沈宏辉
- 作品数：73 被引量：356H指数：11
- 供职机构：解放军第302医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- 用RACE技术对一株肠道病毒3′端进行扩增和序列分析被引量：3
- 2006年
- 目的应用3′RACE技术对一株本室分离肠道病毒基因组3′末端进行扩增,并对其核苷酸序列进行比较分析。方法提取病毒总RNA,以锚定oligdT(17)引物进行逆转录,用特异引物及锚定引物进行3′RACE扩增,将PCR产物进行克隆、测序和序列分析。结果获得了该病毒的3′端核苷酸序列,同源性分析结果显示该肠道病毒的核苷酸序列与肠道病毒76、89、90、91型的同源性最高为90%左右,而与其他型别的肠道病毒的同源性均小于80%;推导的氨基酸同源性与肠道病毒76、89、90、91型均在90%以上。结论用RACE技术对肠道病毒3′端进行扩增及序列分析,证明该病毒属新型肠道病毒类,为进一步研究该病毒的分子生物学特性奠定了基础。
- 侯俊沈宏辉胡燕朱雷王志杰雷厉貌盼勇
- 关键词：肠道病毒属DNA
- 人源化鼠嵌合肝动物模型研究进展
- 2012年
- 动物模型是人类疾病研究、发病机制、药物研发的重要工具,对于困扰人类健康的肝脏疾病还没有理想的动物模型能有效地反映出人类疾病发病的机制。建立人源化鼠嵌合肝动物模型,对于研究人类肝脏疾病的发病机制、疫苗和药物的研发及疾病的诊治等方面都具有十分广阔的应用前景。
- 李瑞生李晓娟沈宏辉郭立新
- 关键词：肝细胞移植干细胞移植
- 影响慢性重型肝炎预后的单因素研究——附520例临床分析被引量：59
- 2002年
- 目的 分析影响慢性重型肝炎 (慢重肝 )预后的单因素。方法 使用SPASS及STATA软件 ,对 5 2 0例慢重肝预后的单因素进行分析。结果 ①≥ 4 0岁患者的病死率明显升高 ,差异有非常显著性 (P <0 .0 0 1) ,男、女患者及不同变重的基础患者的病死率差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ;②白细胞(WBC)≥ 10 .0× 10 9 L或血小板 <10 0× 10 9/L患者的病死率明显升高 ;③随着AST ALT的比值与血清总胆红素 (TBil)不断升高、出现酶胆分离现象、凝血酶原活动度 (PTA)、血清总胆固醇 (Tc)、血清胆碱酯酶活力及白蛋白 (Alb)不断降低 ,病死率逐渐上升 ;④随着腹水、电解质紊乱及自发性腹膜炎等并发症的增多 ,病死率升高 ,以上在统计学上差异均有非常显著性。结论 ≥ 4 0岁、WBC≥ 10 .0× 10 9/L、血小板 <10 0× 10 9/L、AST ALT的比值、TBil、酶胆分离现象、PTA、Tc、血清胆碱酯酶活力、Alb及并发症等是影响慢重肝预后的重要因素 ,动态监测TBil、PTA、Tc和胆碱酯酶等实验室指标 ,积极防治各类并发症是降低病死率重要措施。
- 邹正升陈菊梅辛绍杰邢汉前李保森李建宇沈宏辉刘艳萍
- 关键词：慢性重型肝炎预后单因素
- 苦参碱类生物碱联合恩替卡韦抗耐药HBV的作用效果及机制分析被引量：14
- 2017年
- 目的:研究苦参碱类生物碱联合恩替卡韦抗耐药乙型肝炎病毒(HBV)的作用效果以及对p38 MAPK,钠离子-牛磺胆酸共转运蛋白(NTCP)表达的影响。方法:以解放军第302医院自行构建的恩替卡韦耐药乙型肝炎病毒复制细胞株Hep G2.A64为模型,采用CPE,CCK-8分别考察苦参碱类生物碱氧化苦参碱、苦参碱、槐果碱、槐定碱和核苷类药物恩替卡韦单独用药及两者联合用药的细胞毒性;采用酶联免疫法(ELISA),实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR),蛋白质免疫印迹法(Western blot)分别观察联合用药对Hep G2.A64细胞HBs Ag分泌,HBV DNA复制,p38和NTPC mRNA表达,细胞中p38和p-p38蛋白表达水平的影响。结果:与单独用药比较,氧化苦参碱和恩替卡韦联合用药72 h后能显著抑制HBs Ag分泌,HBV DNA复制(P<0.05),同时能显著降低NTCP基因和蛋白的表达水平以及磷酸化p38蛋白水平。结论:氧化苦参碱联合恩替卡韦可能通过下调NTCP的表达同时抑制p38蛋白磷酸化达到抗病毒的效果。氧化苦参碱联合恩替卡韦能显著增强抗耐药HBV病毒的效果。
- 陈佳欣沈宏辉刘晓琼王伽伯邹文俊王世宇肖小河
- 关键词：氧化苦参碱恩替卡韦P38
- 携带HBVC基因重组MVA假病毒颗粒的构建及其抗原性鉴定被引量：2
- 2008年
- 目的构建携带HBVC基因的重组MVA假病毒颗粒并鉴定其抗原性。方法将HBVC基因通过基因重组构建入穿梭载体pSC11,得到质粒pSC11-C,将此质粒转染MVA病毒通过同源重组得到MVA-C。结果利用基因测序,PCR鉴定证实所得假病毒颗粒携带HBVC基因,并且具有良好的抗原性。经过9次传代得到单克隆重组病毒。结论成功构建了携带HBVC基因的重组MVA假病毒颗粒MVA-C,为研究HBV慢性感染的基因治疗提供了新途径。
- 栾翔凌孔维刘素军雷厉胡燕侯俊沈宏辉吴贻琛游绍莉貌盼勇辛绍杰
- 关键词：痘苗病毒基因治疗
- 三种不同转染方法拯救病毒的比较研究
- 2013年
- 目的比较3种不同转染方法，探索最佳的拯救病毒策略。方法3种转染方法包括：①含T7RNA聚合酶启动子的全长肠道病毒71（EV71）感染性质粒（P—EV71）和T7RNA聚合酶真核表达质粒（VR-1a）共转染Vero细胞；②含T7RNA聚合酶启动子的EV71全长基因片段（PCR产物）与VR-1a共转染Vero细胞；③利用体外转录技术得到EV71病毒全长RNA，直接转染Vero细胞。分别观察3种方法转染后产生细胞病变效应（CPE）时间及病变情况，用RT—PCR扩增拯救病毒核酸，测序验证其正确性，用蛋白印迹方法检测拯救病毒抗原。结果3种方法均可成功转染Vero细胞得到拯救病毒，三种转染方法转染效果比较：方法③优于②、②优于①。结论三种转染方法均可成功拯救EV71病毒，以病毒RNA直接转染效果最好。
- 侯俊罗生栋胡燕沈宏辉白冰珂柴燕涛王志杰貌盼勇
- 关键词：RNA肠道病毒属转染
- 突变型乙肝病毒前C-C基因疫苗免疫BALB／C小鼠的研究被引量：2
- 2008年
- 目的了解乙肝病毒前C-C基因疫苗（VEC）的突变型VE2、VE4免疫BALB／c小鼠后诱发特异性体液和细胞免疫的效果。方法分别用突变型和非突变型DNA疫苗免疫BALB／c小鼠，ELISA法检测小鼠抗HBc、抗HBeIgG，免疫第28天取小鼠脾细胞用酶免疫斑点（ELISpot）方法和CTL杀伤试验检测特异性细胞免疫功能。结果VE2、VFA组抗HBe水平高于VEC组，抗HBc水平差异无统计学意义。3种质粒均能引发特异性细胞免疫反应，VE4、VE2强于VEC；联用VM7免疫后能使VEC、VE2、VFA特异性细胞免疫反应增强。结论突变型前C-C基因疫苗在诱导BALB／c小鼠特异性体液和细胞免疫方面优于突变前。7干扰索基因可作为基因佐剂增强HBVDNA疫苗诱导的特异性细胞免疫反应。
- 张敏辛绍杰胡燕侯俊沈宏辉王志杰貌盼勇
- 关键词：肝炎乙型DNA免疫酶技术
- HIV-1/2抗体和P24抗原联合检测方法的建立及应用被引量：3
- 2007年
- 目的建立HIV-1/2抗体和P24抗原联合检测的酶免疫检测方法,用于HIV感染的实验室诊断,缩短HIV感染的检测窗口期。方法制备抗HIVP24单克隆抗体和多克隆抗体,联合使用基因工程HIV1/2型抗原和抗HIVP24单克隆抗体包被酶联反应板,以辣根过氧化物酶标记的HIV1/2型抗原和生物素化的兔抗HIVP24抗体作为标记物,建立联合检测HIV1/2抗体和P24抗原的ELISA方法,并对其特异性、敏感性和稳定性进行鉴定。结果检测P24抗原质控品的灵敏度可达0.2ng/ml;检测187份HIV阳性血清、210份其他疾病患者血清和520份正常人血清,其敏感性和特异度分别为100%和99.62%。同时重复12次检测4份HIV阳性血清,变异系数均小于10%。结论本方法可以在1.5h内一步同时检出特异性HIV-1/2抗体和HIVP24抗原,缩短了HIV感染的检测窗口期,具备快速、简便、特异、敏感等优点,适用于HIV感染的实验室诊断和流行病学调查。
- 胡燕冯长访候俊史素娟沈宏辉朱雷高蓉王保君貌盼勇
- 关键词：HIV抗原抗体窗口期
- 检测抗HIV1/2型抗体的双抗原夹心方法的建立及其试剂盒的研制被引量：4
- 2001年
- 目的 建立更敏感的检测人免疫缺陷病毒 (HIV)抗体的方法 ,并研制检测试剂盒。方法 根据HIV 1/2型的基因序列及其所编码氨基酸结构 ,采用固相法合成了HIV 1型的 gp41.1、gp41.2、gp12 0、p2 4和HIV 2型的 gp36五条多肽 ,混合包被酶标板作为固相抗原。用辣根过氧化物酶标记以上多肽抗原作为标记物 ,建立检测血清中抗HIV 1/2抗体的双抗原夹心ELISA法。同时 ,应用该方法制备检测HIV抗体的试剂盒 ,并检测三批中国卫生部药品和生物制品检定所HIV诊断试剂国家参比品。结果 建立了检测HIV 1/2抗体的双抗原夹心法。用检定所参比品检测 ,该方法特异性、灵敏度均为 10 0 % ,变异系数小于 10 %。与间接法相比较其灵敏度、特异性均高于间接法 (P<0 0 5 )。检测 2 10份其他病种患者血清均为阴性。与GBI公司的HIV抗体诊断试剂比较 ,检测 40份卫生部药品和生物制品检定所提供的质控参比品 (阳性 2 0份 ,阴性 2 0份 ) ,GBI试剂阴、阳性符合率及总符合率分别为 10 0 % (2 0 /2 0 )、85 % (17/2 0 )及 92 5 % (37/4 0 ) ,而应用该方法所研制的诊断试剂盒阴、阳性符合率及总符合率为 10 0 %。该试剂已通过国家卫生部质检。与雅培公司HIV诊断试剂比较检测 90份献血员血清和 88份HIV 1/2型感染者血清 ,符合率为 10 0 %。?
- 侯俊何红霞貌盼勇洪世雯胡燕沈宏辉杨松涛
- 关键词：双抗原夹心法HIV合成肽抗原酶联免疫吸附测定试剂盒
- 突变型HBV前C-C基因疫苗的构建及真核细胞表达被引量：2
- 2008年
- 目的采用点突变技术对HBV前C-C基因中的蛋白酶切位点进行4处点突变,构建突变型HBV前C-C/ENHⅡ重组基因疫苗,转染HepG2细胞,研究其在真核细胞内的表达情况。方法采用单引物二次PCR法对质粒VEC依次进行基因点突变,得到151+154(VE2)、151+154+164+167点突变(VE4)2种突变型疫苗,转染HepG2细胞,通过细胞免疫化学、酶联免疫分析、免疫印迹等方法检测其在HepG2细胞内的表达情况及表达产物的分子量。结果VEC、VE2、VE4转染HepG2细胞均胞浆表达目的蛋白,产物分子量分别为18、20、22 kD,细胞裂解液的HBeAg含量VE4、VE2高于VEC,上清中则反之。结论突变型HBV前C-C基因疫苗VE2、VE4构建成功并表达预期病毒前C蛋白前体。
- 张敏辛绍杰胡燕侯俊沈宏辉王志杰貌盼勇
- 关键词：DNA疫苗点突变
