的表达水平。结果E2膜快速效应能诱导人成骨细胞MG63 OPG mRNA表达水平出现一个快速增高现象,其表达高峰时间为E2作用后的10 min左右,而且这一现象能被G蛋白藕联抑制苏拉明所抑制。结论而E2诱导的人成骨样细胞MG63中OPGmRNA表达水平的快速增高,可能与雌激素启动了雌激素膜受体介导的G蛋白藕联受体调节的磷脂酶C/腺苷酸环化酶通路有关。 武兆忠 刘敏 冯鉴强 林伟 邬恒夫 王金玉 李园关键词:护骨素 雌激素 人成骨样细胞 葡萄糖介导的酸化对细菌性骨关节炎摄取99Tcm(V)-DMSA水平的影响 武兆忠 刘敏 冯鉴强 林伟 邬恒夫 王金玉 李园RNA干扰基因敲低雌激素受体β对雌激素诱导人成骨样细胞护骨素表达的影响 被引量:2 2007年 RNA干扰敲低人成骨样细胞株MG63中雌激素受体β后,RT-PCR法发现不同浓度的17β-雌二醇均能上调MG63细胞中的护骨素mRNA表达水平,其中以10^(-7)mol/L的作用最强。而这种作用不能被G蛋白抑制剂suramin所抑制。提示雌激素受体β可能不涉及雌激素上调MG63细胞护骨素表达的调控作用。 武兆忠 刘敏 冯鉴强 林伟 张昊 吴长伟 王金玉关键词:RNA干扰 护骨素 雌激素受体Β 人成骨样细胞 体脂比率与OPG基因启动子G^(209)-A和T^(245)-G多态性联合作用与骨质疏松症发生的关系 被引量:2 2007年 目的探讨护骨素(OPG)基因启动子区G209-A和T245-G多态性及其脂肪保护作用、联合作用对绝经后正常妇女和绝经后骨质疏松症妇女骨密度(BMD)的影响。方法随机抽取25个样本经SSCP-PCR法寻找异常迁移条带,再采用测序方法确定扩增区域中的单核苷酸点突变位点,最后采用PCR-限制性片段长度法(RFLP)对所有样本进行分析;双能X线吸收法测定BMD。结果73例绝经后骨质疏松症妇女和61例绝经后正常妇女OPG启动子扩增区中找到两个单核苷酸点突变多态性位点,G209-A和T245-G。分析显示这两个多态性位点基因型频率在两组实验对象中的分布均符合Hardy-Weinberg定律。G209-A和T245-G多态性位点单一基因型和复合基因型的分布在两组实验对象之间没有显著性差异(P>0.05)。对各单一基因型及其复合基因型的BMD分析显示:绝经后骨质疏松症妇女的腰椎和髋部BMD明显低于绝经后正常妇女,同时,绝经后骨质疏松症妇女的全身体脂比率也明显低于正常妇女。结论G209-A和T245-G多态性对绝经后骨质疏松症和绝经后正常妇女的骨量影响没有协同作用;单一的和复合的G209-A、T245-G多态性各基因型不能作为预测中国汉族妇女是否发生骨质疏松症的遗传标志,但可能是骨质疏松症发生的易感基因,并且合理的含脂饮食有利于骨保护。 武兆忠 冯鉴强 刘敏 林伟 黄彦 史群伟 王金玉关键词:骨密度 护骨素 RNA干扰基因敲低雌激素受体β对人成骨样细胞生长的影响 被引量:1 2008年 目的观察经特异性小干扰RNA(small interfere RNA,siRNA)下调人成骨样细胞株MG63的雌激素受体β(ERβ)后对其生长状况的影响。方法利用计算机辅助设计并合成ERβsiRNA前体基因后,定向克隆入pSilencer4.1-CMV质粒中,构建重组的ERβsiRNA表达载体并测序鉴定。由脂质体介导重组质粒稳定转染入人成骨样细胞株MG-63,潮霉素筛选阳性抗性克隆细胞。RT-PCR法检测ERβ基因在人成骨样细胞株MG-63的表达,抗生物素蛋白-生物素-过氧化物酶复合体法(ABC)分析ERβ蛋白在人成骨样细胞株MG-63内的表达与定位。MTT法测ERβ基因被特异性下调后对MG-63细胞生长的影响。流式细胞术分析ERβsiRNA对人成骨样细胞株MG-63细胞生长周期的影响。采用改良Gomori氏钙钴法分析ERβsiRNA对人成骨样细胞株MG-63表达碱性磷酸酶的影响。结果构建表达ERβsiRNA的重组真核表达载体,并成功地下调了人成骨样细胞株MG-63的ERβ基因,而ERβsiRNA下调人成骨样细胞株MG-63的ERβ对细胞的生长特性无明显影响。结论成功地构建了ERβ下调的人成骨样细胞模型,该模型为进一步研究雌激素及其受体对骨代谢影响的分子机制提供了基础材料。 武兆忠 刘敏 冯鉴强 林伟 王金玉 李园关键词:RNA干扰 雌激素受体Β 人成骨样细胞 细胞模型 氧化铁磁性纳米颗粒作为MDR1反义寡聚核苷酸载体的构建 被引量:2 2010年 目的:构建磁性纳米MDR1反义探针,评价以氧化铁磁性纳米颗粒作为载体转染MDR1反义基因的可行性。方法:应用多聚赖氨酸修饰葡聚糖包裹氧化铁纳米颗粒(dextrancoatedironoxidenanopartieles),并将此复合物与肿瘤多药耐药反义基因结合。采用琼脂糖凝胶电泳分析氧化铁磁性纳米颗粒结合MDR1反义基因的能力,结合氧化铁纳米颗粒作为载体进行荧光标记的反义寡聚脱氧核苷酸(asODN)体外细胞转染实验。结果:琼脂糖凝胶电泳显示纳米氧化铁在不同的pH值及各种质量比均有良好的DNA结合能力。纳米氧化铁可作为基因载体将MDR1反义基因转染细胞,荧光显微镜可观察到发绿色荧光的细胞,普鲁士蓝铁染色观察到细胞内的蓝色铁颗粒。结论:成功构建了MDR1反义基因磁性纳米颗粒。纳米氧化铁可作为基因载体转染人细胞。 王金玉 武兆忠 李园关键词:氧化铁磁性纳米颗粒 多药耐药 反义寡聚核苷酸