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应用量子点荧光探针检测Gfi1蛋白在结外NK/T细胞淋巴瘤中的表达被引量：1: 2011年; 目的探讨应用量子点(QDs)荧光探针检测结外NK/T细胞淋巴瘤(ENKTCL)中独立生长因子(Gfi1)蛋白的表达及其与临床预后的关系。方法收集67例确诊为ENKTCL患者的临床病理资料,并进行随访。Gfi1蛋白的表达分别用QDs荧光探针法及免疫组化法检测,并比较2种方法检测的阳性率。应用Kaplan-Meier法及log-rank检验对生存资料进行分析,并比较Gfi1蛋白阳性表达组与阴性表达组的5年总生存率。结果 QDs荧光探针法及免疫组化法检测Gfi1蛋白在ENKTCL中阳性表达率分别为85.07%、73.13%,2者相比差异有统计学意义(P<0.05);2种方法Gfi1蛋白定位相同(细胞核),但荧光探针法的荧光强度较大,亮度较高。Gfi1阳性表达组与阴性表达组的5年总生存率分别为12.90%、54.70%,Gfi1阳性表达组的预后差于Gfi1阴性表达组(P<0.05)。Gfi1蛋白表达是影响生存期的独立预后因素。结论 QDs荧光探针法较免疫组化法能有效识别ENKTCL瘤组织中的Gfi1蛋白,Gfi1蛋白在ENKTCL瘤组织中的表达与ENKTCL的预后有关,Gfi1可作为判断ENKTCL预后的重要指标。; 张晓梅朱贤敏徐金环王佳琪黄敏张义成; 关键词：结外NK/T细胞淋巴瘤预后

人Gfi1基因克隆及重组Gfi1慢病毒表达载体的构建被引量：2: 2009年; 目的克隆人Gfi1基因的全长cDNA,构建用于真核细胞表达的含有Gfi1基因ORF区的重组慢病毒表达载体pLOX-Gfi1,为研究Gfi1基因的功能打下基础。方法应用RT-PCR从人K562细胞系中扩增出Gfi1 cDNA片段,经回收纯化与pGEM-T载体连接并转化感受态菌DH5α,通过蓝白筛选酶切鉴定出阳性菌落,质粒提取,BamHⅠ限制性内切酶酶切获得目的基因,插入慢病毒载体pLOX中并转化感受态细菌DH5α。质粒提取后进行酶切及PCR鉴定,对阳性克隆进行DNA序列分析。结果RT-PCR扩增获得含有约1.2 kb的DNA片段,酶切及PCR鉴定证实pLOX-Gfi1含有大小正确的正向Gfi1 cDNA,DNA序列分析的结果与发表于GenBank上的序列(NM005263)完全一致。结论成功克隆人Gfi1基因并构建用于真核细胞表达的重组慢病毒载体pLOX-Gfi1。; 黄敏欧东梅赵霞徐金环张晓梅周剑峰张义成; 关键词：克隆慢病毒载体

原癌基因Gfi1在骨髓增殖性疾病中的表达及其与预后的关系: 2011年; 目的探讨骨髓增殖性疾病(myeloproliferative disorders,MPD)患者骨髓中原癌基因独立生长因子(growth factor independence-1,Gfi1)的表达及其与临床预后的关系。方法选择华中科技大学同济医学院附属同济医院确诊的74例MPD患者为研究对象,其中真性红细胞增多(polycythaemia vera,PV)23例、原发性血小板增多症(essential thrombocythaemia,ET)49例,特发性骨髓纤维化(idiopathic myelofibrosis,IMF)2例。另选22例捐献骨髓的健康志愿者作为对照组。所有参与者签署知情同意书。采集骨髓标本以检测骨髓单个核细胞的Gfi1的表达。一步法提取细胞总RNA,应用逆转录-聚合酶链反应技术扩增Gfi1引物,琼脂糖凝胶电泳结果,分析各组MPD患者Gfi1阳性表达与MPD临床预后的关系。结果 74例MPD患者中52例检出Gfi1阳性表达,分别为ET患者67.35%(33/49)阳性表达,PV患者78.26%(18/23)阳性表达,IMF患者50.00%(1/2)阳性表达。Gfi1水平增高影响患者的预后,Gfi1阳性表达者,预后较差。结论 Gfi1可作为判断MPD预后的重要指标。随着对Gfi1的认识的深入,该基因很可能成为MPD治疗的分子靶点。; 张晓梅徐金环朱贤敏黄敏张义成; 关键词：骨髓增殖性疾病预后

携带人Gfi1基因重组慢病毒载体稳定转染32D细胞株的建立被引量：3: 2009年; 本研究建立真核细胞表达的Gfi1基因重组慢病毒载体包装系统,并实现Gfi1在32D细胞中长期、稳定的表达,为进一步研究Gfi1基因在恶性血液病中的发生发展建立一个有效的平台。制备完整的重组慢病毒载体三质粒系统:转移质粒(pLOX-Gfi1/pLOX)、包装质粒(pCMVΔR8.2)及包膜蛋白质粒(pMD.G)。用脂质体法将三质粒共转染包装细胞293T,48小时后收集病毒上清,并转染靶细胞32D;用Western-blot法检测293T及32D细胞中Gfi1的整合及表达。结果表明:慢病毒的3种质粒可以高效转染293T细胞,并成功包装出慢病毒。目的基因Gfi1能被重组慢病毒高效导入靶细胞32D,并稳定表达,在荧光显微镜下可直接观察到GFP。Western-blot能检测到Gfi1蛋白在包装细胞293T及32D细胞中的表达。结论:慢病毒介导的Gfi1基因可以高效稳定转染32D细胞并持续表达,证明本研究建立了一种有效的基因转移系统。; 黄敏欧东梅吴江赵霞徐金环张晓梅张义成; 关键词：慢病毒载体

RhoA在肝癌组织中的表达及其临床意义被引量：4: 2006年; 目的研究RhoA在人类肝癌(HCC)组织中的表达,并探讨RhoA与临床病理特征之间的关系。方法用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹(W estern b lot)的方法检测30例肝癌手术标本癌组织、癌旁组织中RhoAmRNA和蛋白表达的相对水平。结果RhoAmRNA和蛋白水平在肝癌组织中的表达均较癌旁组织高[吸光度(A)的比值分别为1.45±0.66和1.18±0.53、35.74±6.38和16.50±7.53],差异有显著性(P<0.05)。在肝癌组织中,RhoA mRNA和蛋白的表达量与肝癌的细胞分化程度、结节数目、有无淋巴结静脉浸润以及有无肝外转移灶有关(P<0.05),而与性别和肿瘤直径无关(P>0.05)。结论RhoA在人类肝癌中过量表达,并与肝癌的浸润和转移密切相关,可作为反映肝癌侵袭和转移能力的新指标,有望成为肝癌治疗的新靶点。; 张晓梅王波陈孝平田德安; 关键词：肝癌 RHOA 肿瘤侵袭肿瘤转移

独立生长因子Gfi1在外周T细胞淋巴瘤的表达及其与预后的关系: 2011年; 目的探讨外周T细胞淋巴瘤(peripheral T-cell lymphoma,PTCL)患者骨髓中独立生长因子(growth factorindependence 1,Gfi1)的表达及其与临床预后的关系。方法选择确诊的63例PTCL患者为研究对象,其中外周T细胞淋巴瘤-非特异型(peripheral T-cell lymphoma,not otherwise specified,PTCL-NOS)29例,血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤5例,肠病型T细胞淋巴瘤8例,鼻NK/T细胞肿瘤17例,肝T细胞淋巴瘤4例。对照组是10例反应性增生性淋巴结炎(reactive hyperplastic lymphadenitis,RHL)。应用RT-PCR法扩增Gfi1引物,并进行琼脂糖凝胶电泳;应用组织形态学观察及免疫组织化学法(SP法)检测PTCL的淋巴瘤组织和作为对照组的RHL患者淋巴组织中Gfi1的表达情况。采用Kaplan-Meier方法对生存资料进行分析,用log-rank方法进行检验。结果 RT-PCR结果显示,PTCL患者的淋巴瘤组织中Gfi1表达呈阳性,RHL患者的淋巴组织中Gfi1表达为阴性。63例PTCL患者中只有42例保存有石蜡块标本,31例检出Gfi1蛋白阳性表达(73.81%,31/42),而Gfi1在对照组RHL中表达均为阴性。生存分析显示Gfi1是与患者生存期及预后相关的因素,其阳性表达组的预后明显差于阴性表达组(P<0.05)。结论 Gfi1是判断PTCL预后有价值的分子生物学指标。; 张晓梅徐金环朱贤敏黄敏王佳琪张义成; 关键词：外周T细胞淋巴瘤预后

人类Gfi1基因SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立被引量：3: 2011年; 目的建立测定人类Gfi1mRNA表达量的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法,为进一步研究新基因的功能奠定基础。方法以Gfi1基因为靶基因设计引物。构建携带Gfi1cDNA的质粒plox-Gfi1,经过纯化,质粒浓度测定,拷贝数的计算及10倍的梯度稀释制备标准品。应用ABI stepone PCR仪对Gfi1mRNA进行实时荧光定量PCR检测,建立标准曲线和熔解曲线。结果建立了Gfi1mRNA表达的实时荧光定量PCR方法,本法线性范围为6.36×102～6.36×108copies/μl,线性相关系数γ2为0.996,熔解曲线为单峰,Tm值为(89.98±0.22)℃,标准品的循环阈值批内变异系数和批间变异系数分别为1.35%～3.61%和1.49%～3.42%。结论本研究建立的Gfi1mRNA表达实时荧光定量PCR检测方法速度快,灵敏度高,特异性强,重复性及稳定性好,可用于Gfi1基因的定量检测。; 黄敏欧东梅徐金环张晓梅张义成; 关键词：SYBR 实时荧光定量PCR

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张晓梅

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