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人类新的肝癌高表达基因HCCA3的克隆、鉴定及其临床病理学意义被引量：1: 2003年; 目的　克隆新的肝癌相关基因并探索其在肝癌发生发展中的作用机制。方法　采用mRNA差异显示技术 ,分析肝癌和癌旁组织差异表达基因谱 ,获得的差异表达基因片断作为探针 ,筛选胎盘cDNA文库 ,以获得全长cDNA序列。通过Northern印迹杂交的方法 ,分析所获得的新基因在 42例肝癌组织中的表达情况 ,并分析其临床和病理学意义。结果　克隆了一个新的肝癌相关基因 ,命名为HCCA3 ,该基因的全长cDNA 170 6bp ,编码一个 2 6 4个氨基酸的蛋白质 ,在人类肝癌中广泛表达 ( 78.6 % ,33/42 ) ,并与肝癌的浸润转移密切相关。结论　HCCA3是一个新的人类基因 ,在肝癌中的异常高表达可能对肝癌的发生发展具有重要的促进作用。; 洪毅曾锦章傅骁勇郭婷婷邱秀华王征旭刘淑琴吴孟超王红阳; 关键词：肝癌高表达基因克隆基因表达 MRNA

人原发性肝癌组织内抑癌基因PTEN的突变检测被引量：3: 2003年; 目的检测人原发性肝细胞性肝癌(HCC)组织中抑癌基因PTEN的突变。方法采用PCR—SSCP技术和DNA测序技术检测60例HCC组织中PTEN的突变。结果在60例配对HCC标本中，发现了共6个突变位点的存在。其中，出现在外显子内的突变有1个，即在31B号标本第4外显子中5’—侧翼下游13bP处检测到C→T的突变(89031C→T)，该突变导致了PTEN蛋白第84伉氨基酸由精氨酸变为赖氨酸。另外5个突变均位于内含子中，包括在34B号标本的第4外显子3’-侧翼下游106bP处的5碱基(AATAG)缺失突变、在9B号标本的第4外显子3’—侧翼下游67bP处检测到的一个G→T点突变(89125G→T)、在33B号标本的第6外显子3’—侧翼下游58bP处检测到的一个T→A点突变(110285T→A)、在44B号标本的第8外显子5’—侧翼上游29bP处检测到的一个C—T点突变(118833C→T)、在22B号标本的第8外显子5’—侧翼上游82bP处检测到一个A→C点突变(118780A→C)。在我们选择的SK—HEP—1、HePG2、Huh—7、ChangliVer和WRL68肝脏细胞中未检测到PTEN基因的突变。结论肝癌组织中PTEN突变可能参与了原发性肝癌的形成。; 万兴旺江明邱秀华谈冶雄严中华洪毅王红阳吴孟超; 关键词：原发性肝细胞性肝癌抑癌基因 DNA测序技术

肝癌相关基因HCCA2的克隆及其与肝癌的相关性研究被引量：5: 2001年; 目的　研究和克隆新的肝癌相关基因 ,探索肝癌发生的分子基础。方法　采用mRNA差异显示技术 ,分析肝细胞癌和癌旁组织间基因的差异表达情况 ,获得差异表达基因片断。用此基因片断作为探针 ,通过筛选胎盘cDNA文库 ,以获得该基因cDNA全长 ,并用Northern印迹杂交的方法 ,分析所获得的新基因在 43对肝细胞癌、对应癌旁组织中的差异表达和在正常组织中的分布。结果　克隆了一个新的肝癌相关基因HCCA2的全长cDNA ,其在人体正常组织中分布较为广泛 ,在正常肝组织中不表达。该基因在 43对肝癌组织中表达的阳性率是 79% (34/ 43)。它的表达与肝癌包膜的完整性、Ki 6 7蛋白的表达相关 (P <0 .0 1)。结论　肝癌差异表达新基因HCCA2可能与肝癌细胞的浸润和增殖能力有关。; 王征旭王红阳陈正军曾锦章洪毅吴孟超; 关键词：肝细胞癌单克隆抗体基因表达

受体型酪氨酸磷酸酶的抗体制备与细胞定位研究被引量：1: 2003年; 张鹏鄢和新董辉何雅琴洪毅王红阳; 关键词：抗体细胞定位

激光显微切割结合实时荧光聚合酶链反应定量检测肝脏中转化生长因子-β1和-β2的表达被引量：16: 2003年; 目的　定量检测转化生长因子 β1(TGF β1)和TGF β2在大鼠正常肝脏中肝细胞和汇管区间质细胞中的表达水平。方法　激光显微切割技术分离大鼠正常肝脏中的肝细胞和结缔组织细胞 ,实时荧光定量聚合酶链反应 (PCR)技术分析TGF β1和TGF β2的mRNA含量。结果　激光显微切割技术成功地将肝脏结缔组织细胞从肝细胞中分离。TGF β1的mRNA含量在肝细胞中是TGF β2的 11倍左右 ,在肝脏汇管区间质细胞中接近TGF β2的 5倍左右。结论　激光捕获显微切割技术结合实时荧光定量PCR技术能够针对性地精确分析不同的和极少量的细胞中基因表达 ,在肝脏中TGF β1的合成多于TGF β2。; 满晓波唐亮邱秀华谈冶雄洪毅吴孟超王红阳; 关键词：肝脏激光显微切割实时荧光聚合酶链反应转化生长因子-Β1 转化生长因子-Β2 基因表达

一组肝癌相关基因的克隆鉴定与功能研究: 王红阳曾锦章傅骁勇王征旭万兴旺洪毅刘淑琴邱秀华曹惠芳唐亮吴孟超; 该研究进行了大规模肝癌相关基因的筛选，获得一批经临床样品验证的、有重要功能意义的新基因。在国际上首次报道了3个新的肝癌相关基因HCCA1、HCCA2和HCCA3，研究了这些基因在肝癌中的表达情况及病理学意义，这些基因在肝...; 关键词：; 关键词：原发性肝癌基因克隆鉴定信号转导

应用mRNA差异显示技术克隆新的肝癌相关基因的研究被引量：9: 2000年; 目的　研究和克隆新的肝癌相关基因 ,探讨肝癌发生的分子学基础。方法　采用mRNA差异显示技术 (DDPCR)和逆转录聚合酶链式反应、测序等方法 ,分析 2对肝细胞癌和癌旁组织基因表达差异情况 ,并用Northern印迹杂交的方法 ,分析所获得的基因片段在 12对肝细胞癌和癌旁组织中的表达。结果　使用 5条上游引物、4条下游引物 ,从 2对肝癌和癌旁组织中获得 6个新的肝癌组织高表达基因片段STW 1、STW 2、STW 3、STW 4、STW 5和STW 6 ,其在肝癌组织中表达的阳性率分别是 :83 .3% (10 /12 )、6 6 .7% (8/12 )、5 0 .0 % (6 /12 )、83 .3 % (10 /12 )、5 8.3% (7/12 )和 6 6 .7%(8/12 ) ,且所分析的 12对肝癌组织都存在 2种以上的新基因片段表达。结论　用DDPCR技术获得6个新的肝癌差异表达基因片段 ,说明肝癌的发生、发展是多基因参与的复杂过程。; 王征旭曾锦章洪毅吴孟超王红阳; 关键词：肝细胞癌基因表达 MRNA 克隆

应用mRNA差异显示技术克隆新的肝癌相关基因: 肝癌的发生、发展目前认为亦是多因素参与的复杂过程,寻找肝癌差异表达基因,并确定其在肝癌发生、发展中的作用,对肝癌的诊断、预防和治疗均具有重大意义.本文利用mRNA差异显示技术(differential display p...; 王征旭曾锦章洪毅王红阳吴孟超; 关键词：MRNA 差异显示技术肝癌; 文献传递

激光显微切割结合蛋白质组学技术分析DDAH-1在肝细胞癌表达的变化被引量：4: 2007年; 目的:应用激光显微切割(laser capture microdissection,LCM)结合蛋白组学技术筛查肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织及其癌旁组织的差异表达蛋白,分析二甲基精氨酸二甲胺水解酶1(dimethylarginine dimethylaminohydrolase1,DDAH-1)在肝细胞癌表达的变化。方法:选取2003-2006年间东方肝胆外科医院原发性肝细胞癌患者的手术切除标本40例。利用LCM技术分离捕获肝癌组织及癌旁组织的肝实质细胞,应用二维凝胶电泳技术(two dimensional gel electrophoresis,2-DE)筛选全部标本共同差异表达频率>80%、差异强度>3倍的蛋白质点;应用电喷雾串联质谱(electrospray ionisation tandem mass spectrometry,ESI-MS/MS)及基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)对差异蛋白点进行质谱鉴定分析;采用Western blotting及免疫组化对差异蛋白DDAH-1进行检测。结果:2-DE筛查获得在肝癌及癌旁组织差异表达的蛋白质点共20个,通过质谱鉴定获得12个蛋白质,其中5个在肝癌组织表达上调,7个下调;这12个蛋白质与细胞代谢、增殖、分化及信号调控相关,其中的DDAH-1是参与调控一氧化氮相关通路的重要酶。Western blotting检测显示,20例标本中16例DDAH-1表达明显升高;免疫组化检测证实,10例标本DDAH-1全部呈强阳性表达。结论:肝细胞癌组织细胞中筛查到12个差异表达蛋白质,其中的DDAH-1在肝癌组织中表达上调,其有可能在肝癌发生、发展过程中起重要作用。; 王庆洪毅胡和平谈冶雄艾建华陆豪杰刘淑琴王红阳; 关键词：肝细胞癌激光捕获显微切割差异表达蛋白

核糖体蛋白L26基因的克隆及其在肝癌中的表达被引量：12: 2001年; 目的　克隆和分析与肝细胞癌发生发展相关的基因。方法　应用差异显示技术获得2 4例肝癌及其癌旁组织表达差异的目标基因片段 ,对其进行克隆、测序 ,并在基因数据库中检索进行同源性比较 ,应用印迹法 (Northern)杂交技术研究其正常组织分布和肝癌中表达的变化。结果　肝癌组织中获得一目标基因片段经测序证明其来源于一已知基因核糖体蛋白L2 6(RPL2 6) ,North ern杂交分析表明该基因在各种组织中广泛表达 ,83 .3 %原发性肝癌患者癌组织中RPL2 6表达显著高于癌旁组织。结论　RLP2; 曾锦章洪毅王红阳王征旭陈正军吴孟超; 关键词：肝细胞癌基因克隆核糖体蛋白基因表达

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