张念
- 作品数：5 被引量：8H指数：2
- 供职机构：吉林大学畜牧兽医学院更多>>
- 发文基金：北京市自然科学基金国家自然科学基金广西青年科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 五指山小型猪内源性反转录病毒囊膜基因变异特征研究被引量：2
- 2013年
- 为分析近交系连续3代次五指山小型猪内源性反转录病毒囊膜基因(PERV-env)变异特征,本研究采用PCR方法对该基因进行扩增、克隆和序列测定,将其与参考序列比对和遗传进化分析。序列分析显示:PERV-env核苷酸序列与参考序列之间的同源性为98.3%～99.3%,具有明显G→A突变,并且偏好发生于GA、GG。进一步分析表明,在PERV-env序列190 bp和1 875 bp位置均有G→A突变发生。PERV-env基因遗传进化树分析表明,五指山来源的PERV与国外小型猪PERV-A亲缘关系较近,但仍存在差异。本实验将有助于PERV分子特性的研究,为进一步开展异种移植中PERV的安全性评价奠定基础。
- 张念马玉媛向思龙贾俊婷吴健敏章金刚
- 关键词：近交系五指山小型猪猪内源性反转录病毒囊膜基因
- Tn5转座子介导表达猪瘟E2蛋白和EGFP重组伪狂犬病毒的构建被引量：2
- 2011年
- 为构建猪瘟重组伪狂犬疫苗,以Tn5转座子为介导,采用体外转座的方法将猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)E2基因和增强绿色荧光蛋白(enhanced green fluoresce protein,EGFP)的表达盒随机插入伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)基因组中,随后将转座产物转染BHK-21细胞,获得表达E2蛋白和EGFP的病毒库,并对E2蛋白和EGFP在细胞上的表达效果进行PCR鉴定和间接免疫荧光分析。试验结果表明,运用体外转座的方法可以将外源基因插入PRV基因组中,并且外源基因可以在细胞中表达。本研究为重组病毒的研究提供了新思路,并为新型重组猪瘟疫苗的研制进一步奠定了基础。
- 高博范志强韩乃君张念张锦霞王颖白安斌黄红梅扈荣良吴健敏
- 关键词：猪瘟病毒E2基因伪狂犬病毒
- 中国特有小型猪内源性反转录病毒检测及变异特征研究
- 活细胞、组织、器官在不同物种间的移植被应用于缓解人源供体器官的短缺。考虑到器官大小、生理学特点、伦理道德等方面的问题，猪被认为是最合适的异种移植供体。然而猪内源性反转录病毒（porcine endogenous retr...
- 张念
- 关键词：拷贝数
- 文献传递
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5和M基因重组腺病毒的构建及表达被引量：2
- 2012年
- 为构建猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)重组腺病毒活载体疫苗,本研究将PRRSV GP5和M基因串联表达盒定向克隆至穿梭质粒pacAd5CMVK-NpA多克隆位点处,获得重组穿梭质粒pacAd5CMVK-NpA-GP5-M,与骨架质粒pacAd5 9.2-100共转染293AD细胞,包装出含有GP5和M基因的重组腺病毒rAd5-GP5-M。应用PCR技术、间接免疫荧光、Western blot分析,结果表明,GP5和M基因已经被成功整合到了腺病毒基因组上,且GP5和M蛋白在293AD细胞上均得到了表达;滴度测定表明,该重组腺病毒rAd5v-GP5-M的TCID50为10-6.5/mL;连续传代试验表明该重组腺病毒可在细胞内稳定繁殖,有效地转录并表达GP5和M蛋白,具有较高的遗传稳定性。该研究为PRRSV重组腺病毒疫苗的研制打下了基础。
- 高博马玲张念毛燕陈凤莲张守峰刘烨张菲扈荣良吴健敏
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5基因M基因重组腺病毒
- 反转录病毒载体介导的猪APOBEC3F在猪源细胞PK15中的表达
- 2012年
- 目的：利用反转录病毒载体构建猪载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白（APOBEC）3F重组质粒,并实现其在猪肾细胞PK15中的表达。方法：用RT-PCR方法扩增五指山猪来源的外周血淋巴细胞APOBEC3F基因,将其定点插入反转录病毒载体pMSCV neo中,同时于插入位点两侧分别添加FLAG和GFP标签,构建重组质粒pMSCV-FLAG-A3F-GFP,并进行酶切、测序鉴定;将鉴定正确的重组质粒与pVSV-G、pGag-Pol共转染包装细胞HEK293T,分别于转染后48~72 h收集细胞的培养上清以获得假型病毒粒子;用该假型病毒感染猪源细胞PK15,通过PCR、Western印迹检测目的基因的整合及表达。结果：PCR扩增到1254 bp的猪APOBEC3F基因,重组质粒pMSCV-FLAG-A3F-GFP经酶切、测序,结果无误;3质粒共转染HEK293T细胞包装出的假型病毒感染PK15细胞后观察到GFP表达;从感染假型病毒的PK15细胞基因组中扩增到1254 bp的猪APOBEC3F基因,Western印迹检测到78.1×103的猪APOBEC3F蛋白的表达。结论：实现了反转录病毒载体介导的猪APOBEC3F在猪源细胞PK15中的整合与表达,为深入研究该分子对猪内源性反转录病毒（PERV）的抑制作用奠定了基础。
- 罗佳张念孙宇吴健敏陆芹章马玉媛章金刚
- 关键词：反转录病毒载体真核表达
