孙杰
- 作品数：27 被引量：59H指数：5
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- 人及小鼠CXCR3基因细胞株的构建与鼠抗人CXCR3单克隆抗体的研制及生物学功能研究
- 孙杰
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- 小鼠CXCR3基因转染细胞株的构建、鉴定及生物学功能研究被引量：3
- 2010年
- 目的：构建含有小鼠CXCR3基因的重组逆转录病毒载体，获得稳定表达小鼠CXCR3分子的基因转染细胞株L929-mCXCR3，研究CXCR3与其配IP-10相互作用引起的L929-mCXCR3的迁移效应。方法：取1只雌性BALB／c小鼠（7周龄），尾静脉注射0．5mgConA／只，12h后取其脾脏，研磨成细胞悬液后，分离获得脾脏细胞；用含5万U／L人IL-2的RPMll640培养基培养3d；收集细胞，TRIzol一步法抽提总RNA，RT—PCR扩增小鼠CXCR3全长基因，装入逆转录病毒载体pEGZ—term，与两辅助病毒载体脂质体法共转染包装细胞293T，收集含完整逆转录病毒颗粒的293T培养上清感染L929细胞，重复感染3次，筛选获得含Zeocin抗性的稳定表达小鼠CXCR3分子的基因转染细胞株。采用流式细胞术（FCM）和RT—PCR对CXCR3分子的表达进行鉴定。Transwell分析基因转染细胞株L929-mCXCR3在IP．10作用下的迁移能力。结果：构建了含小鼠CXCR3基因的重组逆转录病毒载体，建立了稳定表达小鼠CXCR3分子的基因转染细胞株L929-mCXCR3，其膜表面CXCR3分子阳性表达率为97．0％；该基因转染细胞株在IP-10的介导下可定向迁移，迁移率为4．356％。结论：L929-mCXCR3细胞株为研究CXCR3信号通路的生物学特性、肿瘤转移模型的建立和抗小鼠CXCR3单克隆抗体的研制奠定了基础。
- 孙杰刘玉华陈永井郭静雅陈昌友胡玲玲陈明心邱玉华
- 关键词：CXCR3趋化因子基因转染逆转录病毒
- 担载梯度浓度生物活性分子的有序纤维支架、制法及应用
- 本发明公开了一种担载梯度浓度生物活性分子的有序纤维支架、制法及应用。所述有序纤维支架包括：主要由复数根纤维组成的支架基体，所述支架基体中心处的纤维密度大于外周部的纤维密度，所述纤维主要由胶原蛋白和高分子聚合物组成；以及，...
- 戴建武李晓然李梦媛孙杰
- 文献传递
- 复合梯度浓度生物活性因子组织支架、其制备方法及应用
- 本发明公开了一种复合梯度浓度生物活性因子组织支架及其制备方法。所述支架包括：支架基体以及分布在所述支架基体上的生物活性因子涂层；并且，在所述涂层平面上的至少两个不同区域内的生物活性因子的含量不同；其制备方法包括：采用静电...
- 戴建武李晓然孙杰梁辉
- 文献传递
- CD80鼠-人嵌合抗体的CHO细胞表达及体外生物学功能的初步研究被引量：12
- 2009年
- 目的:CHO细胞表达抗人CD80鼠-人嵌合抗体ch4E5,并研究其在体外阻断CD80介导的共刺激信号转导的生物学功能。方法:构建含有嵌合重、轻链基因的表达载体pIRES/ch4E5;表达载体先转染293T细胞,FCM检测到ch4E5抗体的瞬时表达后,表达载体再转染CHO细胞,构建稳定表达细胞株CHO-ch4E5;ProteinG亲和层析法从CHO-ch4E5细胞无血清培养上清中纯化ch4E5抗体,FCM检测ch4E5抗体对膜型CD80的识别;以丝裂霉素处理的正常人外周血单核细胞PBMCs为刺激细胞,以异体正常人外周血淋巴细胞PBLs为反应细胞,用MTT法分析ch4E5抗体的阻断作用。结果:ch4E5抗体在293T细胞的瞬时表达于48小时达到高峰,上清与L929-B7-1细胞结合率为96.0%;CHO-ch4E5细胞持续表达ch4E5抗体,其培养上清与L929-B7-1细胞结合率为95.7%;3天培养上清中,ch4E5抗体的产率约为5.56mg/L;ch4E5抗体和L929-B7-1、Daudi、Sub-T细胞结合率分别为94.1%、25.7%、23.5%;ch4E5抗体可以阻断CD80介导的共刺激信号转导,抑制异体PBLs的体外增殖。结论:在CHO细胞中成功表达了抗人CD80鼠-人嵌合抗体ch4E5,在体外该嵌合抗体具有亲本抗体阻断CD80介导的共刺激信号的生物学活性。
- 徐耀瑜胡玲玲陈永井程钢罗先富孙杰刘玉华王艳茹陈明心邱玉华
- 关键词：CD80嵌合抗体阻断作用
- 抗人CD80单链抗体的构建、表达及与抗原结合的特性分析被引量：5
- 2011年
- 目的:构建及表达抗人CD80单链抗体(ScFv),并初步研究其生物学功能。方法:采用RT-PCR法从分泌鼠抗人CD80mAb的杂交瘤细胞株(4E5)中克隆VH和VL基因。用重叠延伸拼接PCR方法构建具有前导肽的L-VH-Linker-VL单链抗体基因,并亚克隆至pIRES2-EGFP表达载体,脂质体法转染中华仓鼠卵巢细胞(CHO),G418加压筛选。纯化抗CD80-ScFv,并分析其对膜型CD80的识别。竞争抑制实验分析抗CD80-ScFv与相应抗原的结合能力。MTT法体外分析抗CD80-ScFv对CD80介导的共刺激信号的阻断作用。结果:构建的抗CD80-ScFv基因全长为828 bp,经测序含有信号肽和连接肽。实验获得稳定表达细胞株SA-Ⅱ,其培养上清与L929-CD80细胞的阳性结合率达98%以上。抗体纯化后产率约为15.12 mg/L,其能够识别Raji和Daudi细胞天然表达的CD80分子,结合率分别为96.6%和95.0%。抗CD80-ScFv对鼠源亲本抗体4E5与抗原结合的竞争抑制率达98.67%,并能阻断CD80介导的共刺激信号转导,抑制PBMC的增殖,增殖率下降43.48%。结论:成功建立了抗CD80-ScFv CHO细胞的表达株(命名为SA-Ⅱ),该抗体能够特异识别细胞表面膜型CD80分子并介导相应的生物学功能。
- 陈昌友郭静雅陈永井陈明心孙杰张彦军黄赛男朱华亭邱玉华
- 关键词：CD80单链抗体真核表达
- 担载梯度浓度生物活性分子的有序纤维支架、制法及应用
- 本发明公开了一种担载梯度浓度生物活性分子的有序纤维支架、制法及应用。所述有序纤维支架包括：主要由复数根纤维组成的支架基体，所述支架基体中心处的纤维密度大于外周部的纤维密度，所述纤维主要由胶原蛋白和高分子聚合物组成；以及，...
- 戴建武李晓然李梦媛孙杰
- 文献传递
- 人CXCR3基因转染细胞株的构建、鉴定及初步功能研究被引量：5
- 2010年
- 目的:构建含有人CXCR3基因的重组逆转录病毒载体,获得稳定表达人CXCR3分子的基因转染细胞株L929-CXCR3,研究CXCR3与其配体Mig、IP-10及I-TAC相互作用引起的L929-CXCR3的迁移效应。方法:TRIzol一步法从经PHA和IL-2活化的人PBMC中抽提总RNA,RT-PCR扩增人CXCR3全长基因,装入逆转录病毒载体pEGZ-term,与两辅助病毒载体脂质体法共转染包装细胞293T,收集培养上清感染L929细胞,500μg/mlzeocin加压筛选获得稳定表达人CXCR3分子的基因转染细胞株L929-CXCR3。采用流式细胞术和RT-PCR分别从蛋白及基因水平对CXCR3的表达进行鉴定。Transwell分析L929-CXCR3细胞在Mig、IP-10及I-TAC作用下的迁移率。结果:构建了含人CXCR3基因的重组逆转录病毒载体,建立了人CXCR3基因转染细胞株L929-CXCR3,其膜表面CXCR3分子的阳性表达率为98.4%;趋化L929-CXCR3发生迁移的最小配体浓度分别为Mig10ng/ml、IP-105ng/ml及I-TAC1ng/ml,相应迁移率分别为2.46%、2.34%及2.24%。结论:L929-CXCR3细胞株的建立为研究CXCR3信号转导与生物学功能及制备相应的单克隆抗体奠定了基础。
- 孙杰刘玉华陈永井郭静雅陈昌友胡玲玲陈明心杜阳阳徐耀瑜邱玉华
- 关键词：CXCR3趋化因子基因转染逆转录病毒
- 再生多孔丝素膜在创面的降解及对免疫细胞的影响被引量：4
- 2010年
- 目的研究再生多孔丝素膜在创伤局部应用后的降解吸收及对免疫细胞的影响。方法取SD大鼠,切除背部皮肤建立创面,面积为2cm×2cm。将125I标记的再生多孔丝素膜覆盖在创伤面,再将切除皮肤的表皮层盖在再生多孔丝素膜上进行缝合。在术后3h和3、6、13、20、27、34、41、48、55d,采用单光子发射计算机断层成像术(SPECT)进行显像,示踪至同位素信号消失。处死大鼠,取创面皮肤经HE染色后对其中的炎症细胞进行分析。脾脏细胞经双色免疫荧光及流式细胞术检测CD3+CD25+/CD3+T细胞的比率。结果大鼠种植再生多孔丝素膜55d,SPECT显像的同位素信号基本消失。创面皮肤下HE染色观察到少量的炎症细胞,未观察到残留丝素成分。实验组脾脏中CD3+CD25+/CD3+T细胞的百分率为(7.34±1.85)%,对照组为(7.18±0.37)%,两者无明显差异(P>0.05)。结论再生多孔丝素膜创面局部应用可在2个月内完全降解吸收,对免疫细胞的激发作用较小,是一种较为理想的创面修复组织工程材料。
- 陈明心章斌陈昌友朱晓燕李明忠刘雨张琴闫书芹苏成海孙杰邱玉华
- 关键词：炎症反应免疫细胞
- 抗人CXCR3分子单抗及其应用
- 本发明公开了一种杂交瘤细胞株以及由该杂交瘤细胞株产生的一种抗人CXCR3分子单抗，所述杂交瘤细胞株的保藏信息为：保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微...
- 邱玉华孙杰朱华亭陈永井
