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猪繁殖与呼吸综合征病毒感染细胞中非结构蛋白Nsp2表达分析被引量：4: 2013年; 猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)非结构蛋白Nsp2对病毒复制和致病具有重要作用,本研究旨在分析Nsp2在Marc-145细胞内的分布与表达。构建nsp2含PL2区域基因片段的原核表达载体,重组蛋白纯化后作为免疫抗原,制备Nsp2特异性单克隆抗体。将携带nsp2基因的真核表达载体转染至Marc-145及HEK293细胞,或将PRRSV感染Marc-145细胞后不同时间点收集细胞样品。免疫荧光观察Nsp2在转染细胞中的亚细胞定位,免疫印迹分析Nsp2在真核细胞中的表达。筛选获得了1株稳定分泌特异性抗Nsp2的单克隆杂交瘤细胞株,能用于免疫荧光和印迹分析。重组真核表达质粒转染Marc-145与HEK293细胞后,Nsp2主要定位于细胞质中,免疫印迹检测到约为120与50ku的蛋白条带。PRRSV感染Marc-145细胞4h即可检测到Nsp2的表达,主要定位于细胞核周围,随着感染时间延长Nsp2分布范围逐渐扩大至整个细胞质。病毒感染8h,可检测到120ku左右的Nsp2蛋白条带,感染后12h可检测到70和50ku左右的Nsp2蛋白,且蛋白表达量随感染时间延长显著增多。PRRSV感染细胞中Nsp2的表达与剪切分析,为深入研究该蛋白在病毒复制和致病中的功能奠定了基础。; 温贵兰张涵淞扈鸿霞章先张毅王晓杜李肖梁方维焕; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒

单核细胞增多性李斯特菌牛奶分离株弱毒的分子基础: 为探讨单核细胞增多性李斯特菌H4株弱毒的分子基础,我们在分析其表型的基础上,对其主要毒力相关基因进行了系统测序和分析。体外试验表明:分离株H4与10403S菌株相比具有相似的溶血活性和细胞侵袭力,但具有更强的细胞黏附力、...; 江玲丽徐晶靓陈宁帅江冰方维焕; 文献传递

猪链球菌2型分离株对野生斑马鱼的致病性被引量：7: 2008年; 以野生斑马鱼为模式动物,对6株mrp+epf+sly+猪链球菌2型(SS2)分离株进行致病性比较。斑马鱼经腹腔接种不同稀释度的SS2分离株,连续观察5d,Kaplan-Meier生存曲线分析并统计半数致死量(LD50)。结果显示,6个分离株对斑马鱼的LD50在105cfu^106cfu之间,临床株与非临床株的毒力差异不显著(P>0.05)。从攻毒后死亡的鱼腹腔和脑可分离到SS2,并伴有腹腔出血及肝、肠、脑部炎性病变。表明SS2可感染斑马鱼,为进一步研究SS2的体内感染机制及毒力因子功能等奠定了基础。; 陈阳吴迪陈雪燕赵焕灿扈鸿霞Cheick A Diakite方维焕; 关键词：2型猪链球菌斑马鱼半数致死量

双重定量蛋白毒素量子点荧光免疫层析试纸条及制备方法: 本发明涉及免疫层析技术，旨在提供一种双重定量蛋白毒素量子点荧光免疫层析试纸条及制备方法。该试纸条在聚氯乙烯背板表面依次布置样品垫、量子点抗体标记物固定垫、硝酸纤维素膜和吸收垫；在硝酸纤维素膜上设有两条检测线和一条质控线；...; 方维焕章先李肖梁王歆谢珲时玉菲孙孟娇; 文献传递

犬细小病毒HZ0761株的分离与鉴定被引量：5: 2008年; 采集疑似细小病毒(CPV)感染犬的粪便,采用同步培养法接种胎猫肾细胞(F81)进行病毒分离鉴定。通过PCR检测、HA试验、IFA鉴定、电镜观察和空斑纯化,获得1株犬细小病毒,并命名为HZ0761。感染的F81细胞48h后出现明显的细胞病变;在病料和感染的F81细胞中均扩增出CPV VP2基因的特异性片段(221 bp);病毒液可凝集猪红细胞,血凝价为1∶28,其血凝性能被特异性抗体抑制;IFA可见特异性亮绿色荧光;电镜观察感染的F81细胞核内可见20 nm左右的病毒颗粒;病毒液的TCID50为10-4.8/mL,VP2基因序列分析显示该毒株为CPV-2 a型。; 魏巍李肖梁帅江冰陈宁刘刚方维焕; 关键词：犬细小病毒

鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌的二重PCR检测: 沙门氏菌广泛分布于自然环境中,是一种危害较大的人畜共患病病原菌,能通过食物感染人类,引起伤寒、副伤寒、败血症和胃肠炎等病症.由沙门氏菌引起的食物中毒病例在食物中毒总病例中占第二位.因此,快速特异地检出食品中的沙门氏菌污染...; 张桂芝贺晓龙曾海燕方维焕; 关键词：鼠伤寒沙门氏菌肠炎沙门氏菌人畜共患病食品卫生学; 文献传递

猪圆环病毒3型与宿主相互作用机制研究进展被引量：2: 2023年; 猪圆环病毒3型(porcine circovirus type 3,PCV3)从2015年发现至今已在全世界多个国家和地区的养猪业被检出,是重要的新发猪病病原体。目前有关PCV3致病机制的研究有限,大部分集中于PCV3的流行病学调查、基因组演化分析和检测方法建立。猪圆环病毒(porcine circovirus,PCV)与宿主之间关系紧密且复杂,二者的相互作用决定宿主细胞的命运和病毒的传播与存活。部分学者通过瞬转表达系统、临床分离和反向遗传学技术从病毒组分或全病毒水平对PCV3与宿主相互作用展开研究。本文系统阐述宿主细胞对PCV3感染的应答机制、PCV3-宿主蛋白的相互作用,以及PCV3生命周期的研究结果,将有助于进一步了解PCV3及其致病机制。; 孙仁杰单颖单颖王雅婷谢荣辉谢荣辉张传亮赵灵燕李肖梁

双重定量真菌毒素量子点荧光免疫层析试纸条及制备方法: 本发明涉及免疫层析技术，旨在提供一种双重定量真菌毒素量子点荧光免疫层析试纸条及制备方法。该试纸条在聚氯乙烯背板表面依次布置样品垫、量子点抗体标记物固定垫、硝酸纤维素膜和吸收垫；在硝酸纤维素膜上设有两条检测线和一条质控线；...; 方维焕章先李肖梁谢珲王歆孙孟娇; 文献传递

虾仁中副溶血弧菌灭活动力学模型的建立被引量：2: 2013年; 【目的】建立醋酸、乳酸和柠檬酸对副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)在生理盐水和虾仁中的灭活动力学模型,指导有机酸应用于虾仁加工过程中的抑菌保鲜。【方法】测定副溶血弧菌在生理盐水和新鲜虾仁中经不同浓度有机酸溶液浸泡处理10min后的存活率P,虾仁中的细菌存活率与有机酸浓度呈良好的线性关系;生理盐水中的存活率通过ln[P/(1-P)]转换成logit(P),与有机酸浓度之间的线性拟合度显著提高。通过拟合方程计算有机酸的50%和90%有效抑菌浓度(EC50和EC90),比较不同有机酸的抑菌能力以及在不同基质中的作用差异。【结果】副溶血弧菌在生理盐水中对有机酸较为敏感,在虾仁中的杀菌效果相对较差,虾仁中乳酸与柠檬酸的有效抑菌浓度(EC50或EC90)是生理盐水中浓度的160-200倍,醋酸的浓度比其在生理盐水中的浓度高出70倍以上,表明食品基质对有机酸的抑菌作用有显著影响,但采用的有机酸在虾仁中的EC90并未超过美国农业部规定的2.5%上限。以有机酸的总摩尔浓度比较,柠檬酸的抑菌能力最强,乳酸次之,醋酸最弱。【结论】抑菌剂效应呈非线性时,细菌存活率进行对数转换,可显著提高线性拟合度R2;食品基质对有机酸的抑菌作用有明显影响;应用浓度为2%的3种有机酸可以有效降低水产品中弧菌的污染量,提高产品的卫生质量。; 刘媛方春程昌勇方维焕; 关键词：虾仁副溶血弧菌有机酸

萧山鸡IL-2基因真核表达载体构建及其在Vero细胞中的表达被引量：2: 2003年; 扩增萧山鸡白细胞介素2(IL-2)基因,将其插入真核表达载体pCI构建重组质粒pCI-IL-2,高压电击法将重组质粒转化入减毒沙门氏菌,并直接转染Vero细胞,提取细胞总DNA,DIG标记探针可检测到阳性杂交信号。用FITC标记的羊抗兔IgG进行间接免疫荧光试验,可检测到特异性黄绿色荧光。SDS-PAGE和Westernblotting可检测到18.5kD和14.5kD的蛋白条带。表明减毒沙门氏菌能将重组质粒pCI-IL-2携带进入Vero细胞内表达IL-2,且表达产物具有免疫反应性,为今后研制鸡IL-2基因作为口服免疫增强剂提供了依据。; 谢荣辉方维焕李建荣卢觅佳于涟; 关键词：萧山鸡 IL-2基因真核表达载体 VERO细胞减毒沙门氏菌白细胞介素2

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