孔健
- 作品数：27 被引量：45H指数：4
- 供职机构：北京生物制品研究所更多>>
- 发文基金：国家科技攻关计划卫生部科学研究基金“九五”国家科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 麻疹IgG抗体EIA检测试剂盒的研制及应用被引量：2
- 2008年
- 【目的】研制检测麻疹IgG抗体的酶联免疫（EIA）试剂，用于确定人群免疫状况、考核麻疹疫苗接种效果及辅助诊断麻疹病毒的感染。【方法】以经超滤、PEG沉淀和蔗糖密度梯度超速离心纯化后的沪191株麻疹病毒为包被抗原，经试验确定EIA检测的最佳反应条件，最终建立麻疹病毒IgGEIA检测试剂盒，并与血凝抑制实验（HI）及SIGMA麻疹IgGEIA检测试剂盒作比较。【结果】纯化后沪191株麻疹病毒的比活性为775．76HAU／mg，以该纯化抗原制备的EIA检测试剂盒的检测下限为12．5mlU／ml，具有良好的线性（r=0．997）和重复性（CV为4．72％～13．51％）。4℃放置6个月、37℃放置3d，该试剂的灵敏度不变，说明其具有良好的稳定性。与血凝抑制实验（HI）相比，该试剂的灵敏度为99．46％，特异度为81．82％，一致性为97．58％，与SIGMA麻疹IgGEIA诊断试剂盒的一致率为95．12％。【结论】该检测试剂盒可以正确评价人体麻疹免疫状况，为流行病学调查提供了一个可靠、客观、灵敏和快速的手段。
- 詹曦菁秦晓勇石枫孔健
- 关键词：麻疹IGG抗体
- 空斑减少中和试验与血凝抑制试验测定血清抗麻疹病毒抗体的比较被引量：2
- 1996年
- 为了对比空斑减少中和试验与血凝抑制试验在评价人血清抗麻疹病毒抗体测定结果时的异同,对328名3～6月龄儿童接种沪191麻疹疫苗前后的血清样本用以上两种方法进行了测定。结果表明,在测定免前血清抗麻疹病毒抗体时,空斑减少中和试验比血凝抑制试验灵敏,在测定免后血清抗麻疹病毒抗体时,两种方法测定结果无显著性差异。空斑减少中和试验能测出婴儿血清中存在的极少量的母传抗体,在考核母传抗体对麻疹疫苗免疫效果的影响时,应考虑选用。
- 孔健郭绍红迮文远
- 关键词：血凝抑制试验麻疹疫苗
- 抗CEA嵌合小分子抗体的构建与表达被引量：4
- 2001年
- 目的构建表达抗 CEA小分子抗体 ,以利于放射免疫诊断及导向治疗。方法构建 CEA单链抗体基因 ,克隆入载体 p Kp L - 3a,在大肠杆菌中包涵体表达 ,EL ISA检测活性。将轻重链基因克隆入分泌型表达载体 p SCMH,在大肠杆菌中表达 ,EL ISA检测活性。将 CEA嵌合抗体的轻链和 Fd基因克隆入杆状病毒表达载体 p Ac U W5 1中 ,在 sf9细胞中分泌表达 ,EL ISA检测活性及测定产量 ,竞争抑制 EL ISA测定其识别的抗原表位。结果多种方法复性的包涵体及原核分泌表达的单链抗体未测到活性。昆虫细胞中表达的小分子抗体具抗体活性 ,产量为 1.7μg/m L,竞争抑制实验显示其与亲本鼠单抗 C5 0识别相同的表位。结论该 CEA抗体基因在大肠杆菌中不能表达出有功能的分子 ,而在昆虫细胞中表达了具活性抗体分子 ;某些抗体基因只有在真核细胞中才能表达出有功能的抗体分子。
- 赵泽国冉宇靓孔健孙立新遇垅刘军杨治华
- 关键词：癌胚抗原小分子抗体抗体工程
- 用微量单管RT－PCR快速检测及定型脊髓灰质炎病毒被引量：1
- 1996年
- 介绍一种逆转录─聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）的简单快速检测和定型脊髓灰质炎病毒（ＰＶ）的方法，无需提取ＰＶＲＮＡ，共用一种缓冲系统，将ＲＴ和ＰＣＲ试剂混合在２０μＬ反应体系中，整个操作可置于一不间断温度循环程度程序中完成。一步法ＲＴ－ＰＣＲ与常规ＲＴ－ＰＣＲ及中和抗体试验对ＰＶ的检测结果完全一致，它的检测敏感度可达５ＴＣＩＤ（５０）／ｍＬ。该法需要的时间，费用和污染的都大大减少，而且特别适于临床常规诊断和鉴别ＰＶ的需要。
- 刘巍古绍文王树声梁善凡班华国陈杰孔健
- 关键词：脊髓灰质炎病毒聚合酶链反应RT-PCR
- 吸附A群脑膜炎球菌蛋白菌苗接种婴幼儿的反应及血清学效果被引量：2
- 1995年
- 从A群脑脊髓膜炎奈瑟氏菌（78051，血清型4型）提取的外膜蛋白制备成菌苗，接种363例6个月到2岁的婴幼儿，结果局部及全身反应轻微，未发现局部强反应及无菌化脓。中度反应发生率低于0．7％，48小时消失。免后6～72小时内中度以上发烧率，50μg蛋白菌苗组为1．1％～4．3％，25μg蛋白菌苗组为0．5％～1．6％，30μg多糖菌苗组为0～1．2％，吸附剂对照组为0～2．1％。免后人血清的杀菌抗体几何平均滴度，蛋白菌苗组显著高于多糖菌苗组及吸附剂对照组（P＜0．05）；免后6个月时两个蛋白菌苗组的阳转率显著高于多糖菌苗组。提示蛋白菌苗免后所产生的杀菌抗体较多糖菌苗持久，可考虑以A群蛋白菌苗为婴幼儿免疫的候选菌苗。
- 董春明郭绍红孔健陈海平魏荣泰王卫民尹清太王立亚迮文远
- 关键词：多糖菌苗免疫接种脑膜炎
- 不同色谱介质用于鼠腹水中低等电点单克隆抗体的纯化被引量：2
- 1998年
- 从一低等电点单克隆抗体（C50，CEA单抗）鼠腹水中纯化单抗，对10种色谱介质在其离子强度、pH、流速等最佳的条件下的纯化效果进行了对比，结果表明腹水先用40％饱和硫酸铵处理后，经一次色谱柱纯化，纯度可达83．6％～96％，回收率为50％～94％。在各种阴离子交换介质中，QSepharoseFF的效果最好，弱阴离子交换介质WhatmanDE52的效果较差。尽管两种强阳离子交换介质的效果较好，但劣于QSepharoseFF及亲会色谱介质HiTrapProteinG。Poros50A纯化IgG1类单抗时需要较高的盐浓度，不能作为最佳候选介质。SephacrylS-200HR及PhenylSepharose6FF纯化产物回收率及纯度均较低，不适于该单抗的纯化。
- 蒋先敏孔健李宇静赵莉曹竹安
- 关键词：单克隆抗体纯化
- Edmonston-Zargreb和沪191麻疹疫苗免疫婴儿的血清学研究被引量：1
- 1994年
- 研究目的在于评价两种疫苗免疫婴儿的血清学效果和接种后的反应。所用两种疫苗的滴度均为3．5LogTCID50/0．1ml．婴儿被随机分人接种E-Z0．5ml、沪1910．2ml和沪1910．5ml各组，3个组中和抗体阳转率、＞200mlu／ml阳性率均无显著性差异（x2=0．189，0.886；P＞0005）；沪1910．5ml组血凝抑制抗体的阳转率、＞200mlu／ml阳性率均高于同剂量E-Z组（X2=561，5.4；P＜0.05）。免前未测到抗体者的中和抗体、血凝抑制抗体阳转率显著地高于免前测到抗体者（X2=7．09～36．907，P＜0．01～0．001）。沪191和E-Z麻疹疫苗接种后的皮疹率分别为47.8％和16.5％，差异十分显著。未观察到严重不良反应。
- 孔健陈海平董春明郭绍红刘保奎张国华迮文远陈杰刘伟王树声李荣健周国屏陈彩平
- 关键词：麻疹疫苗基础免疫接种血清学
- CEA单链抗体基因在大肠杆菌中的克隆及表达
- 1998年
- 目的尝试将ＣＥＡ单链抗体在大肠杆菌中进行高效表达。方法以ＣＥＡ单链抗体基因为模板，设计４对引物，ＰＣＲ扩增，将４条ＤＮＡ扩增片段分别插入原核表达载体ｐＢＶ２２０中；重组质粒转染大肠杆菌ＴＧ１，４２℃热诱导外源蛋白的表达；包涵体经８ｍｏｌ／Ｌ脲溶解及谷胱甘肽系统复性；过离子交换柱进行纯化；ＥＬＩＳＡ夹心法测活性。结果得到了ＳＤ序列与起始密码ＡＴＧ分别相隔着５，６，７，８个核苷酸的重组质粒；ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示转染入重组质粒的ＴＧ１菌经热诱导后有分子量约为３×１０４的外源蛋白，表达量最高达９３０ｍｇ／Ｌ培养液，约占菌体总蛋白的５０％；ＥＬＩＳＡ活性测定结果表明复性后的ＳｃＦｖ有较高的抗原结合活性。结论ＣＥＡ单链抗体在大肠杆菌中获得了较高水平的表达，且经复性后有较高的抗原结合活性。
- 王冠华孔健
- 关键词：单链抗体癌胚抗原克隆
- 原核分泌型表达载体的构建及癌胚抗原单链抗体的表达被引量：2
- 1998年
- 目的构建分泌型载体并表达癌胚抗原单链抗体。方法以ｐＧＥＭ－１１ｚｆ（＋）为基础，插入化学合成的１４个寡核苷酸片段（共１７６ｂｐ），构建成含核糖体结合位点（ＲＢＳ）、翻译起始点（ＡＴＧ）、果胶酶信号肽基因（ｐｅｌＢ）和翻译终止点（ＴＡＡ）的分泌型表达载体（ＲＰＹ）。化学合成带有抗体重、轻链可变区基因插入位点和惰性连接序列的８２ｂｐ片段，并克隆到ＲＰＹｐｅｌＢ信号肽的下游，构建成抗体分泌型表达载体ＲＰＹＡ。将ＣＥＡ单抗重、轻链可变区基因（ＶＨ、ＶＬ）插入到ＲＰＹＡ的相应位点，转化大肠杆菌ＨＢ２１５１，ＩＰＴＧ诱导表达。结果序列测定表明ＲＰＹＡ的序列与原设计序列一致，免疫印迹实验表明表达产物具有ＣＥＡ结合活性，分子量为２．６×１０３，胞浆内结合有ｐｅｌＢ信号肽的表达产物分子量为３２×１０３。
- 章美云杨青赵莉孔健
- 关键词：癌胚抗原单链抗体基因表达寡核苷酸
- 抗癌胚抗原单克隆抗体在肿瘤免疫显像中的应用
- 1996年
- 本文简述了放射性同位素单克隆抗体结合物在人体内的特性、代谢及肿瘤免疫显像的特点，并对抗癌胚抗原单抗在各种肿瘤免疫显像中的应用进行了分类介绍。
- 孔健
- 关键词：抗癌胚抗原单克隆抗体肿瘤免疫显像
