方勤美
- 作品数：48 被引量：97H指数：5
- 供职机构：福建省农业科学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金福建省科技计划项目福建省科技厅资助项目更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学轻工技术与工程更多>>
- 嗜水气单胞菌β-hemA重组菌表达产物ISCOMs的研制被引量：16
- 2004年
- 嗜水气单胞菌β-hemA重组菌PCB的培养上清液经硫酸铵梯度沉淀粗提毒素蛋白质，并在pH2．5的柠檬酸缓冲液里酸化处理以暴露其疏水区，经Mega-10裂解后与QuilA结合制备ISCOMMs，电镜下可观察到30～40nm的多面体的笼格状颗粒结构。经鳗鱼的免疫保护试验证实．ISCOMs组(每尾40～80μg)保护率高达100％，同剂量的溶血素+弗氏佐剂组可达62．5％，未加佐剂的溶血素只有50％。
- 方勤美林天龙龚晖杨金先刘晓东
- 关键词：嗜水气单胞菌免疫
- 猪链球菌2型PCR-ELISA检测方法的建立与优化
- 2012年
- 根据已发表的猪链球菌2型的cps2j基因序列,设计合成上游标记生物素的1对引物和1条标记地高辛的特异性探针,建立了该菌的PCR-ELISA检测方法。方法利用PCR仪作为杂交场所,并对几个主要条件参数进行优化,结果显示在鲑鱼精DNA浓度1.6mg·mL-1、变性温度为94℃、变性时间为1min、探针浓度为0.5umol·mL-1、杂交温度55℃、杂交时间1min、一抗作用时间45min、二抗作用时间40min时检测方法敏感性最好,特异性最强。通过对17个阴性样本检测,测得平均值为0.057,方差为0.047,计算得临界值为0.198。
- 方勤美朱继昌池洪树林天龙
- 一种试剂盒和检测猪链球菌2型的方法
- 本发明提供了一种试剂盒和一种猪链球菌2型的检测方法。该试剂盒包括上游引物、下游引物和探针，所述上游引物的5’端和/或所述下游引物的5’端被生物素修饰；所述探针的5’端和/或3’端被地高辛修饰；所述上游引物和所述下游引物能...
- 方勤美林天龙朱继昌
- 嗜水气单胞菌中溶血素的免疫刺激复合物的制备工艺
- 本发明涉及分子生物学和免疫学领域，特别涉及一种嗜水气单胞菌中溶血素的免疫刺激复合物的制备工艺，步骤为：将嗜水气单胞菌菌株培养而得培养液；培养液离心后得上清液，用饱和硫酸铵处理上清液，离心后取沉淀用PBS重悬、透析，获取悬...
- 方勤美龚晖林天龙
- 文献传递
- 嗜水气单胞菌基因工程疫苗研究
- 为了克隆、表达嗜水气单胞菌β-溶血素基因，构建抗嗜水气单胞菌的基因工程疫苗，我们应用PCR技术，扩增了嗜水气单胞菌ML316的β-溶血素基因，命名为AHL316HEM。将PER产物克隆到pGEM-T Easy vecto...
- 林天龙龚晖方勤美董传甫
- 关键词：嗜水气单胞菌ISCOMS基因工程疫苗PCR技术免疫接种
- 文献传递
- 猪繁殖与呼吸综合征流行病学、病原学与分子诊断技术研究
- 周伦江王隆柏庄向生魏宏方勤美车勇良陈如敬陈少莺吴学敏刘玉涛
- 课题来源与背景：该项目来源:福建省农业科学院,项目编号为B2009-01.猪繁殖与呼吸障碍综合征(PRRS)是由PRRSV引起的一种高度传染性疾病,临床上以母猪发热、厌食、早产、流产、木乃伊胎、死胎、弱仔等繁殖障碍及商品...
- 关键词：
- 关键词：呼吸综合征流行病学病原学诊断
- 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒感染MARC-145细胞的差异蛋白
- 2012年
- 【目的】研究高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染MARC-145细胞生长相关蛋白表达量的变化,明确差异蛋白的功能信息,为深入研究PRRSV病毒复制和致病机理奠定基础。【方法】采用差异蛋白质组学和Western blotting技术,通过建立双向凝胶电泳,对高致病性PRRSV感染MARC-145细胞后表达量差异蛋白质进行了胶内酶解、质谱分析鉴定及数据库检索,明确差异蛋白质的相关信息。【结果】得到7个表达稳定、重复性好的蛋白点,其中有5个蛋白点找到匹配蛋白,分别为热休克蛋白70、硫氧还蛋白、S100钙结合蛋白A6、3-磷酸甘油脱氢酶和内参肌动蛋白,其余2个蛋白点为未知蛋白。在MARC-145细胞感染PRRSV后,热休克蛋白70和S100钙结合蛋白A6表现为下调,而硫氧还蛋白、3-磷酸甘油脱氢酶和内参肌动蛋白表现为上调。功能预测分析发现,5个蛋白与MARC-145细胞抗应激、抗氧化、生长、凋亡和信号转导等作用息息相关。【结论】高致病性PRRSV感染MARC-145细胞后,能诱导细胞部分功能蛋白表达量的增加或减少。
- 周伦江王隆柏方勤美吴学敏车勇良陈如敬魏宏庄向生
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒MARC-145细胞蛋白质组学
- T2毒素单克隆抗体及试剂盒的制备
- 2020年
- 制备T2单克隆抗体并确定其基本特性,为后期快速检测方法建立奠定基础。利用自制的多抗血清和单克隆抗体,建立酶联免疫吸附试验(ELISA)快速测定方法。结果显示,该方法灵敏、特异,可为大量样本测定储备条件。
- 方勤美刘建龙陈永聪柯翎郑在予陈秀霞龚晖
- 关键词：T2毒素单克隆抗体
- 肝癌细胞蛋白差异凝胶电泳技术系统评估方法被引量：2
- 2006年
- 利用二维差异凝胶电泳技术(two-d im ensional d ifferential in-gel electrophoresis,2D-D IGE)研究肝癌细胞与正常细胞的差异时应先对其蛋白样品进行标记系统评估,以确保正式实验的成功。在细胞水平上展开蛋白质组研究应尽可能提取到细胞的所有蛋白,为此本研究先比较了机械刮除法、胰酶消化法和PBSE消化法收获肝癌细胞后的细胞形态与蛋白得率,结果显示PBSE消化法收集肝癌细胞时细胞形态完整,提取的蛋白得率最高。然后将提取的细胞蛋白经D IGETM试剂盒的3重荧光(Cy2、Cy3、Cy5)标记后再进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和双向电泳(2DE,two-d im ensional electrophoresis)。前者图像使用Im ageQuant软件进行分析,结果说明肝癌细胞蛋白提取液与该染料能相互兼容,样品得到了有效的标记。2DE的扫描图像使用DeCyder 5.0软件的胶内分析(d ifferential in-gel analysis,D IA)和胶间分析(b iological variation analysis,BVA)模式,结果表明,Cy3和Cy5标记的蛋白质定量结果基本一致,但该染料标记肝癌细胞蛋白后会造成极少量蛋白出现位置偏差,给蛋白定量带来一定的误差影响,而BVA中的反标策略能够有效纠正这种由于不同荧光标记带来的定量误差。总之,本研究首次报道了用同一肝癌样品进行不同荧光标记后进行2DE的评估方法,该方法支持了D IGE体系定量的可靠性,而且能给出定量的误差范围,完善了评估体系,为D IGE技术平台的质量控制提供了参考。
- 方勤美孙薇焦丽燕钱小红姜颖夏春贺福初
- 关键词：肝癌细胞蛋白提取
- 迟缓爱德华氏菌对鳗鲡肝细胞系的侵染模型解析
- 迟缓爱德华氏菌是一种(Edwardsiella tarda)人兽共患病病原菌，感染人后可引起患者肠胃炎、组织炎、败血症、脑膜炎等症状[1]，该菌更是是鳗鲡重要病原菌之一，它们之间相互作用关系的探索研究有助于了解其侵染规律...
- 方勤美郑在予龚晖
- 关键词：迟缓爱德华氏菌鳗鲡侵染
