王洪美
- 作品数：37 被引量：213H指数：7
- 供职机构：北京市虹天济神经科学研究院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金首都医学发展科研基金北京市优秀人才培养资助更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 两种冻存液中海马神经元细胞复苏后生物学特性比较
- 2010年
- 目的：建立海马神经元适宜的冻存方法。方法：将新生24h以内的大鼠海马消化成单个细胞后分别直接冻存于血清浓度不同的冻存液中，复苏后进行台盼蓝染色观察细胞活性；培养后观察其生长状态并在第7天固定细胞，分别进行Hoechst，微管蛋白（Tubulin）和神经胶质纤维酸性蛋白（GFAP）显色后，荧光显微镜下计数海马神经元、胶质细胞的百分率，从而建立最佳冻存方法。结果：冻存于高浓度血清冻存液中的神经元百分率为87．5％，冻存于低浓度血清冻存液中的神经元百分率为73．8％，高浓度血清冻存液中的细胞复苏后的状态及神经元存活率明显优于保存于低浓度血清冻存液中的；而冻存于高低浓度血清冻存液中的胶质细胞百分率分别为9．5％和16．5％，胶质细胞在高浓度血清的相对含量明显低于低血清组。结论：高浓度血清冻存液更利于海马神经细胞冻存后的复苏和生长。
- 王洪美胡琴肖娟姜晓荣赵艳廷曹敬丽任玉水田国忠黄红云
- 关键词：海马神经元冻存微管蛋白神经胶质纤维酸性蛋白
- 三种人胚胎许旺细胞培养方法的比较被引量：2
- 2011年
- 目的比较三种不同培养方法对许旺细胞纯度影响。方法应用三种不同的培养方法对10份人胚胎样本的坐骨神经分别采用植块培养法、差速贴壁法、分次消化法进行培养观察。并采用S100免疫荧光化学方法鉴定许旺细胞,Hoechst染色标记细胞核,统计许旺细胞纯度。结果三种培养方法其获得的细胞纯度分别为:分次消化培养法为90%,差速贴壁法为75%,植块培养法为67%,分次消化培养法获得的细胞纯度明显高于其他两组(P<0.05)。结论分次消化培养法较差速贴壁法、植块培养法更易获得高纯度许旺细胞。
- 王洪美胡琴姜晓荣肖娟任玉水陈琳黄红云
- 关键词：许旺细胞坐骨神经S100蛋白质类纯化
- 胚胎嗅鞘细胞移植治疗肌萎缩侧索硬化症的近期疗效(英文)被引量：10
- 2007年
- 目的探讨人胚胎嗅鞘细胞（olfactory ensheathing cells，OECs）移植治疗肌萎缩侧索硬化症（amyotrophic lateral sclerosis，ALS）患者的近期安全性和有效性。方法回顾性分析2003年2月～2006年4月，采用OECs移植手术治疗的327例ALS患者的临床资料。男241例，女86例。年龄20～84岁（51．6±11．1岁）。病程4．8个月～13年（2．9±2．0年）。根据细胞植入部位分为3组：A组29例，细胞植入脊髓内；B组（6例），细胞分别植入脊髓及双额叶放射冠；c组292例，细胞植入双额叶放射冠。脊髓移植方法，病变处分两点共注入50μlOECs悬液，细胞数约1×10^5个。脑部移植方法，双侧大脑放射冠处各注射50μlOECs悬液，细胞数约2×10^6个。结果随访4周，比较术前和随访肌萎缩侧索硬化症功能量表分数变化。A组17．2±8．6增至20．1±9．7（P〈o．05），B组24．2±6．8增至25．7±6．6（P〉0．05），C组20．3±8．6增至22．0±9．4（P〈0．001），3组间改善程度差异无统计学意义（P〉0．05）。4周神经功能总改善252例（77．1％）。术后4周行肌电图检查的患者261例（79．8％）显示术后自发电位减少或消失，收缩时肌电波幅较术前明显降低，电位密度明显增加。16例（4．9％）术后出现不良反应，包括头痛、短期发热、癫痫大发作、中枢神经系统感染、肺炎、呼吸衰竭、泌尿系感染、心力衰竭及肺栓塞，其中4例（1．2％）死亡。结论OECs移植术后4周能阻止或逆转ALS的病情恶化。
- 陈琳黄红云张健张峰刘彦铖郗海涛王洪美顾征宋英伦李荧谭可
- 关键词：肌萎缩侧索硬化症
- 胚胎嗅鞘细胞再移植治疗晚期脊髓损伤1例被引量：4
- 2007年
- 目的:对晚期脊髓损伤患者开展嗅鞘细胞再移植治疗,探讨其对神经功能的继续改善效果。方法:①患者男性,27岁,哈萨克斯坦籍,2001年9月20日遭霰弹枪击急诊手术后,双下肢不能运动及感觉消失,尿便失禁,右下肢阵发性钝痛。诊断为陈旧性完全性脊髓损伤(T12),美国脊髓损伤协会标准脊髓功能分级为A级。2002年9月30日第1次行脊髓胚胎嗅鞘细胞移植术,2007年2月5日行第2次脊髓胚胎嗅鞘细胞移植术。治疗方案患者知情同意。②取4个月流产胚胎(孕妇及其家属均知情同意)的嗅球,消化成单个嗅鞘细胞后培养2周,细胞浓度约2×1010L-1。于患者相应脊髓损伤上端(平T11椎体)做1个锁孔,直径约3cm,在脊髓损伤部位与正常脊髓交界处沿中线于无血管区,分两点用4.5号细针共注入100μL(第1次手术)、50μL(第2次手术)嗅鞘细胞悬液,细胞数均为1×106个。第2次移植术前进行供、受体细胞HLA配型,术后口服FK506胶囊2mg,2次/d,共42d。结果:①第1次术后3个月,排尿能控制6h,双足运动功能改善,性功能改善,阴茎勃起功能改善,疼痛减轻。②第2次术后10d,双下肢双足皮肤泌汗功能改善,右下肢疼痛减轻,腹部皮肤感觉稍有好转,针刺觉左侧由术前T10皮节消失好转至T10减退。较第2次移植前椎旁躯体感觉诱发电位有所改善,双侧椎旁电位从T10下降到T12。结论:胚胎嗅鞘细胞二次移植能继续改善晚期脊髓损伤患者的神经功能。但移植的细胞数量、容积、注射点位置等需深入探讨。
- 陈琳黄红云江昭张峰张峰郗海涛张健刘彦铖
- 关键词：脊髓损伤脊髓移植再手术嗅鞘细胞
- 生物反应器培养间充质干细胞的研究现状
- 2011年
- 间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)在一定条件下进行体外培养和诱导分化,能向神经、成骨、软骨、脂肪、肌腱、肌肉和心肌等细胞方向分化,是修复再生医学重要的种子细胞。虽然MSCs取材方便,易于培养[1-3]。
- 余慧黄红云黄红云陈琳
- 关键词：生物反应器MSCS微载体间充质干细胞
- 人胚鼻黏膜神经干细胞的分离提纯及培养
- 目的:探讨人胚胎鼻黏膜神经干细胞的分离、纯化方法,以及培养过程中血清的应用。方法:选取优质胚胎,无菌分离上鼻甲、中鼻甲及其相对应的鼻中隔的被覆黏膜,DMEM/F12充分清洗,剪切,悬浮于中性蛋白酶和胶原酶的混合酶中37℃...
- 姜晓荣任玉水王洪美刘婧媛肖娟赵艳秀陈琳黄红云
- 关键词：神经干细胞传代
- 文献传递
- 来源于人胚室下区神经干/祖细胞的贴壁法培养和鉴定被引量：1
- 2010年
- 目的建立有效的人胚胎神经干/祖细胞分离及纯化方法以达到临床需要。方法无菌取胎脑室管膜下区组织,经反复机械吹打制备细胞混悬液,采用贴壁法进行体外培养、传代。传代后用Nestin进行细胞鉴定。结果应用贴壁法进行胎脑室管膜下区神经干/祖细胞的培养能够稳定传代20代以上;共聚焦显微镜下可见Nestin阳性细胞表达呈递增趋势,传至P3(passage3)阳性率为35%,P7为79%,P12为90%,P15为99%。传到前七代时分别做细胞存活率鉴定,可达(82.57±1.38)%。结论成功建立了来源于人胚室下区的神经干/祖细胞的贴壁法培养,为该细胞移植治疗神经系统疾病提供了技术方法支持。
- 姜晓荣王洪美陈琳田国忠包建玲任玉水黄红云郗海涛
- 关键词：细胞培养人胚胎免疫细胞化学
- 嗅鞘细胞移植入淀粉样前体蛋白转基因小鼠脑内降低β淀粉样蛋白沉积
- 2010年
- 目的观察嗅鞘细胞移植入淀粉样前体蛋白(APP)转基因小鼠脑内后的存活和迁移状况及其对模型β淀粉样蛋白沉积的作用,以进一步探索嗅鞘细胞移植对阿尔茨海默病的治疗效果。方法取自发绿色荧光蛋白的新生3d龄增强型绿色荧光蛋白(EGFP)转基因小鼠,体外分离培养嗅球嗅鞘细胞,在小鼠脑立体定位仪的固定下,参照AP小鼠脑立体定位图谱,将收集的嗅鞘细胞移植入APP转基因小鼠脑内。移植1个月后,取脑组织冷冻切片,在双光子共焦显微镜下观察细胞存活和迁移状况并采集图像。移植1个月后,行荧光免疫组织化学和免疫印迹法检测淀粉样蛋白沉积,每组4只。结果嗅鞘细胞移植入APP转基因小鼠脑内存活良好,并以移植点为中心向外迁移,部分绿色荧光细胞呈现成血管现象,移植之后APP转基因小鼠脑内的β淀粉样蛋白沉积减少,APP表达明显减少(P<0.05)。结论嗅鞘细胞对减少APP转基因小鼠脑内淀粉样蛋白沉积有一定帮助。
- 曹敬丽刘婧媛肖娟姜晓荣任玉水王洪美周长满黄红云
- 关键词：Β淀粉样蛋白细胞移植免疫印迹法APP转基因小鼠
- 人胚胎嗅鞘细胞移植供、受者HLA配型方法介绍
- 陈琳方明俊黄红云王洪美姜晓荣任玉水田国忠
- 临床应用型人脐血间充质干细胞分离培养与鉴定
- 2010年
- 目的探讨能够达到临床细胞治疗标准的人脐血间充质干细胞的体外培养与纯化方法。方法以15%FBS/DMEM作为培养基,采用淋巴细胞分离液间接分离法,分离MSCs,以贴壁培养法进行原代培养和纯化。倒置显微镜下观察生长状态和形态学变化,共聚焦显微镜下观察细胞表面抗原CD34,CD44免疫组化染色的鉴定。结果细胞计数显示人脐血间充质干细胞产品的细胞成活率大于95%,其纯度大于85%,符合卫生部第三类医疗技术的有关标准。结论脐带血内含MSCs,可在体外分离培养纯化增殖,获得大量相对纯化的MSCs,达到临床应用水平。
- 肖娟陈琳王洪美李莹任玉水黄红云
- 关键词：脐血间充质干细胞细胞培养免疫组化
