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徐坚: 作品数：11 被引量：38H指数：2; 供职机构：复旦大学生命科学学院遗传工程国家重点实验室更多>>; 发文基金：国家自然科学基金上海市现代生物与新药产业发展基金上海市科学技术委员会资助项目更多>>; 相关领域：生物学经济管理医药卫生更多>>

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BDNF的酵母双杂交诱饵载体的构建和初步鉴定: 2005年; 目的：构建和转化脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor, BDNF)的酵母诱饵重组质粒,为通过酵母双杂交研究BDNF的功能及作用机制奠定基础。方法：用PCR扩增BDNF基因cDNA中编码完整开放阅读框的基因片段；将该基因片段与plexA载体定向重组；用酶切和测序鉴定重组质粒；将核苷酸序列正确的重组质粒转化人EGY48(p8op-LacZ)酵母菌株。结果：成功构建pLexA-BDNF重组质粒。转化有重组质粒和pLexA空载体的两种EGY48(p8Op—LacZ)酵母都能在SD／Gal／Raf／-His／-Ura培养基中长成白色菌落(同时,转化pLexA-pos阳性对照质粒的酵母菌在相同条件下长成蓝色菌落),但都不能在SD／-His／-Leu／-Ura培养基中生长,在SD／-His／-Ura液中培养16h后,OD_(600)均值均为0.9±0.1。这表明重组质粒表达的融合蛋白没有激活LEU2和lacZ酵母报告基因表达的活性,电没有酵母毒性作用。结论：构建的诱饵重组质粒可以用于下一阶段的人胎脑cDNA文库筛选。; 罗星何玲张峪涵孔雪于娜徐坚杨磊黄瑾; 关键词：BDNF

RBM13 cDNA的克隆及其表达谱分析被引量：20: 2000年; 从人胎脑cDNA文库中克隆到一条长3479bp的cDNA，它含一个长903bp的开放阅读框架，拟编码一个300个氨基酸的蛋白质，其分子质量为35397u，等电点为5．35，与酵母MAK16蛋白的同源性为41％，该编码蛋白有一个双侧核定位信号motif和一个RNA结合motif，将这一新cDNA序列推导的蛋白命名为RNA结合基序蛋白13（RBM13），基因定名为RBM13，用RBM13基因的cDNA探针进行Northern杂交，检测到3．6kb和2．2kb二种长度的转录本。在心脏，骨骼肌，肾脏和肝脏中有较高表达。; 周宗祥徐坚等; 关键词：CDNA克隆 NORTHERN杂交表达谱 RNA结合蛋白

人Neuritin真核表达载体的构建及其在细胞中的定位被引量：2: 2011年; 目的获得人突触生长素Neuritin基因并构建pEGFP-C1-neuritin真核表达载体,观察Neuritin在人AD293细胞中的定位。方法利用PCR获得Neuritin基因,然后克隆到pEGFP-C1载体中,利用脂质体将构建的表达载体转染AD293细胞,荧光观察融合蛋白的表达。结果从人类cDNA文库中得到Neuritin的完整开放阅读框序列,将其重组到pEGFP-C1载体中并转染AD293细胞,荧光显示Neuritin蛋白定位在细胞浆中。结论成功构建Neuritin真核表达载体并在人AD293细胞表达,证明Neuritin蛋白定位于细胞浆,为进一步研究Neuritin与其他蛋白的相互作,探讨Neuritin功能及作用机制奠定理论基础。; 罗星徐坚黄瑾; 关键词：NEURITIN 细胞定位

利用基因芯片对一高保守基因进行肿瘤相关分析被引量：2: 2002年; 本文对大规模人类cDNA测序过程中获得的一条高保守基因进行了初步功能研究 ,生物信息学研究发现该基因在人类、小鼠、果蝇、拟南芥和裂殖酵母中都有很高的保守性 ,其他分析预测该基因可能具有肿瘤相关性。RT -PCR分析表明 ,该基因在成人和胎儿组织中广谱表达。利用基因芯片分析该基因在 7例肝癌、5例胰腺癌、2例喉癌和 2例肺癌中表达情况 ,结果证实了该基因的肿瘤相关性 ,并且提示该基因在不同肿瘤类型中可能处于不同的地位。; 程超周宗祥徐明赵炜徐坚曾立黄燕吴奇涵戴建锋应康谢毅毛裕民; 关键词：基因芯片结构域

NT3的酵母双杂交诱饵载体的构建和初步鉴定: 2005年; 构建和转化神经营养素3(neurotrophin 3,NT3)的酵母诱饵重组质粒,为通过酵母双杂交研究NT3的功能及作用机制奠定基础。用PCR扩增NT3基因cDNA中编码完整开放读框的基因片段;将该基因片段与pLexA载体定向重组;用酶切和测序鉴定重组质粒;将核苷酸序列正确的重组质粒转化入EGY48[p8op LacZ]酵母菌株。结果成功构建pLexA NT3重组质粒。转化有重组质粒和pLexA空载体的二种EGY48[p8op LacZ]酵母都能在SD Gal Raf His Ura培养基中长成白色菌落(同时,转化pLexA pos阳性对照质粒的酵母菌在相同条件下长成蓝色菌落),但都不能在SD His Leu Ura培养基中生长,在SD His Ura液中培养16h后,OD600均值均为0.8±0.1。这表明,重组质粒表达的融合蛋白没有激活LEU2和lacZ酵母报告基因表达的活性,也没有酵母毒性作用。因此,构建的诱饵重组质粒可以用于下一阶段的人胎脑cDNA文库筛选。; 罗星孔雪徐坚于娜张峪涵仙玲玲杨磊黄瑾; 关键词：NT3 酵母双杂交

人BTBD_(10)新基因克隆及组织表达和在脑胶质瘤中的表达谱及聚类被引量：2: 2004年; 目的探讨人脑胶质瘤相关BTBD10新基因克隆、正常成人组织分布及在不同级别星形细胞瘤中的表达。方法构建胎脑cDNA文库和大规模测序获得全长BTBD10新基因;用Clontech人多组织文库(MTC)为模板研究BTBD10在8种正常组织中的分布;用含13 939种人类基因(8 347种已知基因,5 592种未知基因)的BioStarH140S型表达谱芯片检测BTBD10在星形细胞瘤中的表达,Hierarchical聚类分析与BTBD10表达谱相近的基因群;Northern杂交验证BTBD10在不同级别胶质瘤中的表达。结果人胎脑文库中克隆的BTBD10新基因含1 428bp长的开放阅读框,编码475个氨基酸的蛋白;芯片结果提示BTBD10基因在18例胶质瘤组织中表达一致降低,与促性腺诱导素转录阻抑蛋白GIOT1、血管性肠肽VIP等7条基因的表达谱相似;BTBD10在正常脑组织中表达量最高,而心、肺、肝、肾、胰腺中表达较低;Northern显示BTBD10与胶质瘤发生密切相关,与芯片结果一致。结论表达谱芯片可快速高效筛选脑胶质瘤相关基因,BTBD10基因与胶质瘤发生密切相关,在脑胶质瘤的转录调控中起重要作用。; 陈菊祥卢亦成骆纯胡国汉楼美清徐坚应康谢毅; 关键词：基因克隆脑胶质瘤表达谱聚类

绿色贸易壁垒与我国的贸易政策选择: 随着经济一体化和贸易全球化进程的推进,全球自由贸易的程度不断加强,各种关税和非关税壁垒,以及贸易补贴遭到国际贸易条约和协议的限定而逐步走向消亡.然而一种新的绿色保护主义兴起了.它首先由西方主要发达国家发起,并波及到许多新...; 徐坚; 关键词：绿色贸易壁垒环境问题可持续发展; 文献传递

神经突起因子酵母双杂交诱饵质粒构建和转化被引量：10: 2006年; 目的构建和转化神经突起因子(Neuritin)的酵母诱饵重组质粒,为通过酵母双杂交研究Neuritin的功能及作用机制奠定基础。方法用PCR扩增neuritin全长cDNA中编码开放读框的基因片段;将该基因片段与pLex-A载体定向重组;用酶切和测序鉴定重组质粒;将核苷酸序列正确的重组质粒转化入EGY48[p8op-LacZ]酵母菌株。结果成功构建pLexA-neuritin重组质粒。转化有重组质粒和pLexA空载体的2种EGY48[p8op-LacZ]酵母都能在SD/Gal/Raf/-His/-Ura培养基中长成白色菌落,同时,转化pLexA-pos阳性对照质粒的酵母菌在相同条件下长成蓝色菌落,但都不能在SD/-His/-Leu/-Ura培养基中生长,在SD/-His/-Ura液中培养16 h后,A600均值均为0.9。表明重组质粒表达的融合蛋白没有激活LEU2和lacZ酵母报告基因表达的活性,也没有酵母毒性作用。结论构建的诱饵重组质粒可以用于下一阶段的人胎脑cDNA文库筛选。; 罗星张峪涵于娜孔雪徐坚顾少华杨磊黄瑾; 关键词：酵母双杂交

人原肌球蛋白结合蛋白3(TMOD3)cDNA的克隆及功能初步分析被引量：1: 2000年; 从人的胎脑cDNA文库中克隆到 1条人原肌球蛋白结合蛋白 3(TMOD3)基因 .该基因cDNA序列长140 2bp ,可以编码 35 2个氨基酸残基组成的蛋白 ,与大鼠、果蝇和线虫的原肌球结合蛋白同源性分别为 82 % ,41%和 35 % .TMOD3基因定位在人 15q2 1.1 q2 1.2 ,位于遗传位标D15S146和D15S117之间 .采用基因芯片杂交的方法研究其表达谱情况 ,发现该基因在多种组织和细胞中均表达 .; 戴建凉方国洪唐榕曾立徐坚顾少华谢毅毛裕民; 关键词：原肌球蛋白基因芯片基因编码基因

BTB基因家族成员BTBD8、KLHL7和KLHL9的克隆和功能研究: BTB结构域和kelch结构域都是在进化上高度保守的结构域,广泛存在于从酵母到人类的各种物种中。在人类基因组中发现了很多BTB//kelch蛋白,提示这类蛋白功能的重要性和多样性。现在越来越多的实验证据证明BTB//ke...; 徐坚; 关键词：酵母双杂交细胞定位免疫共沉淀锤头状核酶 MIF; 文献传递

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